2019/04/04 17:13
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产品配置单:
硫酸铬溶液15244-38-9
型号: 克
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蛋白酶K溶液39450-01-6
型号: 克
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变性溶液
型号: 克
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牛血清白蛋白标准溶液 9048-46-8
型号: 克
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方案详情:
一、实验目的和要求
(1)学习并掌握荚膜染色法。
(2)学习芰膜染色法的原理。
二、基本原理
荚膜是包围在细菌细胞外的一层黏液状或胶状物质,其成分为多糖、糖朊或多肽。由于荚摸与染料的亲和力弱、不易着色,而且可溶于水,易在用水冲洗时被除去,所以通常用衬托染色法染色,使菌体和背景着色,而荚膜不着色,在菌体周围形成一透明圈。荚膜含水量高,制片时通常不用热固定,以免变形影响观察。下面介绍四种荚膜染色法,其中湿墨水法较简便,并适用于各种有荚膜的细菌。
三、实验材料与设备
1.菌种
褐球固氮菌或胶质芽孢杆菌约2d无氮培养基琼脂斜面培养物。
2.染色剂
1%甲基紫水溶液、1%结晶紫水溶液、6%葡萄糖水溶液、20%硫酸铜水溶液、甲醇、黑色素。
黑色素是一个通用名,代表一大类在大多数有机体中存在的天然色素,一般认为是酪氨酸在黑色素细胞中经过一系列氧化和聚合生成的。黑色素的配制方法为:将黑色素(5g)在蒸馏水(100mL)中煮沸5min,然后加入40%甲醛0.5mL,作防腐剂。试剂应至少满足但不限于如下标准:GB/T 683—2006《化学试剂 甲醇》、HG/T 4581—2013《化学试剂高效液相色谱淋洗液甲醇》。
3.仪器或其他用具
载玻片、盖玻片、滤纸、显微镜等。
四、操作步骤
1.湿墨水法
1)制备茵和黑色素混合液
加一滴黑色素于洁净的载玻片上,然后挑取少量菌体与其混合均匀。也有用墨水和黑色素替换的。墨水和黑色素都属于混合物,可以溶液替换。
2)加盖玻片
将一洁净盖玻片盖在混合液上,然后在盖玻片上放一张滤纸,轻轻按压以吸去多余的混合液。加盖玻片时勿留气泡,以免影响观察。
3)镜检
用低倍镜和高倍镜观察,用相差显微镜观察效果更好。背景灰色,菌体较暗,菌体周围明亮的透明圈即为荚膜。
2.干墨水法
1)制混合液
加一滴6%葡萄糖液水溶液于洁净载玻片的一端,然后挑取少量菌体与其混合,再加一杯黑色素,充分混匀。玻片必须洁净无油迹,否则,涂片时混合液不能均匀散开。
2)制推片
另取一段边缘光滑的载玻片作推片,将推片一端的边缘置于混合液前方,然后稍向后拉。当推片与混合液接触后,轻轻左右移动,使之沿推片接触的后缘散开,之后以大约30。角迅速将混合液推向另一端,使混合液铺成薄层(图2—14)。
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