TRIzol RNA提取方法

研究基因的表达和调控时常常要从组织和细胞中分离和纯化RNA。

TRIzol RNA提取方法：

（1）操作简单的，提取方便，回收率高；

（2）提取的RNA的质量高，对cDNA库，RT-PCR和Northern Blot等分子生物学实验起着很重要的影响。

实验原理:

Trizol是一种新型总RNA抽提试剂，采用变性剂即内含异硫氰酸胍酚和β-巯基乙醇等变性物质，能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出的核酸酶。异硫氰酸胍属于解偶剂，是一类强力的蛋白质变性剂，可溶解蛋白质，并使蛋白质二级结构消失，细胞结构降解，核蛋白迅速与核酸分离。β-巯基乙醇主要破坏RNase蛋白质中的二硫键。

细胞裂解后，细胞释放出蛋白质、DNA、RNA等物质，再根据它们在不同的PH值和不同极性溶剂的溶解度不同而使得分开。

实验材料: 细胞样品

试剂\试剂盒: TRIzol试剂  氯仿  异丙醇  75%乙醇   DEPC H2O

仪器\耗材: 离心管   离心机  EP管  匀浆器  移液管  冰袋   漩涡振荡器

实验步骤:

1. 样品处理：

（1） 培养细胞： 收获细胞1-5×107，移入1.5ml离心管中，加入1ml Trizol，混匀，室温静置5min。

（2） 组织：取50-100mg组织（新鲜或-70℃及液氮中保存的组织均可）置1.5ml离心管中，加入1ml Trizol充分匀浆，室温静置５min。

2. 加入0.2ml氯仿，振荡15s，静置2min。

3. 4℃离心，12000g×15min，取上清。

4. 加入0.5ml异丙醇，将管中液体轻轻混匀，室温静置10min。

5. 4℃离心，12000g×10min，弃上清。

6. 加入1ml 75%乙醇，轻轻洗涤沉淀。4℃，7500g×5min，弃上清。

7. 晾干，加入适量的DEPC H2O溶解（65℃促溶10-15min）

注意事项:

1.样品量和Trizol的加入量一定要按步骤（1）的比例，不能随意增加样品量或减少Trizol量，否则会使内源性RNase的抑制不完全，导致RNA降解。

（2） 组织：取50-100mg组织（新鲜或-70℃及液氮中保存的组织均可）置1.5ml离心管中，加入1ml Trizol充分匀浆，室温静置５min。

2. 加入0.2ml氯仿，振荡15s，静置2min。

3. 4℃离心，12000g×15min，取上清。

4. 加入0.5ml异丙醇，将管中液体轻轻混匀，室温静置10min。

5. 4℃离心，12000g×10min，弃上清。

6. 加入1ml 75%乙醇，轻轻洗涤沉淀。4℃，7500g×5min，弃上清。

7. 晾干，加入适量的DEPC H2O溶解（65℃促溶10-15min）

注意事项:

1.样品量和Trizol的加入量一定要按步骤（1）的比例，不能随意增加样品量或减少Trizol量，否则会使内源性RNase的抑制不完全，导致RNA降解。