不论你是刚入实验室养细胞的萌新,还是有着数十年细胞培养经验的大牛,都会碰到细胞生长速度缓慢、形态变差、细胞脱壁、边缘萎缩等许多问题,明明已经为细胞“鞍前马后”、关怀备至,但各种意外还是频频发生。出现以上状况,你的细胞很可能是营养不良了。
细胞在体内依附于机体生长,由血液循环提供能量和物质,在体外培养细胞则需要基础培养基营造生长环境,并由血清提供细胞生长所需的营养物质,因此血清的质量好坏直接影响细胞生长状态。所谓“一招不慎,满盘皆输”,今天小编就跟大家聊聊在细胞培养中如何选择优质的血清?
要想挑选合适的血清,首先我们需要了解血清,血清是什么?血清是指血液凝固后,去除血浆中纤维蛋白原及某些凝血因子后分离出的淡黄色澄清液体。血清是细胞培养中用量蕞大的天然培养基,含有丰富的细胞生长必须的营养成分,发挥着极为重要的功能。血清含有各种氨基酸、维生素、无机物、脂类物质等维持细胞生长必须的营养物质,也含有胰岛素、氢-化可的松、地塞-米松、bFGF、EGF、PDGF、转铁蛋白等可促进细胞生长的激素、生长因子及结合蛋白。此外,血清还有解毒、缓冲、抑制蛋白酶活性等作用保护细胞不受伤害。
接下来小编就从血清的分类、血清的来源和制作工艺、血清的检测标准三个环节给大家讲一讲如何挑选血清。
一、 胎牛or新生牛or小牛血清?傻傻分不清
血清的不同成分及其含量会因供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件的不同而有所差异。按照牛是否出生及出生时间的长短,可将牛血清分为胎牛血清、新生牛血清、小牛血清、成牛血清和供体牛血清。国内外对不同等级牛血清的定义有所区别,国际上主要参考欧洲药典和美国药典颁布的指南,国内则以2015版《中华人民共和国药典》(以下简称中国药典)为标准。中国药典仅对新生牛血清做出了规定(表1 国内外对不同等级牛血清的定义)。
表1,国内外对不同等级牛血清的定义
· 胎牛血清:胎牛在母体内与外界隔绝,通过心脏穿刺采血,血清中营养成分和细胞因子含量高、异源物质少,品质蕞-佳,是科学研究中蕞-常使用的血清,适用于绝大多数原代细胞和细胞系;
· 新生牛血清:新生牛出生后控制在一定的时间内采血,成分上比较接近胎牛血清,且来源相较于胎牛血清更加充足,性价比更高,适合培养比较容易生长的肿瘤细胞系,可以满足有大规模生产血清需求的企业。中国药典和欧美药典对于新生牛出生时间的定义存在一定差异;
· 小牛血清、成牛血清:随着小牛的生长发育,血清成分会发生变化,如免疫球蛋白含量增加,血清所含的促细胞生长因子、激素及其他活性物质的组份与比例也不同。该类血清异源物质增多,成分也比较复杂,所以对细胞培养的干扰因素比较多,因此小牛血清和成牛血清一般不用于细胞培养,更多用作封闭液、稀释液等;
· 供体牛血清:是通过对牛群来源管控、物?隔离和检验检疫,减少外源因子的污染,且利用活体反复采血的方法来生产牛血清,主要作为医药生产用血清。
选择合适的血清,既要考虑到细胞需求,也要考虑性价比。现如今,国际上对不同等级血清的划分标准和管控要求越发严格,分级使用血清已逐渐为各行各业所认可。
二、源头放心+工艺安心=品质称心
牛血清是一种纯天然产物,因此牛源健康状况和生长环境就尤为重要。世界动物卫生组织(OIE)对一个国家或地区动物感染疾病(如疯牛病)的可能性有一个评价指标,称为地域性疯牛病风险评估(GBR),它将每个国家或地区的疯牛病风险进行分类和监控,以避免疯牛病的传播。从官方数据来看,澳洲、部分南美洲和北美洲国家没有疯牛病(BSE)和口蹄疫(FMD)疫情,目前中华人民共和国海关总署允许进口的牛血清产地只有澳大利亚、新西兰和乌拉圭,市面上其他血源地的牛血清都是非法走-私血清。
走-私血清“鱼目混珠”,缺乏检验检疫监管,生产、冷链运输无法保障,批内和批间稳定性无法控制,导致细胞培养过程状况频发,甚至损失珍贵的细胞;其次,很多走-私的牛血清来自发生过疯牛病疫情的国家,未经检疫的血清中可能携带传染病毒,对研究和生产人员的生命健康以及下游产品带来重大威胁。
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