一、M蛋白的基础知识
M蛋白是浆细胞或B淋巴细胞单克隆大量增殖时所产生的一种异常免疫球蛋白,其氨基酸组成及排列顺序十分均一,空间构象、电泳特征也完全相同,本质为免疫球蛋白或其片段(轻链、重链等)。由于它产生于单一克隆,又常出现于多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、恶性淋巴瘤病人的血或尿中,故称M蛋白。这些M蛋白大多无抗体活性,所以又称为副蛋白。
M蛋白血症可分为恶性与意义不明的两大类。恶性M蛋白血症多见于多发性骨髓瘤(包括轻链病)、巨球蛋白血症、重链病、7SIgM病(Solomen-Konkel病)、半分子病及不完全骨髓瘤蛋白病(C端基因缺陷)等。意义不明的M蛋白血症又分为两种,一种是与其他恶性肿瘤(如恶性淋巴瘤)伴发者,另一种即所谓良性M蛋白血症。
M蛋白的检测方法主要有琼脂或琼脂糖电泳、免疫电泳、免疫固定电泳、选择免疫电泳等。
二、M蛋白的鉴定
1.多发性骨髓瘤与巨球蛋白血症时的M蛋白检测和鉴定
(1)血清总蛋白定量。90%的患者血清总蛋白含量升高(70%的患者>100g/L),约10%的患者正常或甚至偏低(如轻链病时)。
(2)血清蛋白醋纤膜或琼脂糖电泳。M蛋白在电泳时出现典型的单株峰(亦称M区带),特点是区带窄而浓,扫描时呈现尖高峰,在γ区高比宽≥2,在β区≥1.此M区带可因Ig的不同而出现在在γ~α2的任何区域。M蛋白增殖的另一特点是其他各区带明显减少,显示图像较简单。有时有的患者血中M蛋白并不高,这是由突变细胞的Ig分泌能力决定的。这种病人的血清在电泳时M峰可不明显,易被其他蛋白掩盖,需采用稀释血清成应用其他敏感方法如免疫固定电泳来检测。
(3)血清Ig定量。一般M蛋白所属Ig含量均显著增高,其他类Ig则正常或显著减低。
(4)免疫电泳。
①正常人血清免疫电泳结果:可分辨出20多种蛋白成分。在阳极端有船形很浓的沉淀线为白蛋白。通常Ig组分靠阴极端,最靠近加样孔者为IgM,依次为IgA、IgG,三者成平滑的连续沉淀线。
②多发骨髓瘤:多发性骨髓瘤分IgG、IgA、IgM、IgI)和IgE5种,IgG和IgA又分亚类,所有Ig的轻链又分两个型。因此,免疫电泳时变形沉淀线的位置随各分子的电泳区带不同而异,从慢γ~β2区皆可出现。IgG1多出现在慢γ区,IgG4在β~α2区。M蛋白与相应的抗重链血清、抗轻链血清形成迁移范围十分局限的浓密的沉淀弧。由于此种病人血清中Ig含量甚高,免疫扩散时可出现抗原绝对过剩而不出现沉淀线,此时需稀释血清重做,往往可获得满意结果。③巨球蛋白血症:由于IgM分子大量增殖所致。在免疫电泳时,常常出现以下特征:一是沉淀线明显变形。正常情况下,IgM形成短小沉淀线,不易看到变形。当IgM大量出现时,则会使整个IgM沉淀线变形。二是抗原孔周围和电泳纵轴出现团块状沉淀。三是电泳时IgM组分无迁移,这多是IgM分子聚合,电泳不移动所致。
(5)尿本-周蛋白检测。
①定性检测:用热沉淀法和磺基水杨酸法。
②免疫电泳法:用待检尿浓缩后进行免疫电泳,大多数多发性骨髓瘤病人和轻链病患者,仅出现一条致密的弓形弯曲的沉淀线。本法60%~80%的骨髓瘤病人和几乎全部轻链病病人可检出尿本周蛋白。
③轻链白蛋白-戊2醛交联免疫电泳法:多发性骨髓瘤、华氏巨球蛋白血症及轻链病可呈阳性,正常人阴性。本法尿本周蛋白检出率为100%,假阳性4%,尿中含有200μg/ml时即可出现阳性结果。
2.重链病时M蛋白检测与鉴定
与多发性骨髓瘤相同,免疫电泳时由于重链分子较Ig分子小,故迁移率快,电泳位置较靠阳极侧(β~α)。但重链病一般需选择免疫电泳证实。
3.7SIgM病时M蛋白的检测与鉴定
一般IgM为五聚体,沉降系数为19S,而7SIgM患者的IgM为单体,沉降系数为7S.证明7SIgM有两种方法:一种是在测定IgM总量后,将被测血清1~2ml过Sepharose6B柱,再根据洗脱峰图用面积仪测出7SIgM占总IgM的百分比,与IgM总量换算即得7SIgM的绝对值。另一方法即为植物血凝素(PHA)选择电泳。此法原理是五聚体IgM可与PHA结合形成沉淀,而单体IgM不与PHA结合。在琼脂胶中加入PHA,后进行电泳,五聚体IgM被PHA所阻留,而7SIgM继续向阳极泳动,并可与随后加至抗体槽中的IgM抗血清反应,形成单一沉淀弧。
4.半分子病时M蛋白检测与鉴定
所谓半分子病(half-molecule)是指此种M蛋白由一条重键和一条轻链组成,分子量是正常Ig分子的1/2或<1/2(因半分子病肽链往往有部分缺失)。至今报告过IgG和IgA的半分子病。除上述检测方法外,尚须对“半分子”进行特殊鉴定。方法有:
①免疫电泳法鉴定半分子M蛋白的迁移率。电泳时发现具有IgG或IgA的电泳特征而迁移率明显快于二者时(泳向正极可达α2区),应注意有无本病的可能。
②十二烷基硫酸钠(SDS)-聚丙烯/酰胺凝胶电泳,推算M蛋白的分子量。
③超速离心分析,测定M蛋白的沉淀系数。
④Fc抗原决定簇的确定。用相应抗重链血清对比患者与正常人相应Ig的区别。
5.测定免疫球蛋白轻链型筛选M蛋白
正常人有五类免疫球蛋白,其轻链有两种型,即κ型或λ型。对于每个Ig分子而言,其轻链只有一种,不是κ就是λ。但对一个体的Ig分子而言,则有κ和λ两种链型,且其比例基本上是固定的,即κ/λ约为2∶1.任何原因引起的Ig分子多克隆增殖,如慢性肝病,系统性红斑狼疮、某些恶性肿瘤时,其κ/λ值不变。而M蛋白发生时,是单克隆细胞的恶性增殖,所以在Ig量明显增高的同时,其κ医学教育|网搜集整理/λ比值必然发生改变,即一种轻链型的Ig分子增多。利用适当的方法,分别定量测定血清中κ、λ型Ig分子的量,即可特异而简便地诊断M蛋白病。测定方法有两种,一是用浊度测定技术分别测定含κ或λ的Ig的量,一种是用单相免疫扩散法测定κ型、λ型Ig的含量及比值。单扩法是在琼脂凝胶板上打孔,排列呈梅花型,中心孔注入抗κ、抗λ混合抗体,周围孔放正常人及患者待测血清,然后进行扩散。正常血清与抗血清之间可见对称双线。若患者的κ轻链Ig升高,其沉淀线向内移,而λ线有不同程度向外移,双环间距增宽。若λ轻链Ig含量增高,则表现为环距减小、融合或跨环现象。此外,该法对IgG、IgA、IgD类型的轻链诊断准确率较高,而对IgM型诊断不够理想,其原因是IgM分子大,扩散迁移率小,同时五聚体立体结构也影响了抗轻链抗体与轻链结合。若用二疏基乙醇处理将IgM解为单体,则阳性率大大提高。
6.良性M蛋白血症
良性M蛋白血症主要指那些血清中存在电泳均质的免疫球蛋白或其片段,但无临床症状,长期观察也未发现骨髓瘤或世球蛋白血症的病人。老年人中发现良性M蛋白血症者较多,应注意与多发性骨髓瘤相鉴别。
更多
特殊染色基本信息与技术的应用介绍
厂商
2024.08.28
微生物培养基按微生物的种类区分
厂商
2024.08.27
分享蛋白检测抗体的方法与意义
厂商
2024.08.26
实验室检验检测离不开的生化试剂
厂商
2024.08.23