人α半乳糖苷酶(αGAL)ELISA试剂盒组织结构

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    中文名：人α半乳糖苷酶（αGAL）ELISA试剂盒

    别名：人α半乳糖苷酶（αGAL）ELISA Kit

    供应商：上海远慕

    规格：48t/96t

    保存：2-8℃低温保存

    有效期：6个月

    用途：仅限科研实验，不作临床使用。

    性能：敏感性高，特异性强，重复性。

    ELISA方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定。但ELISA测定中影响因素较多，而且其操作中有一定的技术要求，在检测过程中除正常反应外，有时常见到一些错误的结果。

    引起ELISA测定错误结果的原因主要有：

    ①标本因素；

    ②试剂因素；

    ③操作因素。

    人α半乳糖苷酶（αGAL）ELISA试剂盒组织结构

    人α半乳糖苷酶（αGAL）ELISA试剂盒操作规程：

    1.要保证移液枪的准确性，误差不能超过2%。可用水和电子天平进行确定。但最好有专业人员进行矫正；

    2.要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支。吸取不同的液体后，要更换枪头。即使是吸取标准品时；

    3.要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出，使各种试剂都恢复到室温，以使结果更稳定；

    4.实验时，要使底物避光保存；

    5.用枪吸取液体时速度不能太快，以免产生气泡而使吸取量不准确；

    6.吸取液体时，要用量程和需要量接近的枪去吸，减少误差；

    7.将液体加到酶标孔中时，避免枪头和孔内液体接触，可使枪头上的液滴和孔壁接触，液滴会自然流下去；

    8.液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒，混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。

    人α半乳糖苷酶（αGAL）ELISA试剂盒样本处理及要求：

    1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

    2 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

    3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

    4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

    5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

    6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

    7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

    人α半乳糖苷酶（αGAL）ELISA检测试剂盒操作步骤：

    1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；

    然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；

    混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为1800ng/L，1200ng/L，600ng/L，300ng/L， 150ng/L）。

    2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

    3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

    4. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。

    5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

    6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

    7. 温育：操作同3。

    8. 洗涤：操作同5。

    9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。

    10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

    11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

    人α半乳糖苷酶（αGAL）ELISA试剂盒组织结构

    人α半乳糖苷酶（αGAL）ELISA试剂盒组织结构 本试剂盒注意事项：

    1）试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

    2）实验中不用的试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

    2）实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

    3）不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

    4）使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。

    5）使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

    6）洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

    7）底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

    8）加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

    9）按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

    人α半乳糖苷酶（αGAL）ELISA试剂盒组织结构：

    1、 血清：操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心23分钟将血红细胞迅速小心地分离。

    2、 血浆：EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心60分钟去除颗粒。

    3、 细胞上清液：1000×g离心32分钟去除颗粒和聚合物。

    4、 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心33分钟，取上清液。

    5、 保存：如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。