工业包括生物药生产、CAR-T、干细胞治疗、疫苗生产等,需要对主细胞库、病毒收获液、体外扩增的细胞等进行支原体检查。该检查的方法依据中国药典。科研检支原体则需要保证细胞中没有支原体污染,没有详细的方法规定。那么,工业和科研检支原体还有哪些区别呢?
1. 方法上:
工业可使用培养法、指示细胞培养法和NAT法(核酸扩增技术)。NAT法最常见的就是PCR和荧光定量PCR。只限定了这三种。NAT在方法验证后,可以替代前面两种方法。它尤其适合CAR-T等的放行检测。
科研则可采用各种方法,但一般不采用培养法,因为太慢。科研检支原体常见方法有PCR法、qPCR法、酶荧光法、恒温扩增法、DNA染色法、细胞感应法等。
2. 用途上:
工业检支原体用于过程控制、放行检测。生产前和生产后的成品都需要检。
科研检支原体是避免支原体污染细胞,干扰实验,一般是一周就要监测一次。
3. 支原体污染程度:
工业上支原体污染风险主要是存在于细胞和成品中。但环境也需注意,需要定期清洁。
科研上支原体污染风险主要是存在于细胞中,但环境也需注意,需要定期清洁。
工业上,支原体在细胞和成品中如果发生污染,也是含量较低,因而需要方法的灵敏度高,通常要求检测限达到10CFU/ml。
科研上,支原体如果污染细胞上清,则因为培养液中含有血清,因而繁殖较快,支原体的污染程度较高,通常每ml能达到10的3次方。因而对方法的灵敏度要求不高,而更看重方便。
目前,市面上大量存在各种品牌的支原体检测产品,以NAT(PCR或qPCR)方法而论,科研和工业领域可考虑德国Minerva Biolabs产品,因其产品大多为冻干粉型,稳定性好,4度即可保存。而且操作较为方便,例如对于科研来说,PCR有预分装型,不用自己再分液,扩增后直接上胶。更重要的是试剂盒灵敏度高,覆盖支原体物种广(100多种)。对于工业来说,qEP和Classic试剂盒还经过全面的方法验证,适合放行检测。
更多
微生物培养基按微生物的种类区分
厂商
2024.08.27
分享蛋白检测抗体的方法与意义
厂商
2024.08.26
实验室检验检测离不开的生化试剂
厂商
2024.08.23
动物细胞培养的技术应用与培养步骤
厂商
2024.08.22