2023/11/03 10:54
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产品配置单:
胎牛血清(无菌采制)
型号: 100ml/200ml/500ml
产地:
品牌: 远慕
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方案详情:
细胞融合(cell
fusion),细胞遗传学名词,是在自发或人工诱导下,两个细胞或原生质体融合形成一个杂种细胞。基本过程包括细胞融合形成异核体(heterokaryon)、异核体通过细胞有丝分裂进行核融合、最终形成单核的杂种细胞。细胞融合可作为一种实验方法被广泛适用于单克隆抗体的制备,膜蛋白的研究。
细胞融合实验所需试剂:
(1)胎牛血清或小牛血清
(2)培养基:细胞融合常用的培养液有DMEM、RPMI 1640 及无血清培养基等。DMEM有高糖(4500mg/L)及低糖(1000mg/L)之分。杂交瘤细胞在上述几种培养基中均能良好的生长与增殖
(3)HAT及HT培养液:HAT、HT以五十分之一的比例加入培养基( DMEM或RPMI 1640)
(4)聚乙二醇(PEG)溶液:称取一定量的PEG,高压蒸汽灭菌(8磅30分钟),待其冷至50℃左右,与等体积的RPMI1640混合,即为50%的PEG溶液,封口后4℃放置备用。用于细胞融合的PEG的分子量可在1000-6000之间,目前已有商品化的50%PEG溶液可直接用于细胞融合。
细胞融合的方法:
动物细胞杂交或细胞融合
将两个不同种的亲本细胞A和B,以灭活的仙台病毒或聚乙二醇(PEG)为融合诱导剂,使A和B两细胞融合成为一个具两个遗传性不同核的异核体(如遗传性相同的核融合在一起叫同核体)。
随后异核体经有丝分裂成为两个具有A和B两亲本的杂种融合核。AB杂种经多次分裂,B亲本的染色体会逐渐减少到一个或完全消失。
PEG促进细胞融合注意事项:
(1)事先做好两种原生质体融合的识别标记,如色素、缺陷型、抗性标记等。
(2)原生质体或细胞密度应在105个/ml,两种原生质体或细胞按1:1等量混合
(3)PEG诱导融合的效果,同分子量大小及浓度高低密切相关。分子量和浓度愈大,促进细胞融合的能力愈高,而其粘度及对细胞的毒性也随之增大,故通常以选用分子4000-6000浓度30-50%的PEG进行融合为宜。
(4)PEG使细胞融合或致死剂量界限很狭小,为达到成功有效的融合,还必须严格掌握PEG的处理时间。一般加入PEG后,24℃培育10-20min(注意时间宜短不宜长,过长使原生质体周围包裹一层膜形成凝集体,降低融合率),缓缓加入高钙离子溶液15min后用冲洗液清洗,离心收集细胞或原生质体。
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