传统的菌种保存方式简介
斜面保存法:微生物保存最基本的方法,可广泛用于细菌、真菌等,保存期限非常短,斜面容易干裂。
液体石蜡保存法:可用于保存霉菌、酵母菌、放线菌及需氧菌,方法简便,可防止斜面干燥和氧气进入,但一些固氮菌、分枝杆菌、毛霉、厌氧菌等不适宜用此法。
甘油冷冻保存法:用于一般细菌的保存,需使甘油终浓度为20%左右,然后-20℃或-70℃以下保存。融化时需要水浴溶化。
真空冷冻保存法:具有低温、干燥、无氧的保存条件,适用于98%以上菌种的保存,但操作复杂,一般实验室难以使用。
液氮保存法:基本所有微生物均可保存,并且保存时间长,但操作较为复杂而且需要设备,不适用于一般实验室保存菌种。
沙土保存法
半固体保存法
瓷珠菌种保存法的原理
瓷珠菌种保存管是实验室保存菌种的容器,管内有表面凹孔小瓷珠用于细菌的吸附和保存,放置于-20℃或-80℃下便可创造干燥、低温、缺营养的环境,使菌株处于“休眠” 状态,方可长期保存(视不同菌种与保存温度,一般可保存3-10 年), 同时菌种保存管的取用和保存较为便利(取用复苏及保存菌种仅需1分钟)。
用途:菌种保存、复苏和运输。
优点:操作简单方便、菌种保存快速、包装物体积小、菌种保存时间长。
操作简单方便:挑取细菌新鲜纯培养物,接入菌种保存管。
菌种保存快速:混匀后,吸出冷冻保存液。
包装物体积小:1.8ml冷冻管。
菌种保存时间长:2-8℃可保存6个月;-20℃可保存12个月;-80℃可保存24个月。
瓷珠菌种保存管的使用方法
1.从培养18h以上的平板上刮去新鲜纯培养物于菌种保存管中,配成大约3-4麦氏比浊度的菌悬液。
2.拧紧保存管,来回颠倒几次使细菌乳化,不能旋摇。
3.用无菌移液器将菌种保存管内的液体吸取干净,妥善放置被吸出的液体。
4.拧紧保存管,迅速将其置于-20℃或-70℃冰箱中。
使用时的注意事项
被保存的菌种要求是经过纯化后培养 18-24h 内的新鲜菌种(细菌18-24h,酵母菌需3 天,形成孢子的微生物保存孢子,而放线菌和丝状真菌需培养7 天后保存),不宜使用老化或未经鉴定的菌种。
菌种保存浓度必须要做3-4 麦氏比浊度,如接种浓度过低将会降低复苏效果。
待保存于菌种保存管中的菌种完全乳化均匀吸附在多孔小瓷珠后,要将多余的菌种保存液吸取出来并弃之,否则在复苏时的冻融过程中会损伤菌株活性。
做厌氧菌保存时,应提供厌氧的环境,如厌氧箱、厌氧袋,菌种保存管中可通入氮气来驱除保存菌种时所引入的氧气。菌种复苏时,也要创造厌氧的环境。
菌种复苏完成后,对使用菌株需要进行再次纯化,以保证菌株的单一性。
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