微生物的糖类发酵实验说明

上海远慕生物科技有限公司

2020/05/27 09:51

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糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应，在肠道细菌的鉴定上尤为重要。绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源，但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异。有些细菌能分解某种糖产生有机酸(如乳酸、醋酸、丙酸等)和气体(如氢气、甲烷、二氧化碳等)；有些细菌只产酸不产气。

不同的细菌可根据分解利用糖能力的差异表现出是否产酸产气作为鉴定菌种的依据。例如大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气；伤寒杆菌分解葡萄糖产酸不产气，不能分解乳糖；普通变形杆菌分解葡萄糖产酸产气，不能分解乳糖。发酵培养基含有蛋白胨，指示剂(溴甲酚紫)，倒置的德汉氏小管和不同的糖类。当发酵产酸时，溴甲酚紫指示剂可由紫色(pH6.8)变为黄色(pH5.2)。气体的产生可由倒置的德汉氏小管中有无气泡来证明。

糖发酵试验通常采用试管、德汉氏小管、试管架及各种糖类试剂等多种试剂和耗材，操作繁琐，耗时较长。如何能够简便试验流程，节省时间呢？近年来，HiMedia公司的生产的糖发酵试剂盒在国ji上悄然流行。

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该试剂盒含35项糖发酵检查，其中A盒和B盒各含12项糖发酵试验，C盒含11项糖发酵试验和1个对照试验，通过微生物发酵反应，培养基颜色发生变化。

A盒：乳糖、木糖、麦芽糖、果糖、葡萄糖、半乳糖、棉子糖、海藻糖、蜜二糖、蔗糖、L-阿拉伯糖、甘露糖

B盒：菊粉、葡糖酸钠、甘油、水杨苷、己六醇、肌醇、山梨醇、甘露醇、核糖醇、阿糖醇、赤藻糖醇、-甲基-D-葡萄糖苷

C盒：鼠李糖、纤维二糖、松三糖、α-甲基-D-甘露糖苷、木糖醇、邻硝基酚-β半乳糖苷(ONPG)、七叶苷、D-阿拉伯糖、柠檬酸盐、丙二酸、山梨糖、对照

待鉴定菌种应先进行分离和纯化。可在HiMedia营养琼脂或脑心浸膏琼脂上挑取一个菌落，接种在５ml脑心浸膏肉汤中，在35-37℃培养4-6小时，直到在620nm处，接种液浊度≥0.5OD。一些苛养菌可能需要孵育超过6小时，以保证接种液浊度达到0.5OD。

无菌打开试剂盒，撕掉封条。每孔接种50μl上述菌液。也可用接种环划线。在35±2℃孵育18-24小时即可，显色结果与《结果诠释表》、《菌种标准表》比对后，从而对菌种作出鉴定，几乎包含所有的糖类发酵实验，一次性即可出实验结果，方便快