植物有丝分裂染色体压片实验

目的: 植物染色体的常规压片技术可以用于观察植物染色体常用的方法。

实验方法原理:
细胞的有丝分裂是一个连续动态的变化过程，但可以通过它的形态变化，特别是细胞核中的染色体行为，人为地划分阶段，并进行比较研究。在自然状态下，一大群处于各个分裂期的细胞混杂在一起。必须仔细观察，寻找有丝分裂过程各期典型形态特征的细胞，从而建立起细胞周期的概念。
植物的分生组织（如根尖分生区、茎尖生长点等）细胞，能够通过有丝分裂增加其数目。依据植物细胞分裂周期中各个时期细胞中染色质或染色体的形态、数目、位置变化，确定该细胞所处的时期。为了看清染色体或染色质，要用碱性染料将其染色。

实验材料  
黑麦 ( Secale cereale) 、 大麦 ( Hordeu m vulgare) 种子 洋葱 ( A llium cepa) 鳞茎

试剂、试剂盒  
对二氯苯饱和溶液 甲醇 冰醋酸 70 % 酒精 1mol L 盐酸 石炭酸品红染液

仪器、耗材  
恒温培养箱 恒温水浴锅 显微镜 载玻片及盖玻片

实验步骤:
1.取材:先将种子浸泡若干小时,然后转入一垫有湿润滤纸的培养皿中,置25℃恒温培养箱中萌发,待幼根长至1～2cm时取材;或鳞茎置于盛水的培养皿中,放在25℃恒温培养箱中,待根尖长至2cm左右时取根尖(顶端0.5～1cm)
2.预处理:将取下的根尖置于盛有对二氯苯饱和水溶液的青霉素瓶中,浸泡处理3～4h。
3.固定:经过预处理的根尖,用水洗净,用甲醇-冰醋酸(3∶1)固定液固定6～24h。固定材料可转入70%酒精中,于4℃冰箱保存备用。
4.解离:倒去固定液,用蒸馏水漂洗2～3次,再放入预热的1mol/L盐酸中,60℃水浴中解离8～12min,然后用蒸馏水漂洗2～3次。
5.染色:将根尖放在载玻片上,切下顶端1～2mm,滴加石炭酸品红染液进行染色,5min左右即可。
6.压片:盖上盖玻片,用镊子柄轻轻敲打盖玻片,分生组织细胞即铺成薄薄一层;然后用滤纸吸去多余染液,用铅笔的橡皮头敲打,使细胞和染色体分散。
7.镜检观察:在显微镜下仔细观察,寻找染色体轮廓清晰、染色适中、分散而不重叠的分裂中期相。
8.封片:把压好的染色体标本放在冰箱冷冻室冰冻,然后用刀片将盖玻片快速掀开,盖玻片和载玻片同时于37℃左右的烘箱中烘干。载玻片、盖玻片经二甲苯透明后,滴中性树胶封片,即制成永久制片。载玻片、盖玻片分别用新的盖玻片、载玻片封片。
9.黑麦、大麦、洋葱的染色体数目均为2n=14。选择较好的分裂相用显微镜上配备的数码照相装置摄影

注意事项  
在显微镜的一个视野中看到的细胞，多数处于细胞有丝分裂的间期，因为在一个细胞周期中，间期所占的时间占整个细胞周期的90%一95%，时间与细胞数目成正比。另外，在一个视野中，往往不容易找全有丝分裂过程中各个时期的细胞，可以慢慢地移动装片，从邻近的分生区细胞中寻找。

有丝分裂的意义：
一、维持个体的正常生长和发育（组织及细胞间遗传组成的一致性）；
二、保证物种的连续性和稳定性（单细胞生物及无性繁殖生物个体间及世代间的遗传组成的一致性）。
来源：《遗传学实验教程》