研究基因功能的生物医学小白在课题最开始往往都是从构建一些必要的载体入手。那面对眼花缭乱的载体list（无论是Addgene还是公司）小白们更是无从下手。读完本文，小白们会在一夜之间成为载体构建的“老司机”。    大体上来说，我们研究功能无非就是在体外（in vitro）和体内（in vivo）两种实验体系中对我们的目的基因功能加以描述，如图1所示。 图1 基因功能研究的两种类型。  对于体外研究中的细胞系（或者原代细胞），我们更多会选择转染、慢病毒、逆转录病毒或者腺病毒；而对于体内研究，我们主要选择购买遗传修饰的动物模型，或者直接选用AAV介导的遗传干预。  基因功能研究无非就是三种手段-①过表达、②敲低（减）表达、③敲除，剩余的就是检测这三种干预手段对功能表型的定量和定性影响。下面我们分述在哺乳动物细胞实施这三种干预手段分别对应的载体选择。   一、过表达过表达的意思就是人为过量表达你的目的基因。这一类型的载体选择主要关注一下两点：1、启动子对于哺乳动物细胞来说，常见载体的泛表达启动子常见的基本就这几个-CMV, SV40, EF1a, CAG。大部分都选择CMV、CAG或者EF1a其中之一即可，SV40表达能力稍弱。但对于免疫细胞、干细胞我们推荐选择EF1a即可。比如图2所示的载体是哺乳动物最常用的过表达载体。需要说明的是，对于其他模式生物的细胞，比如细菌、酵母、果蝇、线虫、昆虫、爪蟾等并不适用。  图2 pCDNA3.1是哺乳动物中过表达最常用的商业化载体类型。其目的基因得分启动子是CMV。 2、标签如果过表达是编码蛋白的基因，通常我们会建议加个标签（Epitope tag）。其目的是给过表达的目的基因做个特殊标记，从而有利于后续的检测（你的过表达确定表达了么？表达量如何？）。所以这种标签通常体积较小，不会影响目的蛋白的构象、定位、功能等。比较常用的标签有FLAG、HA、Myc、GFP等，我们一个基因通常只需选一种即可，不过有时候这些标签需要多串联几个（比如，3′FLAG，3′HA，6′Myc等）一起增强检测的灵敏度。我们不讲标签的区别，他们本质上都是一段可以编码蛋白的基因片段。载体构建的时候我们的目的基因跟这些标签都是融合表达在一起的（通常标签位于目的基因的下游，也叫做（基因的）3‘端，（蛋白的）C端）（图3），后续我们只需要购买能特异性识别对应标签的抗体做免疫印迹或者免疫荧光检测即可。  图3 实例：过表达基因下游带有融合3′FLAG的载体3、选择标记选择标记（Selectable Markers）主要目的是区分表达于非表达目的基因的细胞。常见的选择标记有Puromycin、Blasticidin、Neomycin、Hygromycin、Zeocin和各种荧光蛋白如ZsGreen、EGFP、RFP、mCherry等。Puromycin、Neomycin、Hygromycin、Zeocin是一类可以用对应的小分子药物筛选的标记；荧光蛋白标记可以借助荧光显微镜直观的观察到表达目的基因的细胞，也可以直观的估计感染效率等。所以，原则是如果允许，Puromycin、Neomycin、Hygromycin、Zeocin中的一种其中一个，比如puromycin（最常用），和荧光蛋白标记中的任选一个，比如ZsGreen（最常用）等。实例如图4所示。 图4 实例。此过表达载体带有绿色荧光蛋白ZsGreen和Puromycin双重标记。 二、敲低（减、降）表达这类载体的选择要简单很多，启动子选择U6即可。但标记选择通常跟过表达类似，尽量选Puromycin和ZsGreen，如图5所示。 图5 带有ZsGreen和Blasticidin（BSD）双重标记的敲减型载体。三、敲除载体目前最常用的就是CRISPR-Cas9的基因敲除载体，该系统是个二元结构，需要在同一个细胞中一起表达Cas9和针对目的基因的sgRNA。目前所用的载体有二合一的，也有分开两个载体的。我们优先推荐二合一型载体。此类型的载体也是U6启动子驱动的载体，由于Cas9体积过大，通常这类二合一载体仅会带有一个标记，如Puromycin或GFP，但也有人用同时带有两个标记的载体。如图6所示。 图6 基于CRISPR-Cas9的基因敲除载体。我们发现该载体带有ZsGreen标记。同时Cas9C端融合FLAG标签。 注意：对于腺病毒载体，由于其感染效率极高，通常只需要带荧光蛋白单个标记即可，但推荐编码蛋白的目的基因过表达时带常见标签融合表达；对于在体基因功能研究，我们常用AAV载体，这类载体我们往往只需要待单个荧光蛋白标记即可，但推荐编码蛋白的目的基因过表达时带常见标签融合表达。  总结繁杂的载体类型，我们只需要按照①过表达、②敲低（减）表达、③敲除分类，按照上述原则简单选择目的载体即可。即使我们看不太懂质粒图谱也可以做出快速正确的选择。

中国医学科学院、中国疾病预防控制中心等机构的研究人员近日对新发现的冠状病毒（2019-nCoV）基因组进行了深入注释，发现新型冠状病毒与SARS或类SARS冠状病毒存在一些差异。在这项发表于《Cell Host & Microbe》杂志上的新研究中，研究人员对新型冠状病毒与SARS病毒和类SARS病毒进行了系统比较，鉴定出这些冠状病毒之间的380个氨基酸替换，而这些替换可能引起了新型冠状病毒的功能性和致病性差异。冠状病毒在遗传上分为四个属：α冠状病毒，β冠状病毒，γ冠状病毒和δ冠状病毒。之前已鉴定出六种人类冠状病毒，包括HCoV-NL63和HCoV-229E，它们属于α冠状病毒属；以及HCoV-OC43、HCoV-HKU1、SARS-CoV和MERS-CoV，它们均属于β冠状病毒属。研究人员指出，冠状病毒的基因组大约在26,000至32,000个碱基的范围内，包括6-11个开放阅读框（ORF）。第一个ORF约占整个基因组的67%，编码16个非结构蛋白，而其余的ORF则编码辅助蛋白和结构蛋白。四个主要的结构蛋白是刺突糖蛋白（S）、小包膜蛋白（E）、基质蛋白（M）和核衣壳蛋白（N）。其中，刺突蛋白在病毒与宿主细胞的结合中起着至关重要的作用，并决定了宿主的向性。SARS-CoV和MERS-CoV的刺突蛋白通过不同的受体结合结构域与不同的宿主受体结合。在这项研究中，研究人员对三个最先测定的新型冠状病毒基因组（HB01、HB04和HB05）进行了深入的基因组注释，并将它们与相关的冠状病毒进行了比较，包括1,008株人SRAS冠状病毒、338株蝙蝠类SARS冠状病毒和3,131株人MERS冠状病毒。在氨基酸水平上，研究人员发现新型冠状病毒与SARS病毒非常相似，但也有一些显著差异。例如，8a蛋白在SARS病毒中存在，但在新型冠状病毒中却不存在。8b蛋白在SARS病毒中有84个氨基酸，但在新型冠状病毒中有121个氨基酸。“目前还需要进一步的研究来鉴定这些差异如何影响新型冠状病毒的功能性和致病性，”根据各种病毒全基因组的系统发育分析，研究人员发现新型冠状病毒与MERS、SARS和类SARS冠状病毒处于同一冠状病毒进化枝上，但新型冠状病毒与蝙蝠类SARS冠状病毒的相似度最高，而与MERS冠状病毒的亲缘关系较远。这些结果与之前发表的研究结论相似。然而，尽管对全基因组和单个基因的系统发育分析明确表明新型冠状病毒与蝙蝠类SARS冠状病毒的亲缘关系最近，但研究人员表示，他们还没有找到蝙蝠病毒的单个毒株，其中所有蛋白质都与新型冠状病毒的对应物高度相似。“考虑到新型冠状病毒与SARS病毒和类SARS蝙蝠病毒之间的亲缘关系，分析不同蛋白质的氨基酸替换有望揭示新型冠状病毒在结构和功能上与SARS病毒有何不同，”

据世界卫生组织统计，目前新冠肺炎全球确诊病例已超过12万例，具备大流行特征。除了呼吸道标本，哪些标本也可能携带新型冠状病毒（SARS-CoV-2），这是大家都关心的。中国疾病预防控制中心、北京地坛医院和青岛市疾病预防控制中心的研究人员本周在《美国医学会杂志》（JAMA）上发文称，在感染者的肺泡灌洗液、鼻腔、痰液、粪便和血液样本中可检测到SARS-CoV-2病毒，但在尿液中检测不到。研究人员从205名新冠肺炎确诊患者中采集了1,070个样本，并利用RNA提取和实时定量PCR（RT-qPCR）来寻找新型冠状病毒的序列。如果通过40个或以下的RT-qPCR循环可检测到病毒RNA，则样本被视为阳性。而且，RT-qPCR的循环阈值越低，病毒拷贝数就越高。利用这种方法，研究人员从72个痰液样本（72/104）、5个鼻拭子样本（5/8）和126个咽拭子样本（126/398）中检测到SARS-CoV-2 RNA。尽管在72个尿液样本中未检测到病毒，但他们却从29%的粪便样本中检测到病毒（总共153个粪便样本）。于是，研究人员尝试对4个粪便样本进行后续培养和电子显微镜分析，以寻找活病毒。他们认为这相当重要，因为一旦在粪便中发现活病毒，就意味着SARS-CoV-2可能通过粪便途径传播。阳性率最明显的是支气管肺泡灌洗样本，这些样本是通过向支气管肺泡内注入生理盐水随后吸出而收集的。以这种方式收集的15个样本中，14个（93%）检测结果呈阳性。相比之下，利用纤维支气管镜刷获得的13个活检样本中，只有6个（46%）通过RT-qPCR检测出阳性。根据研究人员的分析结果，在血液中很少发现这种病毒。对于307份血液样本，他们仅从1%的样本中检测到SARS-CoV-2病毒，也就是说，只有3份血液样本呈阳性。他们怀疑这些患者是全身感染。研究人员指出，这项研究中患者的年龄从5岁到67岁不等，并于1月初到2月中旬在北京、湖北省和山东省的三家医院接受治疗。“在整个治疗期间都采集了血液、痰液、粪便、尿液和鼻腔样本，”他们解释说。在这些患者中，大约19%患有严重疾病，而大多数被诊断出病毒感染的患者也出现了明显的症状，如发烧、疲劳和干咳。不过，作者告诫称，目前的结果并不能说明不同类型的阳性样本与患者症状或疾病严重程度之间的潜在关联，因为他们无法获得所有患者的详细临床数据。研究人员总结道，“有必要对具有详细的时间和症状数据的患者以及从不同部位连续采集的样本进行进一步的调查”。

    细胞培养中污染的预防与清除     一、污染的预防    预防是防止细胞培养过程中发生污染的zui好办法。只有预防工作做在前，才能将发生污染的可能性降到zui小程度。一般预防可从以下几方面着手：    （一）从操作者做起    1、操作者责任心要强，要细心稳重，操作技术要熟练。进无菌室前要用肥皂洗手或用5%新洁尔灭浸泡5分钟，按规定穿隔离衣。进入后关好门，坐下来尽量少走动。工作开始要先用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和烧灼瓶口。事先要严格检查器材、溶液和培养物，不要把污染品或未经消毒的物品带入无菌室内，更不能随便使用，以免造成大批污染。    2、操作者动作要轻，必须在火焰周围无菌区内打开瓶口，并将瓶口转动烧灼。操作时尽量不要谈话，若打喷嚏或咳嗽应转向背面。    3、操作时要常更换吸管，切勿一根吸管做到底。一旦发现吸管口接触了手和其他污染物品应弃去。实验完毕及时收拾，保持实验室清洁整齐，zui后用消毒水浸泡的纱布擦台面。    （二）从物品、用品消毒灭菌着手    细胞培养所用物品清洗、消毒要彻底，各种溶液灭菌除菌要仔细，并在无菌试验阴性后才能使用。操作室及剩余的无菌器材要定期清洁消毒灭菌。    （三）防止细胞交叉污染    在进行多种细胞培养操作时，所用器具要严格区分，zui好做上标记便于辨别。并按顺序进行操作，避免一起进行时易发生混乱。    在进行换液或传代操作时，注射器和滴管不要触及细胞培养瓶瓶口，以免把细胞带到培养液中污染其他细胞。    所有细胞一旦购置，或从别处引入，或自己建立，均应及早留种冻存，一旦发生污染可弃之复苏，重新培养。    二、污染的清除    培养细胞一经污染，多数较难处理。如果污染细胞价值不大，宜弃之；有细胞株留存的或可购置的，可在寻找原因后彻底消毒操作室，复苏或重新购置细胞，再培养。若污染细胞价值较大，又难于重新得到，可采取以下办法清除。    （一）使用抗生素    抗生素对杀灭细菌较有效。联合用药比单独用药效果好。预防用药比污染后再用药效果好。预防用药一般用双抗生素（青霉素100u/mL加链霉素100μg/mL），污染后清除用药需采用大于常用量5～10倍的冲洗法，于加药后作用24～48小时，再换常规培养液。此法在污染早期可能有效。所用抗生素品种除青霉素、链霉素外，还可用庆大霉素、卡那霉素、多粘菌素、四环素、制霉菌素等。常用400～800μg/mL卡那霉素或200μg/mL四环素处理，每隔2～3日换液1次，传1～2代进行治疗。近年来有报道，4-氟，2-羟基喹啉（Ciprofloxacin,Cip）、截耳素衍生物（Pleu-romutilinderivative,BM-Cyclin2:BM-1和四环素衍生物（BM-2）等三种抗生素单用或合用对杀灭支原体有效。这三种抗生素均用PBS配成250X浓缩液，-20℃保存备用，使用浓度Cip为10μg/mL，BM-1为10μg/mL，BM-2为5μg/mL。使用时先吸除污染的培养液，加入含BM-1的RPMI1640培养液，3天后再吸除培养液，加入含BM-2的RPMI1640培养液，培养4天，如此连续3个轮次，直至用33258荧光染色镜检证明已清除支原体后，再加正常培养液培养传代3-4次。    （二）使用支原体特异性血清    用5%的兔支原体免疫血清（血凝效价1:320以上）可去除支原体污染，因特异抗体可抑制支原体生长，故经抗血清处理后11天即转为阴性，并且5个月后仍为阴性。但此法比较麻烦，不如用抗生素方便、经济。    （三）加温处理    将污染的组织培养物放在41℃培养18小时，可杀死支原体，但对细胞有不良影响。所以在处理前要进行预试验，摸索能zui大限度杀死支原体又对细胞影响zui小的加热时间。此法有时不可靠。若先用药物处理后，再以41℃加温处理效果更佳。    （四）其他方法    除了上述去除污染的方法外，还有动物体内接种除菌法、巨噬细胞吞噬法、污染培养瓶中加溴尿嘧啶再用光照射的方法及过滤法等，但均较麻烦，且效果不确定。所以一旦支原体污染，除非有特别重要价值，一般均弃之重新培养。

    活体光学成像(Optical in vivo Imaging)主要采用生物发光（bioluminescence）技术与荧光（fluorescence）技术。生物发光是用荧光素酶(Luciferase)基因标记细胞或DNA，今天，生物发光标记物可以标记到任何一种基因上，使对基因功能的全面细致研究成为现实。而荧光技术则采用荧光报告基团（GFP、RFP，Cyt及dyes等）进行标记，利用荧光蛋白在外源光源或是内源发光照射下被激发产生的荧光作为检测信号。研究人员能够利用一套非常灵敏的光学检测仪器直接监控活体生物体内的细胞活动和基因行为。    该技术可被广泛应用于标记细胞或基因的示踪及检测；基因治疗(gene therapy)在活体动物体内直接的观察和检测；基因组、蛋白组学、药学及生物技术在活体动物内的研究；药物及化学合成药物的药物代谢及毒理学监测；食品菌落生长成像；皮肤医学中皮肤疾病的体内成像；法医鉴定；微孔板成像，例如：免疫分析、报告基因、基因探针和嗜菌作用分析等；荧光团的体内成像，例如：Alzheimer疾病研究中结合嗪的β-淀粉沉淀物分析；转基因植物(transgenic plant)中通过报告基因对生理周期节奏的研究；凝胶成像分析等等。    实验步骤    1. 用荧光色素DiD标记间充质干细胞    1) 先用胰蛋白酶消化待标记材料，使之成为一定密度的悬浮液；    2) 从细胞培养箱中取出间充质干细胞，吸取含原有培养基的细胞悬浮液进行标记；    3) 用10 ml Mg/Ca-free PBS （不含钙镁离子的磷酸缓冲液）清洗细胞，吸去PBS，钙镁离子会影响胰蛋白酶的活性，必须小心；    4) 加入预热的0.05% 胰蛋白酶液，加液量以T75型瓶为例，每瓶加5ml，确保瓶的表面被完全覆盖；    5) 在细胞培养箱中37° C 孵育约 5 分钟；    6) 然后在显微镜下确认细胞已经完全分散，如果有细胞贴壁情况，轻拍若干次或延长孵育时间直至酶解消化完全成功；    7) 加入等量含 10% FCS的培养基中和胰蛋白酶；    8) 用移液器反复吸取几次确保细胞均匀分散；    9) 然后移取细胞悬浮液至15ml 已灭菌的有盖聚丙烯离心管中；    10) 400 RCF离心5 分钟；    11) 小心移去上清液，不要扰动细胞；    12) 将细胞重新悬浮于DMEM 并进行计数；    13) 需要待标记细胞在无血清DMEM溶液中的密度应为1x106/ml ；    14) 每ml细胞悬浮液加入5 μL DiD 染色液；    15) 用移液器将染色液与细胞悬浮液混合均匀；    16) 在6孔低附着性细胞板上37°C 孵育20分钟；    17) 孵育完全后移取细胞悬浮液至15ml 已灭菌的有盖聚丙烯离心管中；    18) 400 RCF离心5 分钟；    19) 小心移去染色液，不要扰动细胞；    20) 用PBS清洗细胞，用移液器反复吸取几次确保细胞均匀分散；    21) 重复洗三次；    22) 细胞重新计数并用台盼蓝染色法检测细胞活性；    23) 进行活细胞成像。    2. 用荧光色素ICG标记人胚胎干细胞    1) 必须先准备好吲哚菁绿溶液（血容量、心输出量、肝功能测定剂）作为对照品，然后使之与转染试剂鱼精蛋白（抗凝血作用）混合；    2) 测出1ml吲哚菁绿溶液的活力，然后在100 μL DMSO中溶解ICG；    3) 向混合物中加入 400 μL Dulbecco的改良Eagles 培养基 (DMEM加10% 胎牛血清)，震荡均匀，吲哚菁绿溶液终浓度为2mg/ml；    4) 加入转染试剂鱼精蛋白，鱼精蛋白作为对照品的载体，使之能够有效进入细胞；    5) 在300 μL ICG 和 300 μL 无血清Dulbecco改良 Eagles 培养基中混入 5 μL 硫酸鱼精蛋白溶液，使之终浓度为 10mg/ml，；    6) 震荡5分钟使之形成复合物，标记溶液制备完毕；    7) 从 hESC 10mm Petri 培养皿中移去原有培养基；    8) 加入5ml预热的 DMEM；    9) 加入制备好的鱼精蛋白/ICG 溶液， 37°C下孵育1h；    10) 孵育完全后移去染色液；    11) 用5 ml PBS漂洗培养皿以清除染色液；    12) 移去 PBS 再加入 5ml 0.25 % 胰蛋白酶液，37°C下孵育5分钟使之酶解，适当震摇培养皿效果会更好；    13) 用移液器反复吸取几次确保细胞均匀分散；    14) 加入等量含 10% KSR的培养基中和胰蛋白酶；    15) 然后移取细胞悬浮液至15ml 已灭菌的有盖聚丙烯离心管中，400 RCF离心5 分钟；    16) 在全培养基中悬浮细胞；    17) 如果还有细胞团块，可以移去原有培养基用10ml预热的全ESC培养基重新悬浮细胞，重复酶解再离心；    18) 在这一点上，鼠源饲喂细胞需从hESCs中分离；    19) 然后将细胞悬浮液移至涂布琼脂的10 cm 培养皿中；    20) 37°C 孵育 45 分钟，注意不要晃动培养皿，如此鼠源饲喂细胞会贴壁而干细胞保持悬浮；    21) 从Petri 培养皿中移出已标记的单细胞人胚胎干细胞悬浮液；    22) 细胞重新计数并用台盼蓝染色法检测细胞活性；    23) 进行活细胞成像。

在分子生物学实验中，我们通常需要分离纯化特定分子量的DNA片段，用于接下来的实验，比如酶切、连接的工作。下面主要介绍从琼脂糖凝胶中回收DNA片段的原则和注意事项，其主要原则有两项： 1、去除DNA样品中的杂质： 琼脂糖是从琼脂中提取出来的，其中含有较多的酸根和羟基多糖。目前大多数级别的琼脂糖中含有硫酸酯多糖，这种物质能抑制基因克隆中使用的多种工具酶的活性，如DNA限制性内切酶、连接酶等，在回收DNA时应尽量减少这些物质的污染。不管用哪种方法进行回收DNA，都会用到2.5 mol/L醋酸铵和乙醇沉淀，再用70%乙醇漂洗数次，这样处理，可以有效地去除一些有害的有机分子和无机盐沉淀。近年来琼脂糖的质量大为提高，出现了如低熔点琼脂糖这样的产品，不但熔点降低，其中含有的对DNA工具酶有抑制作用的物质也很少，所以有些低熔点的琼脂糖可以直接在其溶液中对DNA进行内切酶消化和DNA片段之间的连接反应。 2、提高DNA片段的回收率： DNA的回收率与DNA片段的大小有一定关系，分子量越大，回收率明显下降，大于20kb时，回收率低于20%。这是由于大的DNA片段和DEAE纤维素纸的结合力强，很难洗脱下来。DNA片段的含量也和回收率有较为密切的关系，量越少回收率越低。 回收DNA片段时应注意以下事项： 1、提高DNA上样量； 2、减小DNA回收时的洗脱容积，若容积过大，可先用正丁醇进行浓缩； 3、正确选择回收DNA片段的方法，根据回收片段的大小选择适当的回收方法。

1、DH5菌株 用途:克隆菌，用于分子克隆、质粒提取。 基因型:supE44△lacU169（?80lacZ△M15）        hsdR17 recAl endAl gyrA19        thi-1 relAl 特点:一种用于铺制与培养质粒平板和粘性平板的抑制型菌株.其?80lacZ△M15基因的产物可与pUC载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补，可用于蓝白斑筛选。recAl和endAl的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒的提取。 2、TOP10菌株 用途：克隆菌，用于分子克隆，质粒提取。 基因型：F_ mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15△lacⅩ74 recA1 deoRaraD139Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL (StrR) endA1 nupG 特点：一种用于铺制与培养质粒平板和粘粒平板的重级缺陷的抑制型菌株。其中φ80 lacZΔM15基因的产物可与pUC载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α-互补，可用于蓝白斑筛选。该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。 3、JM109菌株 用途：克隆菌，用于分子克隆。 基因型：recAl supE44 endAl hsdR17        Gyr A96 relAl thiΔ(lac-proAB )        F’[traD36 proAB+ lacZ△M15] 特点：一种支持带有琥珀突变的载体生长的重组缺陷的抑制型菌株，对转染的DNA有修饰作用而无限制作用。 4、BL21(DE3)菌株 用途：表达菌，可用于表达非毒性蛋白 基因型：hsdSgal (c I TS857indl Sam7 nin5 lacUV5-T7) 特点：该菌株用于高效表达克隆于含有T7噬菌体启动子的表达载体的基因。T7噬菌体RNA聚合酶位于噬菌体DE3区，该区整合于BL21染色体上 5、BL21(DE3)pLysS菌株 用途：表达菌，可表达毒性蛋白和非毒性蛋白。 基因型：F-, ompT hsd（rBB-mB-），gal，dcm（DE3, pLysS,Camr） 特点：pLysS菌株含有pLysS质粒，因此具有氯霉素抗性。pLysS质粒含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达。

    芒草作为zui具开发潜力的高产纤维类能源植物之一，是国内外关注和研究的热点。作为储存能量的主要器官，芒草茎的细胞壁多糖分布与沉积会直接影响其生物量产量。ELISA试剂盒近日，中国科学院青岛生物能源与过程研究所周功克团队以南荻茎为主要研究对象，利用多糖抗体免疫技术，系统研究了不同发育时期茎细胞壁多糖分布与沉积特点，为进一步了解其生长特性并通过基因工程技术创制高产能源南荻纤维生物质资源奠定了基础。    周功克等在研究中发现，结晶化纤维素与木糖是南荻茎细胞中分布zui广的多糖，两者在除韧皮部之外的区域均有大量分布，ELISA试剂盒且在不同发育时期的茎中具有相似的分布特点。韧皮部主要存在的多糖是木葡聚糖。而果胶质多糖则在南荻的茎细胞中，尤其是维管束区域，其分布呈现多样性。该研究同时鉴定到长链阿拉伯聚糖、半乳糖醛酸、岩藻化木葡聚糖等在不同发育时期的茎中分布形式具有很大差异。    上述研究得到了科技部科技支撑计划及“863”项目的支持，ELISA试剂盒成果发表于新一期Plant Cell Reports。

★ 用无水乙醇沉淀DNA，这是实验中用的沉淀DNA的方法。乙醇的优点是可以任意比和水相混溶，乙醇与核酸不会起任何化学反应，对DNA很安全，因此是理想的沉淀剂。DNA溶液是DNA以水合状态稳定存在，当加入乙醇时，乙醇会夺去DNA周围的水分子，使DNA失水而易于聚合。一般实验中，是加2倍体积的无水乙醇与DNA相混合，其乙醇的最终含量占67％左右。因而也可改用95％乙醇来替代无水乙醇（因为无水乙醇的价格远远比95％乙醇昂贵）。但是加95％的乙醇使总体积增大，而DNA在溶液中有一定程度的溶解，因而DNA损失也增大，尤其用多次乙醇沉淀时，就会影响收得率。折中的做法是初次沉淀DNA时可用95％乙醇代替无水乙酵，最hou的沉淀步骤要使用无水乙醇。也可以用0.6倍体积的异丙醇选择性沉淀DNA。一般在室温下放置15－30分钟即可。★ 在用乙醇沉淀DNA时，为什么一定要加NaAc或NaCl至最终浓度达0.1～0.25mol/L？在pH为8左右的溶液中，DNA分子是带负电荷的，加一定浓度的NaAc或NaCl，使Na+中和DNA分子上的负电荷，减少DNA分子之间的同电荷相斥力，易于互相聚合而形成DNA钠盐沉淀，当加入的盐溶液浓度太低时，只有部分DNA形成DNA钠盐而聚合。这样就造成DNA沉淀不完全，当加入的盐溶液浓度太高时，其效果也不好。在沉淀的DNA中，由于过多的盐杂质存在，影响DNA的酶切等反应，必须要进行洗涤或重沉淀。★ 加核糖核酸酶降解核糖核酸后，为什么再要用SDS与KAc来处理？加进去的RNase本身是一种蛋白质，为了纯化DNA，又必须去除之，加SDS可使它们成为SDS-蛋白复合物沉淀，再加KAc使这些复合物转变为溶解度更小的钾盐形式的SDS-蛋白质复合物，使沉淀更加完全。也可用饱和酚、氯fang抽提再沉淀，去除RNase。在溶液中，有人以KAc代替NaAc，也可以收到较好效果。★ 为什么在保存或抽提DNA过程中，一般采用TE缓冲液？在基因操作实验中，选择缓冲液的主要原则是考虑DNA的稳定性及缓冲液成分不产生干扰作用。磷酸盐缓冲系统（pKa＝7.2）和硼酸系统（pKa=9.24）等虽然也都符合细胞内环境的生理范围(pH)，可作DNA的保存液，但在转化实验时，磷酸根离子的种类及数量将与Ca2＋产生Ca3(PO4)2沉淀。在DNA反应时，不同的酶对辅助因子的种类及数量要求不同，有的要求高离子浓度，有的则要求低盐浓度，采用Tris-HCl（pKa=8.0）的缓冲系统，由于缓冲液是TrisH+/Tris，不存在金属离子的干扰作用，故在提取或保存DNA时，大都采用Tris-HCl系统，而TE缓冲液中的EDTA更能稳定DNA的活性。

    中国微生物菌种查询网：目前，有关新型冠状病毒的新闻铺天盖地，然而大多数的图片或摄影作品都是与人和社会有关的：戴着口罩的旅客、穿着防护服的医护人员，还有各种戒备森严的小区等等......但这组照片则揭露了新冠状病毒的真是面目。                                                                           这些图像是由位于蒙大拿州汉密尔顿市的美国国家过敏和传染病研究所（NIAID）落基山实验室（RML）的扫描和透射电子显微镜拍摄的。NIAID分子病机部门的负责人Emmie de Wit提供了病毒样本。显微镜专家伊丽莎白·费希尔（Elizabeth Fischer）制作了这些图像，RML的视觉医学艺术办公室对图像进行了数字着色。                                                                                                                                               这些图像与MERS-CoV（2012年出现的中东呼吸综合征冠状病毒）或最初的SARS-CoV（2002年出现的严重急性呼吸综合征冠状病毒）没有太大区别。这并不奇怪。冠状病毒表面的棘突给这种病毒家族起了个名字——冠状病毒，在拉丁语中是“王冠”的意思。大多数冠状病毒都有皇冠一样的外观。                                                                                                                                                                                                                                                                                         此外，在新冠肺炎疫情的影响之下，各行各业都遭到了一定程度的波及。在艺术行业里，影响是明显的，许多美术馆和画廊均用闭馆进行回应，或是延期举办展览，其中包括2020年的香港巴塞尔艺术展、北京画廊周、设计上海等多个大型艺术活动，甚至包括全球各大器材展览，比如日本的2020 CP+器材展和移动通信展会MWC 2020等等。

1、大肠菌群  一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。一般认为该菌群细菌包括：肠杆菌科的大肠埃希氏菌属、肠杆菌属、枸椽酸菌属、克雷伯菌属。2、粪大肠菌群  一群在44.5°C培养24-48h能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。该菌群来自人和温血动物的粪便，作为粪便污染指标评价食品的卫生状况，推断食品中肠道致病菌污染的可能性。粪大肠菌群与耐热大肠菌群的关系？  AOAC、FDA一般使用“粪大肠菌群”概念，GB4789的“粪大肠菌群”概念为等同采用AOAC方法，故而使用粪大肠菌群概念；而欧洲使用“耐热大肠菌群”概念，较少使用“粪大肠菌群”。一般欧洲学者认为，“粪大肠菌群”的提法不太科学，耐热大肠菌群的范围比粪大肠菌群范围大。3、大肠埃希氏菌  广泛存在于人和温血动物的肠道中，能够在44.5°C发酵乳糖、产酸产气，IMViC(靛基质、甲基红、VP试验、柠檬酸盐）生化试验为++--或-+--的革兰氏阴性杆菌。以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生状况，推断食品中肠道致病菌污染的可能性。  大肠埃希氏菌俗称为大肠杆菌分类于肠杆菌科，归属于埃希氏菌属。  大肠埃希氏菌的不同菌株间DNA相关性为80% ，而与同科的志贺氏菌属除鲍氏志贺氏菌外的DNA相关性可达80-87%。  大肠埃希氏菌为人和动物肠道中的常居菌， 一般多不致病，在一定条件下可引起肠道外感染。4、致泻大肠埃希氏菌  大肠埃希氏菌为人和动物肠道中的常居菌， 一般多不致病， 在一定条件下可引起肠道外感染。  某些血清型的大肠埃希氏菌菌株致病性强，能引起腹泻，与人类疾病有关的大肠杆菌统称为致泻大肠埃希氏菌。致泻大肠埃希氏菌一般包括五种（肠产毒性大肠埃希氏菌ETEC 、致病性大肠埃希氏菌EPEC 、出血性大肠埃希氏菌EHEC 、侵袭性大肠埃希氏菌EIEC 和粘附性大肠埃希氏菌EAggEC 。一般只有前4群菌株通过食品和水污染引起疾病暴发。

   随着测序等技术的发展，人们对微生物多样性的认识也越来越全面，并发现有很多环境中存在的微生物并不能在固体培养基上生长。长期以来，研究人员一直试图找出限制微生物生长的因素，希望从环境样品中尽可能多的分离培养高多样性以及新微生物物种。目前比较广泛应用的方法包括:微生物的原位培养，微流控技术，以及配制不同营养成分的培养基以更好地让微生物们在培养基上生长等。但是在实践中，研究者发现总的微生物数量和可培养的微生物之间经常存在着差异，一般我们把这种现象叫“平板计数异常”。有研究者估计只有1%的土壤细菌才能被培养，并且我们还需要准备成百上千种不同的培养基，来应对不同微生物的生长需求。     为什么大多数的微生物如此难培养呢？    部分微生物生长缓慢    在培养基上不形成克隆    它们需要一些未知的养分或者生长因子    依赖其它微生物或者宿主细胞共生    产生对自身作用的毒素    部分微生物是寡营养类型，高营养会致死    它们在休眠期    它们需要持续供给生长底物    但即使这样，依靠稀释涂平板方法获得微生物类群种类还是比较低，为什么许多微生物不在琼脂培养基上生长呢？     培养基制备要求：    培养基制备的质量将直接影响微生物生长。因为各种微生物对其营养要求不完全相同，培养目的的不同，各种培养基制备要求如下：    1、根据培养基配方的成分按量称取，然后溶于蒸馏水中，在使用前对应用的试剂药品应进行质量检验。    2、PH 测定及调节：PH测定要在培养基冷至室温时进行，因在热或冷的情况下，其PH有一定差异，当测定好时，按计算量加入碱或酸混匀后，应再测试一次。培养基 PH值一定要准确，否则会影响微生物的生长或影响结果的观察。但需注意因高压灭菌可影响一些培养基的 PH 降低或升高，故不宜灭菌压力过高或次数太多，以免影响培养基的质量，指示剂、去氧胆酸钠、琼脂等一般在调完PH后再加入。    3、培养基需保持澄清，便于观察细菌的生长情况，培养基加热煮沸后，可用脱脂棉 花或绒布过滤，以除去沉淀物，必要时可用鸡蛋白澄清处理，所用琼脂条要预先洗净晾干后使用，避免因琼脂含杂质而影响透明度。    4、盛装培养基不宜用铁、铜等容器，使用洗净的中性硬质玻璃容器为好。    5、培养基的灭菌既要达到完全灭菌目的，又要注意不因加热而降低其营养价值，一般121℃15min即可，如为含有不耐高热物质的培养基如糖类、血清、明胶等，则应采用低温灭菌或间歇法灭菌，一些不能加热的试剂如亚碲酸钾、卵黄、TTC、抗菌素等，待基础琼脂高压灭菌后凉至50℃左右再加入。    6、每批培养基制备好后，应做无菌生长试验及所检菌株生长试验。如果是生化培养 基，使用标准菌株接种培养，观察生化反应结果，应呈正常反应，培养基不应贮存过久，必要时可置4℃冰箱存放。    7、目前各种干燥培养基较多，每批需用标准菌株进行生长试验或生化反应观察，各种培养基用相应菌株生长试验良好后方可应用，新购进的或存放过久的干燥培养基，在配制时也应测PH，使用时需根据产品说明书用量和方法进行。    8、每批制备的培养基所用化学试剂、灭菌情况及菌株生长试验结果、制作人员等应做好记录，以备查询。 欢迎广大用户来电，我们将本着 “专注品质、信守承诺、积极沟通、创新服务”的精神，热诚为每一位客户提供zui的服务！

做实验的时候你知道ELISA捕获包被法检测抗体原理和步骤吗，上海远慕生物科技有限公司来告诉你。    一、原理    捕获包被法（亦称反向间接法）ELISA，主要用于血清中某种抗体亚型成分（如IgM）的测定。以目前常用的IgM测定为例，因血清中针对某种抗原的特异性IgM和IgG同时存在，则后者可干扰IgM的测定。因此先将所有血清IgM（包括异性IgM和非特异性IgM）固定在固相上，在去除IgG后再测定特异性IgM。IgM抗体的检测用于传染病的早期诊断中。先用抗人IgM抗体包被固相，以捕获血清标本中的IgM（其中包括针对抗原的特异性IgM抗体和非特异性的IgM）。然后加入抗原，此抗原仅与特异性IgM相结合。继而加酶标记针对抗原的特异性抗体。再与底物作用，呈色即与标本中的IgM成正相关。此法常用于病毒性感染的早期诊断。类风湿因子（RF）同样能干扰捕获包被法测定IgM抗体，导致假阳性反应。因此中和IgG的间接法近来颇受青睐，用这类试剂检测抗CMV IgGM和抗弓形虫IgM抗体已获成功。    捕获法测抗体的简要操作步骤：   1.特异性捕获抗体的包被，先把能特异性结合待测抗原的抗体固定于固相载体表面；   2.加入待测样品，通过固定在载体表面的针对该抗原的抗体固定于载体表面；   3.加入特异性抗原以及针对该特异性抗原的酶标抗体；   4.加入酶促反应底物，发生显色反应，显色的深浅与待测抗体的量成正比。    上海远慕生物科技有限公司一路走来依靠丰富的经验、优良的品质、充足的库存、准确的交货时间、竞争力的价格的优势等成为试剂行业的遥遥领xian者。当然这些都离不开大家的支持。我们在日后不论是销售部门、技术部门还是行政部门都要不断壮大，虚心学习，集思广益，事无具细的为客户所想，急客户所急。让客户满意，才是我们永恒的追求！

从晶形区分： 次磷酸钠，以结晶体存在形式居多； 亚磷酸钠，以结晶性粉末形式居多。 从稳定性区分： 次磷酸钠，加热易爆炸，不稳定；亚磷酸钠，加热稳定 。从毒性区分： 次磷酸钠，加热易放出有毒的磷化氢，属易制毒品； 亚磷酸钠，无毒性。 ?次磷酸钠用途：1.化学镀剂：经过化学镀的金属表层具有耐腐耐磨，均匀密致，牢固的磷合镍金镀层，可以替不锈钢材料，广泛应用与电子，机械，石油，代工，航空，航海，食品，医药等行业；2.使塑料，陶瓷，玻璃，石英等非金属材料表面金属化；3.水处理，制备各种工业防腐剂及油田阻垢剂；4.食品，工业锅炉水添加剂；5.可用作化学反应的催化剂，稳定剂；6.可用作抗氧剂；防脱色剂；分散剂；纺织物整理及医药等行业。?亚磷酸钠用途：1.用于制造尼龙增白剂、塑料稳定剂、合成纤维、二盐基亚磷酸铅、草甘膦、水处理剂ATMP和亚磷酸二氢钾等；2.是制造亚磷酸盐，合成纤维，塑料稳定剂和有机磷农药的生产原料；3.可用作聚碳酸酯的稳定剂；4.用于制造尼龙1010的抗氧化剂；5.可用于生产高效水处理剂氨基三亚甲基膦酸。?

       丙烯酸分子式C3H4O2，分子量72.06。无色液体，有刺激性气味，有腐蚀性，酸性较强。溶于水、乙醇和乙醚，还溶于苯、丙酮、氯仿等。熔点13.5℃，沸点140.9℃，密度(20/4℃) 1.0611g/cm3。化学性质活泼。在空气中易聚合，加氢可还原成丙酸。与氯化氢加成生成2-氯丙酸。用于制备丙烯酸树脂和其它有机合 成。由丙烯醛氧化或由丙烯腈水解制得，也可由一氧 化碳、乙炔和水在镍催化剂作用下制得。性质的区别：丙烯酸：是由一个乙烯基和一个羧基组成。聚氨酯：是一种高分子化合物。应用的区别：1、丙烯酸应用：①丙烯酸通过均聚或共聚制备聚合物，可用于涂料、粘合剂、固体树脂、模塑塑料等。②丙烯酸树脂可制备、橡胶合成、涂料制备、医药工业。③经纱上浆料由丙烯酸、丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯、丙烯腈、聚丙烯酸铵等为原料制成的经纱上浆剂，与聚乙烯醇上浆剂相比，可节省淀粉的容量退浆。④胶粘剂用丙烯酸、丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯、丙烯酸-2-乙基己酯等共聚乳胶，可作为静电植绒和植绒粘合剂，具有良好的牢固性和手感。2、聚氨酯应用：①主要用于建筑、汽车、航空工业、保温隔热的结构材料。②主要用于制鞋工业和医疗业。特点不同：1、丙烯酸特点：①易燃，其蒸气与空气可形成爆炸性混合物，遇明火、高热可引起燃烧爆炸。它与氧化剂反应强烈。在高热的情况下，会发生聚合反应，释放大量热量，引起容器破裂和爆炸事故。易在热、光、水、过氧化物、铁等环境中自聚，引起爆炸。②具有双键及羧基官能团的联合反应、加成反应，官能团反应和酯交换反应，长时间制备多环和杂环化合物，氢易还原为丙酸，碱易分解为甲酸和乙酸。2、聚氨酯特点：聚氨酯比PVC发泡材料有更好的稳定性、耐化学性、回弹性和力学性能，压缩改性较小。隔热、隔音、抗震、防毒效果好。因此，它可以作为包装材料、隔音材料和过滤材料。硬质聚氨酯塑料具有重量轻、隔音、隔热性能好、耐化学腐蚀、电性能好、易加工、吸水率低等优点。

测定植物体内可溶性蛋白含量的意义和用途：测定可溶性蛋白质含量也可以衡量植物在某种条件下是否会发生重金属胁迫。蛋白质是生物体内占干重比例Z大的分子,是生命活动的体现者,一般做酶活实验都是以每Mg蛋白质标定,即U/Mg蛋白质。植物体内的可溶性蛋白质大多数是参与各种代谢的酶类，可溶性蛋白质含量是一个重要的生理生化指标，测其含量是了解植物体总代谢的一个重要指标。植物体内可溶性蛋白含量的测定：一、标准曲线的绘制（1）取7支试管，编号后，分别加入0ml、0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml标准蛋白质溶液，用蒸馏水补足1ml，使每管含蛋白量分别为0μg、25μg、50μg、100μg、150μg、200μg、250μg（必要时可做重复）。（2）在每支试管中用定量加样器加入5ml甲液，混匀，于30℃下放置10min。（3）在每支试管中喷射加入0.5ml乙液，立即振荡混匀，在30℃下保温30min。（4）准确到30min后，以不加标准蛋白试管中的溶液为空白，在500nM下用1cm光径的比色杯对系列标准蛋白溶液进行比色，测定光密度值。以蛋白浓度为横坐标，光密度值为纵坐标，绘制标准曲线。二、样品的测定（1）样品的提取：称取鲜样0.5g，用5ml蒸馏水或缓冲液研磨提取。取1.0ml（视蛋白质含量适当稀释）样液加入试管中，然后重复步骤2的（2）、（3）、（4），以标准曲线中的0管为空白，测定吸光值。（2）根据吸光值查标准曲线，求出比色液中的蛋白质含量。三、结果计算样品中蛋白的含量（mg/g）=C×VTV1×FW×1000式中C：查标准曲线值（μg）；VT：提取液总体积（ml）；FW：样品鲜重（g）；V1：测定时加样量（ml）。四、注意还原物质，其他酚类物质及柠檬酸对此反应有干扰。

活体光学成像(Optical in vivo Imaging)主要采用生物发光（bioluminescence）技术与荧光（fluorescence）技术。生物发光是用荧光素酶(Luciferase)基因标记细胞或DNA，今天，生物发光标记物可以标记到任何一种基因上，使对基因功能的全面细致研究成为现实。而荧光技术则采用荧光报告基团（GFP、RFP，Cyt及dyes等）进行标记，利用荧光蛋白在外源光源或是内源发光照射下被激发产生的荧光作为检测信号。研究人员能够利用一套非常灵敏的光学检测仪器直接监控活体生物体内的细胞活动和基因行为。该技术可被广泛应用于标记细胞或基因的示踪及检测；基因治疗(gene therapy)在活体动物体内直接的观察和检测；基因组、蛋白组学、药学及生物技术在活体动物内的研究；药物及化学合成药物的药物代谢及毒理学监测；食品菌落生长成像；皮肤医学中皮肤疾病的体内成像；法医鉴定；微孔板成像，例如：免疫分析、报告基因、基因探针和嗜菌作用分析等；荧光团的体内成像，例如：Alzheimer疾病研究中结合嗪的β-淀粉沉淀物分析；转基因植物(transgenic plant)中通过报告基因对生理周期节奏的研究；凝胶成像分析等等。 实验步骤1. 用荧光色素DiD标记间充质干细胞 1) 先用胰蛋白酶消化待标记材料，使之成为一定密度的悬浮液；2) 从细胞培养箱中取出间充质干细胞，吸取含原有培养基的细胞悬浮液进行标记；3) 用10 ml Mg/Ca-free PBS （不含钙镁离子的磷酸缓冲液）清洗细胞，吸去PBS，钙镁离子会影响胰蛋白酶的活性，必须小心；4) 加入预热的0.05% 胰蛋白酶液，加液量以T75型瓶为例，每瓶加5ml，确保瓶的表面被完全覆盖；5) 在细胞培养箱中37° C 孵育约 5 分钟；6) 然后在显微镜下确认细胞已经完全分散，如果有细胞贴壁情况，轻拍若干次或延长孵育时间直至酶解消化完全成功；7) 加入等量含 10% FCS的培养基中和胰蛋白酶；8) 用移液器反复吸取几次确保细胞均匀分散；9) 然后移取细胞悬浮液至15ml 已灭菌的有盖聚丙烯离心管中；10) 400 RCF离心5 分钟；11) 小心移去上清液，不要扰动细胞；12) 将细胞重新悬浮于DMEM 并进行计数；13) 需要待标记细胞在无血清DMEM溶液中的密度应为1x106/ml ；14) 每ml细胞悬浮液加入5 μL DiD 染色液；15) 用移液器将染色液与细胞悬浮液混合均匀；16) 在6孔低附着性细胞板上37°C 孵育20分钟；17) 孵育完全后移取细胞悬浮液至15ml 已灭菌的有盖聚丙烯离心管中；18) 400 RCF离心5 分钟； 19) 小心移去染色液，不要扰动细胞；20) 用PBS清洗细胞，用移液器反复吸取几次确保细胞均匀分散；21) 重复洗三次；22) 细胞重新计数并用台盼蓝染色法检测细胞活性；23) 进行活细胞成像。 2. 用荧光色素ICG标记人胚胎干细胞 1) 必须先准备好吲哚菁绿溶液（血容量、心输出量、肝功能测定剂）作为对照品，然后使之与转染试剂鱼精蛋白（抗凝血作用）混合；2) 测出1ml吲哚菁绿溶液的活力，然后在100 μL DMSO中溶解ICG； 3) 向混合物中加入 400 μL Dulbecco的改良Eagles 培养基 (DMEM加10% 胎牛血清)，震荡均匀，吲哚菁绿溶液终浓度为2mg/ml；4) 加入转染试剂鱼精蛋白，鱼精蛋白作为对照品的载体，使之能够有效进入细胞；5) 在300 μL ICG 和 300 μL 无血清Dulbecco改良 Eagles 培养基中混入 5 μL 硫酸鱼精蛋白溶液，使之终浓度为 10mg/ml，；6) 震荡5分钟使之形成复合物，标记溶液制备完毕；7) 从 hESC 10mm Petri 培养皿中移去原有培养基；8) 加入5ml预热的 DMEM；9) 加入制备好的鱼精蛋白/ICG 溶液， 37°C下孵育1h；10) 孵育完全后移去染色液；11) 用5 ml PBS漂洗培养皿以清除染色液；12) 移去 PBS 再加入 5ml 0.25 % 胰蛋白酶液，37°C下孵育5分钟使之酶解，适当震摇培养皿效果会更好；13) 用移液器反复吸取几次确保细胞均匀分散；14) 加入等量含 10% KSR的培养基中和胰蛋白酶；15) 然后移取细胞悬浮液至15ml 已灭菌的有盖聚丙烯离心管中，400 RCF离心5 分钟；16) 在全培养基中悬浮细胞；17) 如果还有细胞团块，可以移去原有培养基用10ml预热的全ESC培养基重新悬浮细胞，重复酶解再离心；18) 在这一点上，鼠源饲喂细胞需从hESCs中分离；19) 然后将细胞悬浮液移至涂布琼脂的10 cm 培养皿中；20) 37°C 孵育 45 分钟，注意不要晃动培养皿，如此鼠源饲喂细胞会贴壁而干细胞保持悬浮； 21) 从Petri 培养皿中移出已标记的单细胞人胚胎干细胞悬浮液；22) 细胞重新计数并用台盼蓝染色法检测细胞活性；23) 进行活细胞成像。

       大肠菌群、大肠杆菌检测时，所用培养基LST、BGLB、EC肉汤等这些需要用小倒管（杜氏管）考察产气的培养基，灭菌后，偶尔会有小气泡留在小倒管内，导致培养基不能使用。重复灭菌不仅费时，更重要的是会破坏培养基的有效成分。为了避免这类问题的发生，我公司实验室根据实验经验，做出以下几种可能原因分析：原因一：高温高压灭菌锅工作压力不够，使气体不能完全排出       高压锅在灭菌过程中产生的Z大压力不够，不能将小倒管内的气体挤出，导致灭菌后任留有小气泡。此外，高温高压灭菌锅若是温度上升缓慢或者达不到灭菌温度，也会出现类似现象。解决办法：使用检查灭菌效果的用品－压力蒸汽灭菌指示卡，对高温高压灭菌锅的灭菌情况进行监测。原因二：试管塞塞得太紧       在灭菌时，试管塞塞得太紧（有些硅胶塞与试管不配套）会导致试管内压力与灭菌锅内压力不一致。当灭菌锅升温升压时，锅内压力会大于试管内压力，试管内压力不够，不能将小倒管内气体排尽，就留有气泡；当灭菌锅降温降压时，锅内压力小于管内压力，可能会使试管塞和培养基崩出，培养基报废。解决办法：改用塑料帽、不锈钢管帽，或者与试管相匹配的硅胶塞。原因三：小倒管口太小      小倒管在加热加压后，一方面液体培养基要进入小倒管，另一方面小倒管内部的空气要被排出，如果小倒管管口太小，液体不容易进去，里面的空气不容易被排出，就会导致有小气泡生成。解决办法：改用开口比较大的倒管。 以上提供几种可能形成气泡的主要原因，还有几点建议：1.可以在高压锅压力降下来后，温度不太高的时候将培养基从锅中拿出，迅速放在冷水中，急冷，注意要使冷水高度超过试管中液面高度。利用热胀冷缩的原理，可以使小倒管中气泡排出。2.若使用非全自动高温高压灭菌锅（此类锅一般需要在100℃手动关闭放气阀），则不要在锅刚达到100℃时就关闭放气阀，可以让高压锅在100℃时多排一会儿热气，这样有助于小倒管中气体排出。此外，尽量不要采用将灭菌后的试管颠倒或大角度倾斜的方式，使小倒管内气体排出。此种方法可能会导致培养基通过试管口或试管塞受到污染，或者导致试管内液体流出。

    细菌细胞在固体培养基表面形成的细胞菌体叫菌落（colony）。不同微生物在某种培养基上生长繁殖，所形成的菌落特征有很大差异，而同一种的细菌在一定条件下，培养特征却有一定稳定性。以此可以对不同微生物加以区别鉴定。因此，微生物培养特性的观察也是微生物检验鉴别中的一项重要内容。    细菌菌落的特征描述应当包括：菌落的大小、形态、颜色、光泽度、透明度、质地、隆起状态、边缘特征等。常用的描述词汇如下：大小：菌落覆盖的范围，一般描述菌落的直径即可。形态：指菌落的外观形状，常用词汇包括圆形、卵圆形、三角形、形状不规则等。颜色：包括正反面颜色，即气生菌丝和基内菌丝颜色，常用词汇包括：白色、乳白色、红色、粉色、黑色、无色等。光泽度：指表面有无光泽，可直接描述为菌落表面有光泽、无光泽、表面光滑、粗糙等。一般有荚膜的菌落表面有光泽，无荚膜的菌落表面无光泽。透明度：描述菌落透光的性质，常用词汇包括：透明、半透明、不透明。质地：指菌落的粘性、脆性等，常用词汇包括：蜡状、干燥、易挑起、粘稠感等。隆起状态：指菌落切面的形态，常用词汇包括：隆起、凸起、扁平等。边缘特征：指菌落周边的形状，常用词汇包括：波状、完整、粉粒状、啮齿状等。    一般对菌落的描述可以从以上几个方面进行，但不必包括以上所有项目，只需要根据菌落的关键特征，挑取最关键的几项进行描述即可，一般情况下挑选4-6项就可以把菌落描述清楚，但有些特殊菌落可能还需要根据具体情况加入一些其他的描述语言。常见的细菌在一些特定培养基上的形成的菌落描述见下表： 

30多年前，科学家发现诸如疯牛病和Creutzfeldt-Jakob病等神经系统疾病是由错误折叠的蛋白(called病毒)引起的。但是近年来，诺贝尔奖获得者埃里克·坎德尔(Eric Kandel)博士在小鼠中证明，某些病毒是有益的，并在大脑和人体中发挥重要的生物学功能。今天，坎德尔博士及其同事约瑟夫·雷曼(Joseph Rayman)博士在哥伦比亚进行的新研究描述了一种由TIA1基因编码的such病毒样蛋白如何帮助大脑保持恐惧记忆。没有此基因，雌性小鼠表现出创伤后应激障碍或PTSD的明显症状。这项研究的结果发表在细胞报告中，指出TIA1是对抗PTSD的新目标，这在女性中是男性的两倍。哥伦比亚大学Mortimer B. Zuckerman思维脑行为研究所的大学教授兼联合主任坎德尔博士说：“事实证明，破译生物学与环境之间的相互作用会导致包括PTSD在内的所有精神疾病，这是极其困难的。”哥伦比亚大学卡夫里脑科学教授。“今天有关TIA1的发现已经揭示了这种相互作用的一个关键组成部分。我们的研究为开发减轻PTSD和其他相关精神疾病的根本原因的治疗方法提供了有希望的前进方向。”“计算和理论建模的发展很快将使我们能够研究一个人的特定遗传组成，并确定其患上精神疾病(如PTSD)的风险。”ions病毒最初是在称为可传染性海绵状脑病的神经系统疾病中描述的，其中包括牛的疯牛病和人的克雅特病。在这些疾病中，错误折叠的pr病毒在神经细胞内聚集在一起，形成大团聚体，导致神经元降解并死亡。神经元死亡后，the病毒被释放并感染邻近细胞，就像病毒一样。随着时间的流逝，此过程会导致毁灭性的，有时甚至是致命的神经系统症状。但是在2003年，坎德尔博士和他的团队发现某些病毒不是危险的，而是功能性的，并且可以发挥重要的生物学作用。例如，在2015年，坎德尔博士及其团队发现功能性病毒CPEB3有助于大脑维持长期记忆。TIA1是另一个这样的功能性pr病毒。它有助于神经元应付细胞压力。哥伦比亚祖克曼研究所坎德尔实验室副研究员雷曼博士说：“当神经元承受压力，例如对病毒感染作出反应时，TIA1蛋白会隔离细胞内非必需的生物分子。”第1作者。“这使该小组可以将所有精力集中在应对压力上。”TIA1存在于许多大脑区域，但在腹侧海马中特别活跃，该区域已知调节与压力和恐惧有关的记忆。博士坎德尔(Kandel)和雷曼(Rayman)想知道，TIA1功能的破坏是否会导致恐惧记忆的破坏-这在PTSD中起关键作用。为了找出答案，研究人员改变了雄性和雌性小鼠腹侧海马中TIA1的含量。然后，科学家训练小鼠使无毒气味(乙醇的气味)与压力体验相关联。当放置在其他有乙醇气味的环境中时，这些动物表现出回避行为：它们趋向于远离压力性气味。但是当研究人员删除TIA1时，他们看到了行为上的变化-这种变化仅xian于雌性小鼠。去除TIA1似乎对雄性没有影响，但是雌性的回避行为急剧增加。他们的恐惧记忆大大增强了。研究人员认为，这种明显的性别差异可能是揭示为什么PTSD的患病率比男性高得多的重要关键。它还强调了将雌性老鼠纳入科学研究的重要性，长期以来，科学界一直不鼓励这种做法。“将雌性小鼠纳入科学研究是一种最近的现象;研究人员曾经认为女性体内周期性激素的变化会使研究结果复杂化。”雷曼博士说。“但是将雌性小鼠纳入我们的研究证明具有转化性。如果不检查女性大脑，我们将永远不会发现TIA1的重要性。”精神疾病非常复杂。人们认为它们与许多基因有关，每个基因仅对问题造成了很小的贡献。但是博士坎德尔(Kandel)和雷曼(Rayman)相信，他们的工作可以扩展到识别和治疗人们的疾病。例如，PTSD最终可以追溯到恐惧记忆的异常处理。负责老鼠恐惧记忆的大脑区域也负责人的恐惧记忆。雷曼博士说：“不仅如此，在小鼠基因组中还存在编码小鼠TIA1的基因。”“为了寻找TIA1活性水平与人类压力反应之间的联系，我们目前正在分析瑞典个体的DNA。” 

      槲皮素，又名栎精，槲皮黄素，溶于冰醋酸，碱性水溶液呈黄色，几乎不溶于水，乙醇溶液味很苦。可作为药品，具有较好的祛痰、止咳作用，并有一定的平喘作用。此外还有降低血压、增强毛细血管抵抗力、减少毛细血管脆性、降血脂、扩张冠状动脉，增加冠脉血流量等作用。用于治疗慢性支气管炎。对冠心病及高血压患者也有辅助治疗作用。槲皮素及其糖苷常用的提取方法有浸渍法、碱提酸沉法、回流法和超声法等。浸渍法： 浸渍法是zui简单的提取方法，即选用一定量的溶剂，将被提取物浸渍一定时间，过滤除去滤渣，浓缩滤液即可。该方法耗时长且得率较低，故近年来很少用于化合物的提取，但在比较不同提取方法的优劣时可用作对照。王文清等以 70% 乙醇作为溶剂，分别采用超声提取30分钟，加热回流1小时， 浸渍12小时 三种方法提取20g细梗胡枝子药材，得到槲皮素的含量分别为4. 89、5.39 和 4.71μg/ g， 芦丁的含量分别为36.70、37.53和 34.68μg/ g。结果显示，采用加热回流法提取槲皮素和芦丁的提取率均较高，浸渍法提取率zui低。 ?碱提酸沉法： 碱提酸沉法是提取植物中槲皮素及其糖苷的传统方法之一，该方法主要是利用黄酮苷类化合物易溶于碱性水溶液，难溶于酸性水溶液的性质。赵希等提取槐米中芦丁和槲皮素时，20g的槐米粗粉加入0.4%的硼酸水溶液200ml，用石灰乳调节pH值8~9。在微沸条件下搅拌提取30分钟，将滤液用浓盐酸调节pH值2~3，静置12小时后离心处理，沉淀用pH值1~2的浓盐酸洗涤一次， 蒸馏水洗涤至中性，沉淀物经65℃真空干燥得到芦丁粗品。精制芦丁后取1g，用2%的硫酸（溶液80ml，加热回流90 分钟 转化得到槲皮素。回流法：回流法也是提取槲皮素及其糖苷常用的方法之一，通常是将药材加入到一定溶剂中进行回流，采用正交试验法考察提取时间、溶剂用量和浓度等因素的影响。吴杰等分别用回流法与浸渍法提取仙人掌中的槲皮素，结果得到提取物中槲皮素的含量分别0. 2423、0. 2018 mg / g，可见回流法的提取率比浸渍法更高。该研究还用正交试验法考察了溶剂、溶剂浓度、回流时间、仙人掌粉末粒度四个因素对提取效率的影响，确定zui佳回流提取条件为过60目筛的干燥仙人掌粉末10g，加95%甲醇 200ml，回流3小时。用回流法提取槲皮素及其糖苷操作简单，提取率高，存在溶剂有毒以及加热时易发生危险等缺点。超声提取法：超声提取具有时间短、得率高、安全、可靠、无毒等优点。以不同提取试剂分别用回流法和超声提取两种方式提取鱼腥草中的槲皮素，并对提取率进行了比较。结果表明，超声提取的提取率稍低于回流提取，差异不显著，但超声提取更简捷、快速。 因此，考虑到经济性， 超声提取法优于回流提取。

    本公司专业经销代理elisa检测试剂盒，进口试剂，近日，我司实验室经常接到客户这样的疑问，他们在测试大肠杆菌转化子时，大肠杆菌转化子有大有小，结果诡异，想咨询一下具体原因。     这情况我遇到过，尤其菌液PCR时候，有的强有的弱，有的带大小还不一样。我没有具体研究过啥愿意，但把大小一样的那个送去测序，一般都是正确的。 ?关于你的这个情况，我分析【我自己的我也分析过】1、可能酶产物碎了一些，这样连进去就有大有小。如果你引物用的是在载体上的，那很可能扩出大小不同的。如果你引物就是在基因上的，这个好解决，你把退火温度逐渐提高，看看是不是那个不同片段就没了。2、有的时候发生了片段自连【这个看起来好像很可笑，但其实我发现只要末端有一个碱基配对，时间长的话，片段是可以连接到一起的，这个就跟TA连接实际一样】。3、你的电泳系统有污染，你把别人的片段给收进去了，这个我确实证实过，我一批克隆40个基因，我曾经在别的克隆中挑出过另外的基因。4、另一种可能，你T载体上连接的方向问题，如果酶切不彻底，可能同样会造成不同大小片段，这些如果你量很多的话其实在跑电泳回收时候是分不开的，但PCR赶巧了，也许就正好扩出来了【这种情况只限于载体上有你用的酶切位点，而你目的片段上恰恰引入了这连个酶，这个你可以试着画个图看看，把TA连接的正反画画】。5、DH好像能长很大的，也没关系的，我的有时候就很大点，其实不用放室温，你冰箱4-8℃那层放置1个月，就看出来了。6、所以我觉得这个问题也没法纠结了。如果你觉得切割实在很难，那干脆重新PCR从T载体上扩出来【高保真扩一般也不会突变，当然TAKARA的primerstar除外】，带上酶切位点，然后直接回收酶切连接就可以了，找到重组子后测序正确在表达就行了不是。     新品ELISA试剂盒，一经上市就获得免疫试验实验者的重复订购使用；恒远生物供应的ELISA试剂盒改进试验方法，采用双抗夹心一步法定量检测种属含量，更，更快速，特异性更强。

    干扰素（IFN）是一种广谱抗病毒剂，并不直接杀伤或抑制病毒，而主要是通过细胞表面受体作用使细胞产生抗病毒蛋白，从而抑制乙肝病毒的复制；同时还可增强自然杀伤细胞（NK细胞）、巨噬细胞和T淋巴细胞的活力，从而起到免疫调节作用，并增强抗病毒能力。干扰素是一组具有多种功能的活性蛋白质（主要是糖蛋白），是一种由单核细胞和淋巴细胞产生的细胞因子。它们在同种细胞上具有广谱的抗病毒、影响细胞生长，以及分化、调节免疫功能等多种生物活性。 作用机制     干扰素不能直接灭活病毒，而是通过诱导细胞合成抗病毒蛋白（AVP）发挥效应。干扰素首先作用于细胞的干扰素受体，经信号转导等一系列生化过程，激活细胞基因表达多种抗病毒蛋白，实现对病毒的抑制作用。抗病毒蛋白主要包括2′-5′A合成酶和蛋白激酶等。前者降解病毒mRNA、后者抑制病毒多肽链的合成，使病毒复制终止。 干扰素的作用特点：①间接性通过诱导细胞产生抗病毒蛋白等效应分子抑制病毒。②广谱性抗病毒蛋白是一类酶类，作用无特异性。对多数病毒均有一定抑制作用。③种属特异性一般在同种细胞中活性高，对异种细胞无活性。④发挥作用迅速干扰素既能中断受染细胞的病毒感染又能限制病毒扩散。在感染的起始阶段，体液免疫和细胞免疫发生作用之前，干扰素发挥重要作用。我司所售人干扰素调节因子试剂盒质量好，灵敏度高，现货供应，咨询。

      ELISA试剂盒源自先进的酶联免疫技能生物科技有限公司，包括国内外专家的经历与才智。选用先进的技能和设备，保证质量的一起，降低成本，为更多有需求的研究人员，节约实验经费，保证实验质量，为国家的科技开展多做奉献。多家生物科研基地合作伙伴，实力团队倾力打造专心于ELISA试剂盒的出产，研发，助力您的科研实验!科技开展多做奉献。多家生物科研基地合作伙伴，实力团队倾力打造专心于ELISA试剂盒的出产，研发，助力您的科研实验!       现如今，ELISA试剂盒品种繁多，品牌多样，使得科研者和经销商在选购时眼花缭乱；ELISA试剂盒有好有坏，有真有伪，更让我们无从下手。今日，我司将区别好坏ELISA试剂盒的四个办法奉告我们，期望能对我们有所帮助。办法一：       选定一个检测范围内的浓度做多孔重复，可看出平行性好不好。即板内CV值的大小，此操作时需求当心加样的性。对一些制造较粗糙的试剂盒来说，板间CV值是较大的。办法二：       可选用已知浓度的重组细胞因子，稀释到检测范围内作为样本参加，看检测的性。办法三：       对用待测目标的重组细胞因子做试剂盒说明书上标定的zui小浓度稀释，可测出灵敏度，主张5个复孔以上才有含义。一般厂家以20个复孔做出的成果作为检测限。用此实验可验证出所购试剂盒的灵敏度是否如说明书所述，也可判别出所购试剂盒是否有夸张之说。办法四：       如果有相同目标的试剂盒，可用对方的标准品作为样本，分别参加各自的试剂盒做检测，以检测试剂盒的真实性，性。如其中一种是闻名的，比较牢靠的话，可作为标准来验证另一试剂盒的程度。       上海远慕生物科技有限公司主营：Elisa试剂盒,人Elisa试剂盒,大鼠Elisa试剂盒,小鼠Elisa试剂盒,生物试剂,血清,抗体,培养基,标准品,国产血清、GIBCO胎牛血清等。种属齐全，价格优惠。期待您的咨询与合作！

    当重要的培养污染时，研究者可能试图消除或控制污染。首先，确定污染物是细菌、真菌、支原体或酵母，把污染细胞与其它细胞系隔离开，用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台，检查HEPA过滤器。 高浓度的抗生素和抗霉菌素可能对一些细胞系有毒性，因而，做剂量反应实验确定抗生素和抗霉菌素产生毒性的剂量水平。这点在使用抗生素如两性霉素B和抗霉菌素如泰乐菌素时尤其重要。下面是我司推荐的确定毒性水平和消除培养污染的实验步骤：  1. 在无抗生素的培养基中消化、计数和稀释细胞，稀释到常规细胞传代的浓度。 2. 分散细胞悬液到多孔培养板中，或几个小培养瓶中。在一个浓度梯度范围内，把选择抗生素加入到每一个孔中。例如，两性霉素B推荐下列浓度，0.25，0.50，1.0，2.0，4.0,8.0 mg/ml。  3. 每天观测细胞毒性指标，如脱落，出现空泡，汇合度下降和变圆。   4. 确定抗生素毒性水平后，使用低于毒性浓度2～3倍浓度的抗生素的培养液培养细胞2～3代。  5. 在无抗生素的培养基中培养细胞一代。  6. 重复步骤4。 确定抗生素毒性水平后，使用低于毒性浓度2～3倍浓度的抗生素的培养液培养细胞2～3代。 7. 在无抗生素的培养基中培养4～6代，确定污染是否以已被消除。   ?     我司分析细胞培养细胞培养技术也叫细胞克隆技术，在生物学中的正规名词为细胞培养技术。不论对于整个生物工程技术，还是其中之一的生物克隆技术来说，细胞培养都是一个必不可少的过程。

  前言：根据我司多年销售经验总结，经常有学校医院客户自我介绍自己准备收集样本检测细胞因子，那么、常见的细胞因子试剂盒主要有哪些呢？现在，我司销售部根据我司的产品销售目录为您详细整理“细胞因子试剂盒的范围”：1、白细胞介素：  白细胞介素（IL）简称白介素，由白细胞（和其他细胞）产生，并在细胞间发挥广泛炎症、刺激活化作用的细胞因子。已报道的白细胞介素有30余种。Th1细胞因子主要是IL-2、IL-12、IFNγ；Th2细胞因子主要是IL-4、IL-5、IL-6、IL-10，分别促进Th1、Th2分化和功能，分别促医学''教育网搜集整理进细胞免疫和体液免疫应答。IL-10和TGFβ是调 节性T细胞的效应因子。    2、干扰素：  可分为I型和Ⅱ型干扰素：I型干扰素包括IFN-α、IFN-β，由APC和成纤维细胞产生，有较强抗病毒转录复制作用；II型干扰素即IFN-γ，主要由活化T细胞产生，通过激活APC功能和巨噬细胞、NK、CTL细胞功能发挥抗病毒作用。IFN-α已被成功应用于慢性乙肝的 治疗。   3、肿瘤坏死因子：   肿瘤坏死因子（TNF）：使肿瘤发生出血、坏死的细胞因子。肿瘤坏死因子超家族（TNFSF）目前至少有19个成员，在调节适应性免疫、杀伤靶细胞和诱导细胞凋亡等过程 中发挥重要作用。肿瘤坏死因子分为TNF-α和淋巴毒素（LT，或TNF-β）。 4、集落刺激因子：  集落刺激因子（CSF）是指能够刺激多能造血干细胞和不同发育分化阶段的造血祖细胞增殖分化，在半固体培养基中形成相应细胞集落的细胞因子。目前发现的集落医学''教育网搜集整理刺激因子有粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、粒细胞集落刺激因子（G-CSF）、红细胞生成素（EPO）、干细胞生长因子（SCF）、血小板生成素（TPO） 和白细胞介素-11等。 5、生长因子：     生长因子（GF）是具有刺激细胞生长作用的细胞因子，包括转化生长因子-β（ TGF-β）、表皮细胞生长因子（EGF）、血管内皮细胞生长因子（VEGF）、成纤维细胞生长因子（FGF）、 神经生长因子（NGF）、血小板衍生的生长因子（PDGF）等。 6、趋化因子：     趋化性细胞因子：是一个蛋白质家族，分子量多为8-10kDa的多肽组成。趋化性细胞因子的主要功能是招募血液中的单核细胞、中性粒细胞、淋巴细胞等进入感染发生的部位。 分为4种亚家族：1.CC亚家族；2.CXC亚家族3.C亚家族4.CX3C亚家族。    

1、表达量提高        通过细胞培养技术的不断改进可以充分利用现有设备，大幅度提高生物制品表达量，降低生物制品的单位制造成本；同时，由于产量提高并不新增固定资产投资，也带来生物制品的单位固定成本的降低。        因此提高表达量可以有效降低生物制品的单位成本，既降低变动成本，也降低固定成本，使得制品利润率提高，市场竞争能力增强。 2、培养液成本降低        在很多使用牛血清的细胞培养液中，为牛血清支付的成本远远高于培养液中的细胞培养基等其它成分，因此通过采用低血清细胞培养基，降低牛血清用量，可以降低细胞培养液总成本。 3、纯化成本低，制品安全性提高        牛血清的使用量不仅增加了细胞培养液的成本，更严重的是带来动物来源成分、杂蛋白，以及不安全因素，这些成分越多，纯化的成本越高、生物制品原液损失越大，生物制品的成本越大。因此采用低血清、无血清培养细胞可以有效降低纯化成本何损失，提高生物制品成品率和利润率。 4、综合成本降低        综上所述，动物细胞培养技术是生物制品产业化的核心技术之一，在生产中，应该系统、全面的研究细胞培养技术对生物制品成本的综合影响，不断追求zui好的细胞培养技术，提高生产效率，有效降低生物制品成本，提高利润率，增强产品市场竞争力。

 ELISA是蛋白定量的金标准，也是免疫学研究中*常用的实验方法。很多人觉得ELISA很简单，其实不然。ELISA中出现的各种问题，正是很多人对其认识不足而产生的。今天跟大家分析一下ELISA实验中的常见问题，希望对大家有所帮助。 一、标曲不显色或显色很弱，样本显色 溶解标准品以及倍比稀释时，未涡旋震荡或不够充分。标准品溶解时，需要涡旋震荡，以保证充分溶解。在做倍比稀释时，也要涡旋震荡以保证充分混匀。单纯依靠移液器反复吹打，效率较低、效果也不一定*佳。 二、标曲和样本均不显色 在孵育阶段静置在桌面上，这样非常不利于抗原抗体之间的充分接触，导致显色偏弱。推荐孵育阶段，使用ELISA专用的微孔板振荡器，调至合适的频率，使抗原抗体充分接触，保证结合效果。 如果排除上述原因，有可能是漏加了某个组分，如检测抗体、酶等。对于比较马虎的新手，一定要做好标记和记录，或者使用添加染料的elisa试剂盒。 三、标曲显色，样本不显色 遇到这种情况，很多人觉得是试剂盒问题，这其实是一个误区。任何一种实验方法，都有其局限性，当样本中目的蛋白浓度极低或者样本中干扰因素较强，就无法检测到。目前ELISA仍然是蛋白检测灵敏度*的方法，与不同技术结合后，衍生出了多种类型的ELISA，提高了检测灵敏度。如采用信号增强剂的高敏ELISA、ECL为底物的化学发光ELISA、采用荧光法检测的ELISA、结合PCR扩增的免疫PCR等等。 对于目的蛋白浓度特别低的样本，可以尝试用高敏ELISA，但这也并不意味着一定能检测到样本浓度，只能说可以提高样本的可测率，并使结果更加可靠。因为通常用普通ELISA检测的样本OD值都偏低，甚至低于标准品浓度*的S7点，虽然可以计算得到数值，但实际上这个数值的可信度已经降低了。而高敏ELISA可提高样本OD值，使之尽量位于标曲范围内，得到的数值也更加可信。需要指出的是，国内某些所谓的高敏elisa试剂盒，并没有采用信号增强剂的方法，而只是简单地提高了抗体浓度，较普通ELISA其灵敏度的提升有限。 还有人觉得，为什么用其它厂家的试剂盒可以测到样本值，而我们的就是测不到呢？这里就涉及到回收率这个概念了，详细的阐述下次有机会可以跟大家再聊一聊。简单来说，回收率就是样本的真实值和理论值之间的比值，优xiu试剂盒的这个数值在80 – 120%之间。与回收率相关的试剂就是试剂盒中的标准品稀释液。筛选出合适的标准品稀释液，使目的蛋白含量接近的标准品和样本显色速度相似，那么计算得到的样本值也会比较接近真实值。要想测到样本值并不是很难，只要选择合适的标准品稀释液，压低标曲的本底，自然就会计算得到样本值，然而这样的样本值并不真实，对于科研来说没有太大的参考意义。 四、标曲和样本都显色，但复孔的CV大 这个问题就跟移液器和实验者的操作有关了。移液器的使用维护不规范，就会造成移液的误差较大。实验者自身的操作习惯、加样的一致性对复孔的CV也有很大影响。大家可以参考关于移液器使用的文章，正确使用和维护移液器。个人的操作可以在空白板上练习移液动作，或者在几十个离心管中加入相同体积的水，通过电子天平称量，检验移液的精密度。同时还需练习加快加样速度，减少从*个样本到*后一个样本加样时间过长导致的差异。 五、本底偏高，样本值测不到 标曲的本底即Blank孔的OD值一般要求控制在0.1以下(对于高敏ELISA可以适当放宽要求)。尤其是样本值特别低的时候，本底过高会掩盖目的信号，导致无法测到样本值。 在加入TMB显色后，需实时观察标曲显色qing况。通常在S5孔有肉眼可见的微弱蓝色，即可终止反应。 六、样本经不同梯度稀释，计算得到的样本值差异较大 有时候我们不清楚样本中目的蛋白的浓度如何，应该如何稀释，那么我们就会做下预实验，确定稀释倍数。然而有时候同一样本做了几个不同梯度稀释后，计算得到的样本值之间差异较大，应该选择哪一个稀释倍数呢？ 这里涉及到了基质效应。通常血清样本加样量较高时，血清中的各种蛋白会抑制抗原抗体的接触，基质效应较明显。而经过稀释后，干扰因素也随之稀释，影响就会较小。当某两个梯度稀释后，计算得到的样本值接近时，我们就可以认为在该稀释梯度时，样本中的干扰因素影响较小，计算得到的值也是接近真实的。然而这样的稀释是针对目的蛋白浓度较高的样本而言。对于浓度很低的样本，经过多倍稀释后，就更加测不到了，此时可按照厂家说明书推荐的加样方式操作。 七、同一样本使用不同厂家的ELISA试剂盒检测，计算得到的样本值差异较大 这里涉及到另一个评估试剂盒性能的参数——校准。不同厂家采用的标准品可能有所不同，对其定量的方法和标准也不同，这就是企业标准。因此哪怕是同一个标准品，在不同厂家各自的实验条件下测定，结果可能也会差异很大。 因此，我们并不建议将不同厂家的结果进行对比，除非他们都是用国际标准品进行了校准。然而，并非所有蛋白都有国际标准品，因此使用不同厂家的产品计算的样本值差异较大的现象也在所难免。 但都用同一厂家的试剂盒检测样本，那么结果还是可以进行统计学分析的。 八、不同试剂盒中的组分能否通用 除非是公用的试剂如洗液、检测缓冲液，其它组分不建议用其它试剂盒的组分，甚至是同一指标不同批次的试剂盒里的组分。这些组分(包括标准品、标准品稀释液、检测抗体、酶等)都是经过优化的，如果贸然使用其它试剂盒的组分，有可能对结果产生影响。 

    过敏症是临床免疫学方面紧急的事件。许多过敏症为IgE介导。现在描述为一组包括免疫或非免疫机制、常常是突发的、涉及多个靶器官的严重临床症状是一个具有多种诱发物、致病机制不尽相同的临床综合征。        进入过敏季节我们可能并不太会拿出手帕或者打喷嚏来预防过敏，科研成果显示：研究人员通过研究发现，一种益生菌组合或许能够帮助减轻花粉症的症状。 ?     很多研究都发现，益生菌能够帮助调节机体应对过敏症的免疫反应，但并不是所有的益生菌都能够带来帮助。研究者表示，并不是所有益生菌都能够帮助抵御过敏症，如今我们知道，一种由乳酸杆菌和双歧杆菌组成的益生菌组合能够帮助维持机体消化系统和部分免疫系统的健康，于是我们就推测是否这种益生菌组合也能够通过增加机体调节性T细胞的比例来发挥作用，从而增加机体抵御花粉症的耐受性。     研究人员招募了173名健康成年人进行研究，研究对象都表示经历过季节性过敏，研究人员将研究对照随机分为两组，一组接受益生菌组合疗法，另外一组服用安慰剂，在为期8周的研究过程中，每周研究对象都会通过在线调查来反应机体的不适程度。随后研究人员对参与者粪便样本中的DNA进行分析来确定其机体中肠道细菌的改变情况，因为益生菌能够将有益菌输送到肠道组织中，DNA检测结果表明益生菌成功进入到了参与者机体的肠道中。     随后研究人员在春季过敏高峰时进行了相关实验，相比安慰机组研究对象而言，摄入益生菌治疗的研究对象表示其生活质量得到了改善，比如益生菌组个体遭受的花粉症相关的鼻腔症状明显减轻了；研究者指出，本文研究并不包括哪些严重过敏症患者，但益生菌组合或许对于治疗温和型的季节性过敏也具有一定的临床益处。     据其它研究报告显示，季节性过敏反应能够降低人们工作和学习的质量以及影响个体的睡眠质量，同时还会诱发个体压力以及困窘状态；当前的过敏症疗法往往会带来一定的副作用，比如口干、嗜睡等，因此后期研究人员希望通过更为深入的研究来开发新型有效的疗法治疗个体的季节性过敏症。

    近期，根据ELISA试剂盒课题组对抗体做出最新报导：跟着人员老龄化、环境恶化和生活习惯的改动，肿瘤现已变成一种发病率越来越高的恶性疾病，肿瘤患病率和死亡率的不断上升也促使肿瘤用药商场的不断添加。   商场选用的双特异性抗体（bispecific antibody， BsAb）是指富含两种特异性抗原联系位点的人工抗体，能够一起与靶细胞和功用细胞进行相互作用，介导一系列免疫反响。依据双特异性抗体的构造能够将其分为IgG类亚型和非IgG类亚型两种，各类别下都具有多种不一样的方式。其间又以IgG类亚型的三功用抗体（Triomab）和非IgG类亚型的双特异性T细胞联接器（Bispeific T cell Engager，BiTE）技能最为老练，在医治作用、成药稳定性等方面体现优良，现在在临床开展中最为靠前。据远慕了解：抗体界新贵迎黄金期：国外巨子广泛规划，国内玩家少商场大！?与一般抗体比较，双特异性抗体添加了一个特异性抗原联系位点，在医治方面有以下优势：(1)一般两个抗原联系位点别离能够联系肿瘤细胞和免疫细胞，将特定的免疫细胞经过重定向征集至肿瘤细胞周围以增强对肿瘤的杀伤力；(2)能够一起阻断两种不一样介质通路而发挥共同或堆叠的功用，介导多种免疫信号通路然后增强细胞杀伤毒性；(3)两种不一样的细胞表面抗原联系后，ELISA试剂盒相对而言也许潜在地添加联系特异性，下降脱靶等副作用。因此，双特异性抗体在肿瘤免疫医治和炎症医治中展示了广阔的运用远景。    在临床运用上，双特异性抗体展示了本钱低、医治作用好等明显优势。以代表双特异性抗体zui先进技能的BiTE为例，与传统抗体比较在组织渗透率、杀伤肿瘤细胞效率、脱靶率和临床适应症等目标方面具有较强的竞赛力，临床运用优势明显。特别在运用剂量方面，因为其医治作用能够到达一般抗体的100～1000倍，运用剂量能够下降为本来的1/100，明显下降药物医治本钱，拓宽了商场空间。   技能改进推进上市零突破，将来临床运用具有无限也许。双特异性抗体是一种新式的抗体制备技能，制备办法大致阅历了以下三个阶段：化学偶联法、杂交瘤法和基因工程法。以双特异性T细胞联接器（Bispeific T cell Engager，BiTE）技能为代表的新一代双特异性抗体在医治作用、成药稳定性、制备技能等方面体现极为优良，完成了双特异性抗体在FDA批件零的突破。Amgen公司的Blinatumomab在2014年年末现已正式上市，关于费城染色体阴性的前B细胞急性淋巴细胞白血病的医治，并且正在扩展适应症范围，现在关于卵巢癌、胃癌和上皮组织癌的临床实验现已开展到临床Ⅱ期。此外，仍有10余个双特异性抗体商品正在展开临床实验。能够预见，将来10年将是双特异性抗体开展的黄金期间，ELISA试剂盒不断上市的商品和继续证明的临床作用将不断招引产业界和出资界的重视。作为抗体代理商，具有完善的售后服务体系，近期更推出新品牌BIM，国内独立代理商，详情可来电咨询哦。