人干扰素诱导蛋白10(IP-10/CXCL10)ELISA试剂盒说明书

产品名称：人干扰素诱导蛋白10(IP-10/CXCL10)ELISA试剂盒
英文名称：Human IP-10/CXCL10 elisa kit
产品规格:48T/96T
保存条件:2-8℃
用途：仅供科研使用！

背景：
趋化因子配体10(CXCL10)又称为γ-干扰素诱导蛋白10(IP-10)或微小诱导细胞因子B10，是属于CXC趋化因子家族的小分子量细胞因子。多种类型的细胞对IFN-γ产生应答后可分泌IP-10，包括单核细胞、内皮细胞和成纤维细胞等。IP-10具有多种功能，如对单核/巨噬细胞、T细胞、NK细胞和树突细胞的趋化作用，促进T细胞黏附于内皮细胞，抗肿瘤活性和抑制骨髓集落形成和血管生成。

检测原理：
将目标抗体包被于96孔微孔板中，制成固相载体，向微孔中分别加入标准品或标本，其中的目标连接于固相载体上的抗体结合，然后加入辣根过氧化物酶标记的抗体，将未结合的抗体洗净后再次彻底洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的目标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（O.D.值），计算样品浓度。

自备物品:
酶标仪(450nm)
高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
37℃恒温箱

自备的设备及试剂:
1. 450±10nm滤光片的酶标仪(建议仪器使用前提前预热)
2. 单道或多道微量加液器及吸头
3. 稀释样品的EP管
4. 蒸馏水或去离子水
5. 吸水纸
6. 盛放洗液的容器

 操作流程如下:
(1)待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔,加入纯细胞裂解液100μl。
(2)酶标板置4℃,包被过夜。
(3)洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去),之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
(4)阴性对照孔每孔加入PBS 50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的抗体工作液50μl。
(5)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀释的抗体工作液 100μl。
(8)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB显色液 100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。
(12)分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,测得的OD值为两者之差(W1-W2),以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
(13)数据处理:在得出标本(S)和阴性对照(N)的 OD值后,计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。