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pH对酶促反应速度的影响
【目的和要求】
1. 了解pH对酶促反应速度的影响。
2. 学习测定酶的最适pH的方法。
【实验原理】
酶促反应受环境pH的影响极为显著。 通常各种酶只有在一定的pH范围内才表现它的活力，一种酶表现其活性最高时的pH值，称为该酶的最适pH。低于或高于酶的最适pH时，酶的活性逐渐降低。不同酶的蕞适pH值不同。本实验仍以乳酸脱氢酶催化的反应为例，学习测定酶的最适pH的方法。
【实验试剂和器材】
（一）试剂：
1. 不同pH值的缓冲液:
100ml 0.33M柠檬酸，100ml 0.33M磷酸，3.54g 硼-酸，343ml 1M NaOH, 加水直到1升。用HCl滴定成pH值3.0、3.5、4.0、4.5直到12的不同pH值缓冲液。
2. 0.01M NADH
3. 0.1M 丙酮酸钠
4. LDH
【实验试剂和器材】
（一）试剂：0.1M磷酸钾缓冲液（pH 7.0）；0.01M NADH; 10M 丙酮酸钠；LDH
（二）器材：紫外分光光度计 ，移液枪，吸头，1.5ml小离心管，离心管架
【实验方法】
（一）酶活性的测定：方法同实验7中的步骤1。
（二）pH对酶促反应速度的影响：
1. 在1.5 ml小离心管中分别加入：(总体积为1ml反应液)
2. 混匀以上试剂，倒入比色皿中，然后将比色皿放入分光光度计后读取340nm处OD值，加入0.02ml LDH使用液，迅速搅匀，使反应开始，测定反应1分钟OD值的变化。
3. 根据所测得的OD值的变化，计算出反应初速度。
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