植物体内游离脯氨酸测定有何意义

上海远慕生物科技有限公司

2020/01/09 10:10

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测定植物体内可溶性蛋白含量的意义和用途：
测定可溶性蛋白质含量也可以衡量植物在某种条件下是否会发生重金属胁迫。
蛋白质是生物体内占干重比例Z大的分子,是生命活动的体现者,一般做酶活实验都是以每Mg蛋白质标定,即U/Mg蛋白质。
植物体内的可溶性蛋白质大多数是参与各种代谢的酶类，可溶性蛋白质含量是一个重要的生理生化指标，测其含量是了解植物体总代谢的一个重要指标。
植物体内可溶性蛋白含量的测定：
一、标准曲线的绘制
（1）取7支试管，编号后，分别加入0ml、0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml标准蛋白质溶液，用蒸馏水补足1ml，使每管含蛋白量分别为0μg、25μg、50μg、100μg、150μg、200μg、250μg（必要时可做重复）。
（2）在每支试管中用定量加样器加入5ml甲液，混匀，于30℃下放置10min。
（3）在每支试管中喷射加入0.5ml乙液，立即振荡混匀，在30℃下保温30min。
（4）准确到30min后，以不加标准蛋白试管中的溶液为空白，在500nM下用1cm光径的比色杯对系列标准蛋白溶液进行比色，测定光密度值。
以蛋白浓度为横坐标，光密度值为纵坐标，绘制标准曲线。
二、样品的测定
（1）样品的提取：称取鲜样0.5g，用5ml蒸馏水或缓冲液研磨提取。
取1.0ml（视蛋白质含量适当稀释）样液加入试管中，然后重复步骤2的（2）、（3）、（4），以标准曲线中的0管为空白，测定吸光值。
（2）根据吸光值查标准曲线，求出比色液中的蛋白质含量。
三、结果计算
样品中蛋白的含量（mg/g）=C×VTV1×FW×1000
式中C：查标准曲线值（μg）；VT：提取液总体积（ml）；FW：样品鲜重（g）；V1：测定时加样量（ml）。
四、注意
还原物质，其他酚类物质及柠檬酸对此反应有干扰。