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质粒克隆载体的设计和构建的原则说明

上海远慕生物科技有限公司

2023/06/01 09:51

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①选择合适的出发质粒

出发质粒也叫亲本质粒,它应含有质粒克隆载体bi备的元件,如复制起始位点、选择标记基因、克隆位点、启动子和终止子等。

②正确获得构建质粒克隆载体的元件

一般采用限制性核酸内切酶切割出质粒DNA分子,获得含有某种元件的DNA片段,还可以采用PCR技术从靶DNA中扩增出含某种元件的特异性DNA片段。

③组装合适的选择标记基因

构建的质粒克隆载体应该组装什么样的选择标记基因,必须根据要转化的受体细胞的特性来决定。

④选择合适的启动子

为了构建表达质粒的克隆载体,必须组装合适的启动子,当设计真核生物的基因须在原核生物中表达式,常改用原核生物或病毒(噬菌体)基因的启动子,而原核生物基因在真核细胞中表达时,仍可用原核生物基因的启动子。

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