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聚合酶链式反应（PCR）详细实验步骤
2023/06/30 11:18
阅读：112
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方案摘要：
产品配置单：
动物组织直接PCR试剂盒
型号： 50 ×20μl rxns
产地：
品牌： 远慕
¥1
参考报价
动物组织直接PCR试剂盒（UNG）(5月之后）
型号： 50 ×20μl rxns
产地：
品牌： 远慕
¥1
参考报价
方案详情：
一、准备工作
1、实验器具与材料：
（1）移液枪：200ul、10ul
（2）吸头：200ul、20ul
（3）吸头台：放置200ul和20ul的吸头一个
（4）EP管1.5ml、100ul
2、实验器具的处理与准备
塑料制品：（包括吸头、EP管等）
送至高压3次，试验前将枪头放入吸头台。
3、试剂配制和准备：
（1） 双蒸水： 100ml盐水瓶内装40ml蒸馏水，送至高压，后分装到几个1。5mlEP管中，-20℃中保存备用。
（2） PCR中所需要的各种试剂
二、PCR时注意事项：
佩戴一次性手套，同时避免戴上的一次性的手套接触可疑污染物。
三、PCR步骤
1、准备100ul EP管
2、依次在管中加入：（50ul反应体系）
ddH2O37.5ul×
10mM dNTP1ul×
10×PCR buffer5ul×
25mM MgCl2
（加之前要摇匀）3ul×
上游引物1ul×
下游引物1ul×
模板cDNA1ul
3、稍离心
4、100℃沸水浴1分钟
5、趁热加入Tag酶0.5ul（冰上操作）
6、再加入50ul液体石蜡封闭
7、10000rmp离心1分钟
8、PCR条件
94℃ 1min
58℃ 50sec
72℃ 1min30sec
进行40个循环，然后72℃ 10min 完后4℃保温。
9、10000rmp离心5min
10、将下层水相转入新的0.65mlEP管中，－20℃保存。
下载本篇解决方案：
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企业名称： 上海远慕生物科技有限公司
企业地址： 上海浦东新区 联系人： 安小姐 邮编： 201600 联系电话： 400-860-5168转3328
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