检测蛋白的实验有很多种,WB实验和ELISA实验是比较常用的两种实验方法,这两种方法哪一种的实验结果更为可靠呢?有些人说ELISA自己包被抗体的话会比较麻烦,WB相比更加科学,容易被杂志接纳。但是血清中没有内参可以选择。是不是ELISA实验操作要简单很多,那么又如何来解决这样的一个问题呢?今天远慕来为您解答这个疑惑。
一、WB和ELISA的敏感性有所区别。虽然前者用ECL显色敏感度可达pg级,但不同的样品来源和抗体的质量,不能保证每次都到这个级别;而ELISA可以达到ng级。也就是说ELISA更适于丰度低的蛋白检测。而且由于ELISA检测所用的样品少,也适用于样品来源有限的蛋白浓度检测。
二、在定量方面,ELISA一般用于定性,定量也可, WB可以做到半定量。
三、ELISA不如WB的特异性好。
四、关于血清内因子的检测,如果WB检得出就不要用ELISA。血清内参的问题,在ELISA里也一样存在。操作来说ELISA当然简单,但由于两种方法各有优点,不能全面相互代替。
ELISA:
优点:灵敏,能够定量(有标准品的情况下)
缺点:需要购买试剂盒(自己做试剂盒的话建议您放弃),价格昂贵(双抗夹心法需要两个抗体,当然贵啊),而且需要排除假阳性假阴性的问题,需要考虑的问题较多。此外就是发文章没有图片不太好看
WB:
优点:试剂便宜,认同度高,发文章没有问题,如果用高灵敏度的发光试剂盒也可以达到非常高的灵敏度
缺点:操作步骤较多,如果实验室没有成熟的条件,想开展起来需要花一些功夫,分子量很大(个人认为>200kD)和很小(<5kD)的目的蛋白比较麻烦。
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