细胞株开发的那些事儿

工程细胞株开发涉及细胞培养及转染，单细胞克隆及单克隆源性验证，蛋白表达及结构特征筛选及鉴定，蕞终获得优质的细胞株。

稳定细胞株广泛用于许多重要的应用，包括生物制品（如重组蛋白和单克隆抗体）生产、药物筛选和基因功能研究。开发稳定细胞株的过程通常始于将所需的质粒转染至选定的宿主细胞，一般是 CHO 或 HEK 293 细胞。转染后，研究人员随后筛选和定量分析高表达的细胞克隆。

一旦检测到这些高产细胞株，便进一步对这些细胞和其产生的蛋白质进行验证。传统上用于细胞株开发的手动筛选方法耗时且需要大量劳力，因此对于此类工作，存在对高通量、自动化解决方案的巨大需求。

细胞培养、转染及培养基优化

细胞培养是细胞株开发的基础，无论是细胞转染，培养基优化，还是抗体表达检测等实验都在细胞培养的基础上完成。细胞培养是一个长流程，精细，耗费时间和人力的流程，定期的细胞计数接种，细胞换液，细胞转染等繁琐的实验对工作人员的挑战极大，且在高通量的人工操作中易带入污染而导致细胞培养及筛选的失败。高通量、标准化、自动化的细胞培养能帮助我们在获得更准确的结果的同时加速细胞株开发进度。

01、透射光细胞计数（无标记计数法）

透射光分割（分析）算法提高了不同细胞类型计数的准确性，通常用于对未染色的活细胞或固定细胞进行成像。另外还有使用荧光方法检测细胞核或细胞体的标准细胞计数方法。

02、图像细胞计数法

图像细胞计数法是一种将低倍率显微镜与成像和分析工具相结合的细胞计数技术。图像细胞计数法有助于在单次检测中提供关于大量细胞的细胞特性信息。图像细胞计数法可用于无标记或荧光标记细胞，可对一个细胞群多次执行，以随时提供关于细胞动力学的信息。

03、活细胞成像

活细胞成像是通过显微观察研究活细胞的细胞结构和功能。它可以实时显示和定量细胞的动态变化过程。活细胞成像包含多种方向和生物应用 — 无论是对活细胞进行长期动力学检测，还是进行荧光标记。

04、如何计算转染效率

在使用转染的细胞株进行特定检测前，测量转染效率可为研究人员提供基因编辑产率的早期指示。使用透射光或能体现转染的荧光通道均可获得高质量图像。图像分析软件可识别每个细胞并进行计数，判断细胞是否为 GFP 阳性。然后，可以根据比值来计算转染效率。

05、支原体检测

支原体是蕞小且蕞简单的原核生物，也是细胞培养物中常见的污染物。支原体污染的征兆包括增殖率降低以及基因表达等细胞反应变化。

细胞株鉴定

工程细胞株开发的主要目的是通过高通量筛选手段获得数株高产稳定表达的细胞株，为后续的工艺开发及优化提供基础。细胞株鉴定是对细胞株的表达量，表达抗体的生物活性、糖型结构等多种指标进行高通量筛选，通过综合评估及分析筛选出候选细胞株。

细胞株鉴定的方法决定了细胞株开发的效率和效果，稳定标准的筛选方法让我们能获得更准确的实验结果，其决定了筛选的效果，而高通量快速的检测手段决定了筛选的效率，让我们更快的筛选到目的细胞株。