2019/07/16 09:54
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产品配置单:
4号染色体开放阅读框40抗体
型号: 0.2ml/200μg
产地:
品牌: 远慕
¥1
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ADRA2肾上腺素能受体2抗体
型号: 0.1ml/100μg,0.2ml/200μg
产地:
品牌: 远慕
¥1
参考报价
去整合素样金属蛋白酶32抗体
型号: 0.2ml/200μg
产地:
品牌: 远慕
¥1
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CD30抗体
型号: 0.1ml/100μg,0.2ml/200μg
产地:
品牌: 远慕
¥1
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方案详情:
实验目的:
主要用于科研样品的检测。
实验方法原理:
取一定量的细胞悬液,先加入特异的第1抗体,待反应完全后洗去未结合抗体,在加入荧光标记的第二抗体,生成抗原-抗体复合物,以流式细胞仪检测其上标记的荧光素被激发后发出的荧光。
实验材料: 实验样品
试剂 试剂盒:抗体、PBS溶液
仪器 耗材: 移液器 移液吸头 离心机
实验步骤:
一、不同来源样品的处理
1 . 培养细胞
(1)培养细胞用0.25%的胰酶消化。
(2)PBS或生理盐水洗涤细胞2次,再用PBS或生理盐水悬浮细胞,加入预冷的无水乙醇,终浓度为60%——70% ,快速混匀,并用封口膜封口,置4℃下可保存15天左右。
2. 新鲜标本
(1)将标本切成1——2mm3的小块。
(2)PBS或生理盐水清洗后去除上清,加入0.2%胶原酶(或0.15%胰蛋白酶)37℃消化10——30min(根据实验及不同组织确定),并不断振动。
(3)300目尼龙筛过滤,除去组织团块,PBS洗涤2次,300g离心5min,获得已消化的细胞。
3. 石蜡包埋标本
(1)标本在切片机上切取3——5片50μm厚的组织片。
(2)将切片彻底脱蜡,梯度乙醇(100%、95%、70%)及蒸馏水水化。
(3)0.5%胃蛋白酶(或胰蛋白酶)37℃消化30min,每隔10min振动1次。
(4)300目尼龙筛过滤,获得的细胞悬液PBS洗涤2次,300xg离心5min。
注意:脱蜡一定要完全(若加入100%乙醇无絮状物飘起即可);切片厚薄适宜,太薄碎片多,影响FCM分析结果,太厚易造成脱蜡不净;注意掌握消化时间,避免已释放的细胞被消化。
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