新一代的“原代”细胞系以及处理原代细胞小秘诀

      Amanda Fentiman表示：“尽管很难获得足够的原代细胞进行分析，但除了使用更多的组织，似乎没有更好的方法。”不过她表示，新的成像系统和免疫荧光技术可以取代传统的分析方法，如western blot。“基于单细胞的western blot、单细胞测序以及微流体设备所需的样品比传统方法要少得多，”她解释说。

      当然，有些时候仍然要使用老式的western blot。“对于很难获得的细胞类型，hPSC（人多能干细胞）来源的细胞和hTERT（人端粒酶逆转录酶蛋白）修饰的细胞就变得非常有意义，”STEMCELL的资shen科学家Erin Knock说道。

      虽然hTERT、PSC和iPSC来源的细胞系并不是真正的原代细胞，但它们是十分重要的替代品，体现了原代细胞的一些最jia品质。例如，强制表达hTERT让原代细胞能维持足够的端粒长度，避免增殖性衰老。

      “hTERT诱导的原代细胞具有连续传代的能力，没有染色体不稳定性，”Knock谈道。这种细胞可以扩增，也可以冷冻、保存和解冻，以适应实验的时间安排。同样地，她认为PSC的真正价值在于能够从一种细胞分化成多种细胞类型。iPSC让研究人员能够采集轻松获取的细胞，并将它们转变为不易获取的细胞。

       目前iPSC和类器官领域的研究正在明显增加。“随着人们掌握了iPSC的技术，许多新型的‘原代’细胞系已经建立，让人们在鉴定与健康和疾病相关的细胞因子和通路方面取得了重要进展，”Damen谈道。

处理原代细胞的小秘诀

1. 细胞系本身存在一些缺点，动物模型的难度大、成本高，而原代细胞就介乎两者之间。若使用得当，原代细胞既可以带来生物学相关的结果，又可以节约时间和经费。

2. 目前，市场上多家供应商提供现成的原代细胞，并配备充分优化的培养基和实验方案。这使得原代细胞的操作比以往要轻松得多。在开展大规模研究之前，试着与供应商接触一下，看看能否对各个批号进行测试。

3. 在自行制备原代细胞时一定要小心。分离技术不过关可能导致表型不一致，污染发生、细胞生长状况不佳或死亡。如果您选择自行分离原代细胞，专家仍建议您购买专门的培养基，并以商业化的细胞作为对照。

4. 在分离过程中使用抗生素。抗生素溶液应当是新鲜配制的，或者使用新鲜解冻的溶液，使用一次后即丢弃。准备好支原体检测试剂盒，比如ATCC的PCR通用型支原体检测试剂盒（ATCC® 30-1012K™）。

5. 永远不要低估看似简单的技术。原代细胞应保存在液氮中，直至解冻。解冻过程是很快的。在培养时请注意，原代细胞对温度敏感，因此应避免反复升温和冷却。同时请注意汇合度：百分百的汇合度会导致细胞衰老。

6. 原代细胞的数量有限或无法增殖，这个缺点可以通过样品量需求较少的新型细胞成像和western blot技术来克服。不过，hTERT和PSC来源的“原代”细胞有望消除样品量的限制，成为新的替代方案。