如何选择正确内参抗体，这些你需知道

内参抗体可用于评价蛋白质免疫印迹法(Western Blot)的效率，比较凝胶中每孔的蛋白上样量。此类对照可帮助确定样品间表达水平的差异，以判断是由细胞裂解物的实际蛋白水平导致，还是由上样量的差异导致。

内参抗体在目标蛋白的免疫荧光研究中，也可以作为共染的阳性对照。内参抗体分为未标记型和标记型，标记物包括生物素、HRP、FITC、PE、Cy染料和Alexa Fluor染料。

内参抗体种类很多，比如β-actin、β-tubunlin、GAPDH、Vinculin、Lamin B、PCNA等，其选择常使我们困惑。本文将简单介绍选择内参抗体应遵循的五项原则：

一、样本种属来源：

首先要考虑实验样本来源于什么物种。

1. 哺乳动物的组织或者细胞样本，通常选择β-actin、β-tubulin、GAPDH、Lamin B、Histone H3、Na,Katpase等。

2. 植物来源实验样本，则可以选择plant actin、Rubisco等。

3. 其他来源样本研究较少，所以就应该参照文献报导，选择合适的蛋白作为内参。

二、分子量大小：

选择内参抗体时，应该考虑目的蛋白分子量的大小，一般保证目的蛋白与内参蛋白分子量相差5KD以上。例如，目的蛋白分子量为40KD，此时不适宜选择β-actin、与GAPDH作为内参，可以考虑选择α-Tubulin或者β-tubulin作为内参。

三、表达水平：

选择的内参蛋白需要在待测样本中是高表达的。常用的内参蛋白是由管家基因高表达的，是细胞发育和维持细胞活力所必须的。例如，细胞核的内参蛋白 PCNA，在 DNA S 期表达，因此对于非增殖细胞不推荐使用。

四、表达因素：

选择蛋白表达不受实验变量影响的内参。

●在做多组织多细胞样本对比表达量时，zui好选用 GAPDH作为内参，因为GAPDH是代谢类蛋白，在活组织中表达比较恒定。而β-Actin和β-Tubulin是结构蛋白，不同组织的细胞结构会有差异性；

●而在某些细胞中，由于组织缺氧、糖尿病等因素会导致GAPDH的表达增高，不适合做内参；

●涉及细胞增殖的相关试验中，c-Jun由于自身表达变化不适合做内参；

●凋亡实验时，TBP、Lamin等也不适合作为内参；

●做诱导后样本或检测磷酸化等修饰性抗体时，应选择结构蛋白作为内参，如β-Actin 和β-Tubulin；

●做各种分泌液样本的时候，如血浆、乳汁、组织液等，由于没有完整的细胞结构，只能选择一些分泌蛋白作为内参。