2019/03/14 17:17
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产品配置单:
人角化细胞内分泌因子(KAF)/双调蛋白(AR)ELISA试剂盒
型号: 96T/48T
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品牌: 远慕
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人elisa试剂盒,人红细胞生成素(EPO)ELISA试剂盒
型号: 96T/48T
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人红细胞生成素受体(EPOR)ELISA试剂盒
型号: 96T/48T
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方案详情:
实验目的:确定腺病毒感染目的细胞的最di病毒量,各个细胞株的腺病毒转导效率都不太一样, 其中尤以淋巴细胞株最难转导。
腺病毒感染目的细胞:
因为不同细胞的MOI不同,所以在正式实验前,需设计预实验以确定目的细胞中加入的病毒数。
注:MOI值: MOI 是multiplicity of infection的缩写,中文译为感染复数,实际的含义即为每个细胞被多少个有活力病毒颗粒所感染。不同实验室、不同操作手法及不同细胞系条件下所对应的细胞最jiaMOI都是不同的,在正式实验之前强烈建议实验操作者进行一次摸索最jiaMOI的预实验。
细胞准备: 将状态良好的目的细胞接种到24孔板,使细胞密度约为1×105/ml。
腺病毒感染目的细胞具体实验步骤:
1. 实验前一天收集处于对数生长期,生长状态良好的目的细胞,用完全培养基稀释至1×105cells/mL,接种于96孔板(至少接种15个孔的量),每孔接种100 μL上述细胞悬 液(即1×104 cells/well)。5% CO2、37 ℃ 二氧化碳培养箱内培养过夜。
2. 准备12个无菌的1.5 mL EP管,分别加入180 μL的完全培养基。
3. 有限稀释法稀释病毒,从10-1~10-12:取20 μL腺病毒原液加入到第1个管的180 μL完全 培 养基中做1:10稀释(10-1);然后以此为起点,从第1个管取20 μL稀释液到第二管 再做1:10稀释(10-2),直至稀释到10-12。
4. 从孵箱取出96孔板,显微镜下观察确定细胞生长状态均良好。吸掉孔内旧的培养基, 按10-1~10-12的浓度梯度,依次加入100 μL的病毒稀释液到接种有目的细胞的96孔板中, 每种浓度接种一孔,没有加入病毒液的细胞孔中加入同样体积的完全培养基作为对照 组。37 ℃,5%CO2二氧化碳培养箱内培养。
5. 6-12 h以后观察细胞状态。如果细胞实验组与空白组无明显差异,表明病毒对细胞无明 显毒性反应,不要换液,继续培养。
6. 由于腺病毒感染能力强,请分别在感染后的12、24、48 h观察细胞中的荧光表达情况。 综合细胞生长状态以及荧光表达量来判断具有最jia作用效果的病毒稀释度,并以此稀 释度作为后续试验的依据。
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