游离核酸抽提方法选择指引

人体细胞在凋亡的过程中，DNA断裂并分泌至细胞外。健康细胞，胎儿细胞，肿瘤细胞以及移植的细胞都可以通过这种方式释放游离DNA至血液中。同时cfDNA(cell-free DNA) 是肿瘤和产前诊断研究中，被证实有用的标记物。

随着液体活检技术的不断发展，对这些的游离核酸检测有望成为替代组织活检的重要方法。大家比较熟悉的游离核酸检测手段有定量PCR、NGS等传统方法和正在迅猛发展的数字PCR。

但cfDNA在体液中的含量非常低，通常血清中含量低于10ng/mL。 如何从含量如此低的样本中，抽提出适合检测手段的游离核酸？

液体活检技术的兴起，使得游离核酸样本的数量大增，高通量形式的核酸抽提成为了工作者们的追求，如何低成本解决通量问题？

那就从下方的描述中找到适合您的游离核酸抽提方式吧。

市面上的游离核酸抽提试剂盒大多是基于柱膜法的原理、还有一部分是基于磁珠法的抽提原理。有单管离心、多管真空抽滤、96孔板真空抽滤、磁珠法高通量等形式。*常用的为多管真空抽滤的方式。

多管真空抽滤

采用真空抽滤的方法，在真空抽滤装置上，可同时提取24个1-10mL血清、血浆、尿液等样本, 结合&洗涤过程无需使用离心机。大多客户用此方法来抽提2-4mL血浆，得到的游离核酸用于后续的PCR、NGS、甲基化研究。整个抽提过程需要约45min-3h不等，具体的操作时间要根据使用的品牌来定。

应用数据：

从5mL EDTA血浆中纯化cfDNA
NucleoSnap® DNA Plasma kit 和竞争对手(Competitor Q)比较结果

从Cell-Free DNA BCT® (Streck)提取cfDNA
 3个不同Cell-free DNA BCT® 保存的样品，分别使用 NucleoSnap® DNA Plasma (MN) 和a vacuum-processed kit of a competitor (Q)提取cfDNA.使用Bioanalyzer™ 2100 with a High Sensitivity DNA Kit (Agilent)检测，分离到的游离核酸在170bp附近有典型的峰（箭头标记）

10mL尿液中分离cfDNA电泳图
抽提的cfDNA使用 Bioanalyzer™ 2100 with a High Sensitivity DNA Kit (Agilent)分析，在170bp附近有典型的片段分布