远慕实验：如何让细胞乖乖沉睡，满血复活？

经常有用户反映“细胞冻存与复苏遇到了问题”，“如何握住原力，让你的细胞乖乖沉睡又满血复活？”

远慕生物为此做了以下总结：

选 好 细 胞 冻 存 液 是 基 础

使用动物血清常常会遇到很多问题，例如：病毒感染、其他动物源的污染。使用无血清制品培养与冻存细胞，可以消除这方面的隐患。此外，无血清冻存液可以确保细胞在化学成分固定的条件下生长，更进一步确保细胞冻存时的条件稳定。

慢 慢 做 冷 冻

若您养的是贴壁细胞，请先将细胞消化下来；若是悬浮细胞，请直接按以下步骤进行：

1. 以200-300g离心3分钟，弃去上清，收集细胞。

2. 用bi无血清冻存液将细胞重悬（不需回温），将细胞密度调整为3~5x106 cells/ml，添加到冻存管中（一般每管1ml）。

3. 建议将含有细胞悬液的冻存管放进渐进降温盒或是保温杯中，置于-80°c冰箱6小时以上或是过夜（或不需要程序降温)。

4. 将冻存管迅速移到液态氮中保存。

5. 冻存24小时后，建议检测细胞存活率。

细 胞 复 苏 要 迅 速

1. 将细胞冻存管由液态氮中取出，置于室温回温，不用水浴溶解。此时可准备新鲜培养 基、无菌15ml离心管、培养瓶。

2. 在生物安全柜内，直接以少量培养基反复冲融，使细胞团块化冻。

3. 先在无菌15ml离心管中加入5ml培养基，再将化冻的细胞悬液加入离心管中。以200~300g，3分钟离心收集细胞。

4. 倒去上清液，重悬细胞，移到培养瓶中培养。

bi无血清细胞冻存液

不含动物成份

细胞冻存与复苏后，平均活细胞回收比例超过90%

serum-free cell freezing medium

无血清细胞冻存液，无血清培养的细胞应该使用无血清的冻存液保存，以保持无血清培养体系的完整。本冻存液不含蛋白及动物组分，主要成分为dmso和甲基纤维素。

cryostem acf freezing media

无血清干细胞冻存液（optimized for stem cell），cryostem对所有种类的细胞都有非常好的冻存效果，该产品经过验证，特别适用于人胚胎干细胞和人原代细胞的冻存。用cryostem冻存融解后，细胞表现出极佳的复苏率、生长活性、贴壁性和传代能力。

msc freezing medium

无血清间充质干细胞冻存液，即用型溶液，特别适用于人类间充质干细胞冻存，用msc冻存液冻存融解后，细胞表现出极佳的复苏率、生长活性。