蛋白质糖基化位点检测：用酶或化学脱糖基化、通过选择性标记或通过凝集素亲和层析法是检测蛋白糖基化常用方法。一、用 PNGaseF（N-多糖酶）处理。1. 以 0.1 mol/L 磷酸钠（或 Tris-HCl，而不用柠檬酸）缓冲液，pH 7.4 ( 7.0~8.0 ) 配制高达 2 mg/ml 的蛋白溶液，并含 50 mmol/L β-巯基乙醇和 0.1% SDS，在水浴中煮沸 2 分钟。2. 加 1/10 体积的 10% NP-40 溶液（或使 SDS 浓度少于或等于 0.17%，NP-40：SDS 的质量比在终反应中至少是 7:1)。3. 加 PNGaseF 到终浓度为 6 mU/ml。注意这里的 1U 相当于在 1 分钟形成的 1 微摩尔产物；--些厂家用 1U = 1 nmole/分 在 37℃ 中保温 16 小时，以完全脱糖基化。4. 用 TCA/DOC 按照下列步骤沉淀以制备 SDS-PAGE 样品。(1) 在样品中加等体积的含 50% TCA 的 10 mmol/L DOC 溶液，并且在冰上放置 20 分钟。(2) 以最大速度（16000 g)，4℃ 下离心样品 15 分钟。(3) 用冷丙酮清洗沉淀一次，并再次离心样品。(4) 用 SDS-PAGE 样本缓冲液重悬最后的沉淀，如有必要，可用小体积的 1 mol/L Tris pH 8.0。将悬液调至 pH 8.0 样品上样至凝胶上进行电泳。二、用 EndoH 处理1. 在 100 mmol/L、pH 5.5 的柠檬酸钠缓冲液中制备浓度达到 1 mg/ml 的蛋白样品。2. 用 10 mU/ml 酶 37℃ 消化样品过夜。3. 按常规的方法处理样品用于 SDS-PAGE 分析。三、酶去除 O -多糖1. 二甲胂酸钠（磷酸盐或马来酸盐，但不是 Tris-HCl ) 中制备浓度 5 mg/ml 的蛋白，pH 6~7.6。2. 用 10 mU/ml 的酶消化样品，在 37℃ 孵育过夜。3. 按照 PNGaseF 第 4 步所述的方法（TCA/DOC 沉淀）处理反应混合物以进行 SDS-PAGE。四、来自产脲节杆菌的唾液酸苷酶1. 以 pH 5.0、50 mmol/L 醋酸钠制备 0.5 mg/ml 的蛋白溶液。2. 加 10 mU/ml 的唾液酸苷酶，37℃ 下保温 12~16 小时。3. 制备样品用于 SDS-PAGE 分析。

　　pH测量通常有比色法（pH试纸或比色皿）和电极法二种。比色法当然不要标定，而电极法就一定要标定，因为电极法pH测量就是将未知溶液与已知pHs值的标准溶液在测量电池中作用比较测定，这是电极法pH测量的“操作定义”所决定的。　　pH计因电计设计的不同而类型很多，其操作步骤各有不同，因而pH计的操作应严格按照其使用说明书正确进行。在具体操作中，校准是pH计使用操作中的一重要步骤。　　尽管pH计种类很多，但其校准方法均采用两点校准法，即选择两种标准缓冲液：一种是pH7标准缓冲液，第二种是pH9标准缓冲液或pH4标准缓冲液。先用pH7标准缓冲液对电计进行定位，再根据待测溶液的酸碱性选择第二种标准缓冲液。如果待测溶液呈酸性，则选用pH4标准缓冲液；如果待测溶液呈碱性，则选用pH9标准缓冲液。若是手动调节的pH计，应在两种标准缓冲液之间反复操作几次，直至不需再调节其零点和定位（斜率）旋钮，pH计即可准确显示两种标准缓冲液pH值。则校准过程结束。此后，在测量过程中零点和定位旋钮就不应再动。若是智能式pH计，则不需反复调节，因为其内部已贮存几种标准缓冲液的pH值可供选择、而且可以自动识别并自动校准。但要注意标准缓冲液选择及其配制的准确性。　　其次，在校准前应特别注意待测溶液的温度。以便正确选择标准缓冲液,并调节电计面板上的温度补偿旋钮,使其与待测溶液的温度一致。不同的温度下，标准缓冲溶液的pH值是不一样的。　　校准工作结束后，对使用频繁的pH计一般在48小时内仪器不需再次定标。如遇到下列情况之一，仪器则需要重新标定：　　⑴溶液温度与定标温度有较大的差异时.　　⑵电极在空气中暴露过久，如半小时以上时.　　⑶定位或斜率调节器被误动；　　⑷测量过酸（pH12）的溶液后；　　⑸换过电极后；　　⑹当所测溶液的pH值不在两点定标时所选溶液的中间，且距7pH又较远时。　　1、 测量时应按说明书规定的时间周期对仪器进行校准。　　2、 校准时应注意：　　标准缓冲溶液温度尽量与被测溶液温度接近。　　定位标准缓冲溶液应尽量接近被测溶液的pH值。或两点标定时，应尽量使被测溶液的pH值在两个标准缓冲溶液的区间内。　　校准后，应将浸入标准缓冲溶液的电极用水特别冲洗，因为缓冲溶液的缓冲作用，带入被测溶液后，造成测量误差。　　3、 记录被测溶液的pH值时应同时记录被测溶液的温度值，因为离开温度值，pH值几乎毫无意义。尽管大多数pH计都具有温度补偿功能，但仅仅是补偿电极的响应而已，也就是说只是半补偿，而没有同时对被测溶液进行温度补偿，即，全补偿。

标准物质RM（reference material）是具有准确量值的测量标准，是具有一种或多种足够均匀并已确定特性值的，用于校准设备、评价测量方法或给材料赋值的材料或物质。应用于化学测量、生物测量、工程测量、无力测量等领域。有证标准物质CRM（certified reference material）是附有证书的标准物质，用建立了溯源性的程序来确定其一种或多种特性值，使之可溯源到准确复现的用于表示该特性值的计量单位，而且每个标准值都附有给定置信水平的不确定度。其证书是介绍标准物质的技术文件，是研制者/生产者向用户提出的质量保证。证书给出了标准物质的标准值及其准确度，扼要的描述标准物质的制备程序、均匀性、稳定性、特性量值及其测量方法，介绍标准物质的正确使用方法、储存方法。所有的化学分析，定性定量，都依赖于，并且最后，可溯源至一种有证标准物质或某种类型的标准物质。标准物质是指具有已知成分、含量或性质的物质，广泛应用于实验室和工业生产中用于校准仪器、验证方法、质量控制以及确定未知样品等方面。标准物质的种类繁多，以下是其中常见的几种类型：纯度标准物质：用于确定化学物质的纯度和杂质含量，确保其符合规定的纯度要求。浓度标准物质：用于测定溶液的浓度，通常用于校准分析仪器和验证分析方法的准确性。酸碱标准物质：用于测定酸碱度（pH值）的标准物质，确保pH计和电极的准确性。溶解度标准物质：用于测定物质在特定溶剂中的溶解度，用于制定溶解度测定方法。水分标准物质：用于校准水分测定仪器，确保样品中水分含量的准确测定。熔点标准物质：用于校准熔点仪，确定化合物的熔点范围。气体标准物质：用于校准气体分析仪器，确保气体浓度的准确测定。药物参比品：用于确认药物的质量和疗效，作为药物生产过程中质量控制的参考标准。生物学标准物质：用于评估生物制品的活性、纯度和效力，例如生物制剂和疫苗。微生物标准物质：用于检测和验证实验室培养基的质量和性能，以及评估药物对微生物的抗菌活性。这些标准物质在不同领域的实验室和工业生产中发挥着重要作用，确保实验和生产过程的准确性和可靠性。它们的使用帮助保证实验数据的准确性，并为研究和生产提供了可靠的参考基准。

　　为了避免杂菌污染，获得微生物纯培养物，培养基必须及时严格灭菌。通常采用高压蒸汽灭菌。一般培养基用0. IMPa (121℃)维持15 ~ 30min即可彻底灭菌。长时间的高温灭菌会使某些不耐热的物质破坏，如使糖类物质形成氨基糖、焦糖。因此，含糖培养基常用0.05MPa (110℃) 灭菌20 ~ 30min某些对糖类要求更高的培养基，可先将糖过滤除菌或间歇灭菌，再与其他已灭菌的成分混合。长时间高温灭菌也会使磷酸盐、碳酸盐与钙、镁铁等阳离子形成难溶性化合物而产生沉淀。为了防止这类沉淀发生，可将这些物质分别灭菌，冷却后再混合；也可在培养基中加入少量整合剂(0.01%乙二胺四乙酸，即EDTA)使金属离子形成可溶性络合物，防止沉淀的产生。高压蒸汽灭菌一般使培养基 pH降低， 应在配制培养基时加以调节。　　干热灭菌和湿热灭菌,干热灭菌方法：包在铁质容器内,进行高温烘烤.湿热用牛皮纸包起来放在高压锅中进行高压灭菌.　　湿热灭菌、煮沸灭菌和过滤除菌,煮沸灭菌在电磁炉或者微波炉内进行煮沸即可,过滤除菌适用于不能高温处理的培养.　　高压蒸汽灭菌：　　高压蒸汽灭菌适合于耐高温培养基、接种器械和蒸馏水的灭菌。培养基在爱制备过程中混入各种杂菌，分装后应立即灭菌，至少应在24h内完成灭菌工作。灭菌时一般是在0.105MPa压力下，温度121℃时，灭菌15~30min即可。消毒时间不宜过长，也不能超过规定的压力范围，否则有机物质特别是维生素类物质就会在高温下分解，失去营养作用，也会使培养基变质、变色，甚至难以凝固。　　可将蒸馏水或自来水装在三角瓶中，装水量一般不超过瓶的2/3，用牛皮纸或硫酸纸包扎封口，然后放入高压锅中灭菌后即为无菌水。 灭菌后的培养基可放到培养室中预培养3d，若无污染现象，则证明灭菌是彻底的，可以使用。暂时不用的培养基最好置于10℃下保存。含IAA或GA3的培养基应在1周内用完，其他培养基最多也不要超过1个月。　　过滤灭菌：　　一些植物生长调节剂及有机物，如IAA、GA3、ZT、CM等，遇热容易分解，不能与培养基一起进行高温灭菌，而要使用细菌过滤器滤去其中的杂菌。细菌过滤器与滤膜（孔径0.45微米）使用之前要先进行高压灭菌。过滤后的溶液要立即加入培养基中，若为液体培养基，可在培养基冷却至30℃时加入；若为固体培养基，必须在培养基凝固之前（50-60℃）加入，振荡使溶液与其他成分混合均匀。

　　一.组织RNA提取　　1.最好新鲜组织，这样RNA提取的效果比较好，这是肯定的。　　2. 如果不是新鲜的（最好在半年之内，-80℃或者液氮中冻存的）组织，注意不要反复冻融，从冰冻状态拿到0-4℃，注意不要拿到常温，待组织解冻后，用 DEPC泡过的剪刀剪一小块组织，称重后，放到预冷的匀浆器中，然后加入一定量的TRIZOL试剂，然后匀浆。　　注意：速度不要太快，要匀一会挺一会，否则由于摩擦产热，RNA遇热会加速降解。如果一次做多个标本的RNA提取，也要这样做，更不能急。后面的步骤和细胞RNA提取一样。　　二.培养细胞的RNA提取　　1.贴壁细胞，需要先用胰酶消化后，然后收集到离心管中，离心，去上清，然后用PBS多洗2-3次，以去除多余的胰酶。　　悬浮细胞，直接用吸管或者加样枪吹打评壁，以使细胞基本可以被吹下来。然后离心去上清，不需要用PBS洗。　　2.然后将少量细胞悬液转移到预冷的DEPC泡过的1.5毫升EP管中，然后加入一定量的TRIZOL(细胞多的话加1毫升，细胞少的话加0.5毫升就可以)，然后用枪头吹打混匀5-10分钟。（如果有时间就继续往下做，如果没有时间，可以把加了TRIZOL后的细胞裂解液冻存到-80℃，用的时候提取和新的提取的效果一样。）在冰上操作。　　3.上面的混匀5-10 分钟，基本可以使细胞裂解，然后可以进行下面的步骤，详细的步骤我就不介绍了。　　注意事项：　　1.一定要注意冰上操作，低温离心。　　2.戴口罩和勤换手套，去任何东西都要带着手套去取。　　3.每次去器材的时候都要用镊子去夹，镊子要在酒精灯上烧一下。　　4.所有的器材都要经过DEPC浸泡后高压后才可以使用，所需要的氯仿，酒精，异丙醇等都保证没有被RNA 酶污染，不能用没有泡过DEPC的枪头去提取液体，一定要用DEPC浸泡过的枪头去吸，如果发现试剂有可能被污染了，要立即更换。　　5. 吸取上清一定不要吸到中间层的蛋白，如果吸到蛋白一定要重新用氯仿抽提，因为，吸到的蛋白很可能会对RNA产生降解作用。一定要少吸，不要贪多，RNA提取不要求量，更多的要求质。　　6.最后用75%的酒精洗一次就可以，尽量减少RNA提取时间。　　7.最后一步，用 DEPC水溶解RNA，不要用太多的体积，以保证RNA的浓度。　　8.提取完后，电泳观察结果，如果上面的两条带都比较清楚的话，说明RNA提取的不错，可以一次多逆转录几管，不要把RNA冻存，以后在逆转录的效果不好。

高纯试剂简介高纯试剂是反映化学试剂纯度高低的一个类别概念，它表示，该试剂中起干扰作用离子的相对量很少；该试剂可以被用于一般的定量分析实验。比如，色谱用的乙腈，是一种高纯试剂。用途高纯试剂通常应用于，例如针对色谱使用的 色谱纯试剂、针对光谱使用的 光谱纯试剂。此外，电路、液晶等领域都有各自行业标准的高纯试剂。但是高纯试剂通常不使用在 分析纯试剂使用的领域，如配制标准溶液、滴定剂等，高纯的单质例外。纯度表示不同行业使用的高纯试剂有各自的标注方式，通用的标注是用9的数目来表示。例如，纯度为99.999%，含五个九则表示为5N；纯度为99.995%，含四个九一个五，表示为4.5N。

　　组蛋白是构成真核生物染色体的基本结构蛋白，富含带正电荷的Arg和Lys等碱性氨基酸，等电点一般在pH10.0以上，属碱性蛋白质，可以和酸性的DNA紧密结合，而且一般不要求特殊的核苷酸序列。　　用聚丙烯酰胺凝胶电泳可以区分5种不同的组蛋白：H1、H2A、H2B、H3和H4。几乎所有真核细胞都含有这5种组蛋白，而且含量丰富，每个细胞每种类型的组蛋白约6×10个分子。5种组蛋白在功能上分为两组：　　①核小体组蛋白。包括H2A、H2B、H3和H4。这4种组蛋白有相互作用形成复合体的趋势，它们通过C端的疏水氨基酸互相结合，而N端带正电荷的氨基酸则向四面伸出以便与DNA分子结合，从而帮助DNA卷曲形成核小体的稳定结构。这4种组蛋白没有种属及组织特异性，在进化上十分保守，特别是H3和H4是所有已知蛋白质中最为保守的。从这种保守性可以看出，H3和H4的功能几乎涉及它们所有的氨基酸，任何位置上氨基酸残基的突变可能对细胞都将是有害的。　　②H1组蛋白。其分子较大。球形中心在进化上保守，而N端和C端两个“臂”的氨基酸变异较大，所以H1在进化上不如核小体组蛋白那么保守。在构成核小体时H1起连接作用，它赋予染色质以极性。H1有一定的种属及组织特异性。在哺乳类细胞中，组蛋白H1约有6种密切相关的亚型，氨基酸顺序稍有不同。在成熟的鱼类和鸟类的红细胞中，H1 为H5取代。有的生物如酵母缺少H1，结果酵母细胞差不多所有染色质都表现为活化状态。

冰冻切片免疫荧光实验步骤1、冰冻切片固定冰冻切片37℃烘烤10至20分钟，控干水分，置于4%多聚甲醛固定30min。于PBS缓冲液中晃动洗涤3次，每次5分钟。2、抗原修复将切片浸没在升满EDTA抗原修复缓冲液（PH8.0）的修复盆中，置于微波炉内进行抗原修复，修复条件：中火8min至沸——停火8min保温——中低火7min（整个过程需防止修复液过度蒸发，切勿干片。自然冷却后，将切片置于PBS缓冲液中。然后在摇床上，晃动洗涤3次，每次5min。3、画圈血清封闭切片稍甩干后，用组化笔在组织周围画圈，滴加组织自发荧光淬灭剂A液，室温孵育30min，纯水洗5分钟，接着滴加BSA牛血清白蛋白，封闭30min。4、加一抗轻轻甩掉封闭液，在切片上滴加按比例配好的一抗后，切片平放于湿盒内4℃孵育过夜。5、加二抗切片浸没在PBS缓冲液中，然后在摇床上，晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后，滴加荧光二抗，覆盖组织，避光室温孵育50min。6、DAPI复染细胞核切片浸没在PBS缓冲液中，晃动洗涤3次，每次5min。甩干后，在圈内滴加即用型DAPI染液，避光室温孵育10min。7、淬光组织自发荧光切片置于PBS缓冲液中，晃动洗涤3次，每次5min。在圈内滴加组织自发荧光淬灭剂B液，避光室温孵育5min，水洗10min。8、封片切片稍甩干后用抗荧光淬灭封片剂封片，推荐使用远慕生物配套试剂、耗材、仪器，实验效果更佳！冰冻切片免疫荧光结果判读：DAPI染出来的细胞核在紫外的激发下为蓝色，阳性表达为相应荧光素标记的红光或绿光等。

　　多克隆抗体的制备一般包括以下几个步骤：　　1、制备抗原。　　2、选择实验动物。　　3、动物免疫。　　4、试取血进行测试，看看是否成功免疫。　　5、如果成功免疫，杀死实验动物，采集全部血清。　　6、纯化出抗体。　　7、鉴定抗体。包括纯度以及特异性。　　（一）抗原制备　　Ig 是免疫球蛋白，对异种动物而言，是良好的抗原物质。可以刺激异种动物产生抗 Ig 血清，　　经适当提取后，产生抗 Ig 抗体，又叫第二抗体或抗抗体。在多数的间接标记反应中，均需制备　　抗 Ig 抗体。　　（二）材料与试剂　　1．提取的动物 Ig　　2．弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂　　3．青霉素和链霉素　　4．实验动物 兔　　5．其它材料及试剂

　　丽春红（Ponceau S）也称猩红，可以用于PVDF膜、硝酸纤维素膜（nitrocellulose membrane）和醋酸纤维素膜（cellulose acetate membrane）上的蛋白的检测。丽春红带负电荷，可以与带正电荷的氨基酸残基结合，同时丽春红也可以与蛋白的非极性区相结合，从而形成红色的条带。丽春红染色的灵敏度不及考马斯亮蓝染色。　　丽春红对蛋白的染色是可逆的，染色后可以用蒸馏水，PBS或其它适当溶液洗去。因此，蛋白质N端测序时将SDS-PAGE胶上的蛋白转移到PVDF膜，用丽春红染色后将目的条带切下用于测序。　　注意：丽春红染色液不适用于尼龙膜上的蛋白的检测。　　丽春红染色液的配制　　常用的丽春红染色液有两种：一种用乙酸配制，另外一种用三氯乙酸（TVA）和5-磺基水杨酸（5-Sulfosalicylic acid）配制。配制方法如下：　　一、用乙酸配制成分：0.1%（w/v）丽春红，5%（v/v）乙酸，ddH2O。　　4 ℃保存，不要冻上。也可以配成“0.2%（w/v）丽春红，3%（v/v）乙酸，ddH2O”。　　二、用三氯乙酸和5-磺基水杨酸成分：2% （w/v）丽春红，30%的三氯乙酸，30%的5-磺基水杨酸。　　丽春红染色液使用说明　　将PVDF膜、硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜浸没在丽春红染色液中，摇动5-10分钟或更长时间；取出印迹膜，用蒸馏水，PBS或其它适当溶液漂洗2-3次，可出现清晰条带，记录结果；用蒸馏水，PBS或其它适当溶液漂洗2-3次，每次3-5分钟，去除丽春红，进行后续的WB检测。　　补充：丽春红染色液也可以直接用来染PAGE胶，不过，在染色之前最好用甲醇-乙酸溶液浸泡一下PAGE胶，起到固定蛋白的作用。

　　斐林试剂和班氏试剂的使用方法及原理不尽相同。斐林试剂和班氏试剂都是检验还原性糖的试剂，二者的使用方法及原理、成分也有区别，下面就从这几种试剂的使用原理、成分及使用方法等方面做一简单总结。　　（1）班氏试剂常用于尿糖的鉴定，其配方与斐林试剂不一样，其配方为：　　①400mL水中加85g柠檬酸钠和50g无水碳酸钠；　　②50mL加热的水中加入8.5g无水硫酸铜。制成溶液；　　③把CuSO4溶液倒入柠檬酸钠溶液中，边加边搅，如产生沉淀可滤去。　　（2）其反应原理与斐林试剂略有差别。利用斐林试剂鉴定时，斐林试剂甲和斐林试剂乙直接反应生成酒石酸络铜离子。　　酒石酸络铜离子和可溶性还原糖在加热条件下反应产生砖红色沉淀。而班氏试剂中的产生却是这样的：柠檬酸钠作为络合剂，由碳酸钠提供碱性。CuSO4与柠檬酸钠溶液和Na2CO3溶液混合时生成柠檬酸络铜离子，柠檬酸络铜离子与葡萄糖中的醛基反应生成砖红色沉淀。　　（3）两种试剂的保存方式不同。斐林试剂甲和斐林试剂乙混合后会因酒石酸有一定的还原性而自发地缓慢产生氧化亚铜沉淀，因此斐林试剂一般为现用现配；而班氏试剂的配方中，柠檬酸钠比较稳定，实际碱性也不强，不易还原铜离子产生氧化亚铜沉淀，因此该试剂可长期保存。　　当然，无论用班氏试剂还是斐林试剂，归根结底都是二价铜与醛基在沸水浴加热条件下反应而生成砖红色的沉淀，两者反应现象一样，这就是二者的相同之处。

  对照品与标准品区分  对照品与标准品是2个不同的概念，中国药典凡例中已有明确的定义：  对照品系指用于鉴别、检查、含量测定和校正检定仪器性能的标准物质，而标准品系指用于生物检定、抗生素或生物药品中含量或效价测定的标准物质，以效价单位(U)表示。  文献中常将2种概念混淆，认为对照品就是标准品，是1种物质2种提法而已，造成错误的原因，可能是有的药品既有对照品，又有标准品。例如当用微生物法测定头孢克罗效价时，用头孢克罗标准品，用高效液相色谱仪HPLC或紫外分光光度计UV法测定时，则用对照品;非那西丁当用作熔点校准物质时，用熔点标准品，测定含量时用对照品。即使是同一种物质的标准品和对照品，它们的规格、标定方法以及用途都可能是不同的。  对照品或标准品混用，即将对照品或标准品用于不是其标定方法的含量测定，是药品检验中经常出现但未引起重视的一个问题。尽管同一批对照品不同标定方法的含量有很好的相关性，但并不完全相同，有时差别会很大。如英国Glaxo公司提供的头孢呋肟酯对照品，HPLC标定为96.9%，供含量测定用;UV为98.8%，供溶出度测定。虽然中国药典凡例明确规定卫生部所发对照品仅用于正文中所规定的分析方法。但由于：  (1)卫生部提供的对照品使用说明书不够详尽，大多无对照品质量要求及标定方法;  (2)对对照品或标准品的正确使用缺乏认识;  (3)日常科研中极难找到相应的对照品;  (4)中国药典正文中也常存在对照品混用的问题，如常将含量测定用的标准品或对照品用于溶出度检查，而含量测定方法与溶出度分析方法又不同，故极易引起混用。

  产品内容：  1. 结晶紫染色液(Crystal Violet Staining Solution)是一种组织或细胞染色时常用的可以把细胞核染成深紫色的染色液。  2. 结晶紫是一种碱性染料，可以和细胞核中的DNA结合，从而产生细胞核染色。  3. 一个包装的本染色液至少可以染色200个样品。  4. 室温避光保存，一年有效。  使用说明：  1. 样品处理  a) 对于石蜡切片：二甲苯中脱蜡5-10分钟。换用新鲜的二甲苯，再脱蜡5-10分钟。无水乙醇5分钟。90%乙醇2分钟。70%乙醇2分钟。蒸馏水2分钟。  b) 对于冰冻切片：蒸馏水2分钟。  c) 对于培养细胞：用4%多聚甲醛固定10分钟以上。蒸馏水洗涤2分钟。换用新鲜的蒸馏水，再洗涤2分钟。  2. 结晶紫染色  对于上述处理好的样品：结晶紫染色液染色10分钟(可以根据染色结果和要求调整时间)。  用蒸馏水或自来水充分洗涤后即可进行观察和拍照。  注意事项：  1. 需自备4%多聚甲醛。如果需要脱水、透明和封片处理，还需自备二甲苯，中性树胶或其它封片剂。如果样品是石蜡切片，需自备70%和90%乙醇，无水乙醇以及二甲苯。  2. 样品数量较多时，可以使用染色架和染色缸，便于操作。  3. 第一次使用本试剂盒时建议先取1-2个样品做预实验。  4. 结晶紫对人体有害，请注意适当防护。  5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。  有效期：12个月有效。

质粒提取主要有碱裂解法，煮沸裂解法，小量一步提取法等。1、碱裂解法原理：根据共价闭合环状DNA与线性DNA的拓扑学结构差异来分离的。在强碱环境下，细菌的细胞壁和细胞膜被破坏，基因组DNA和质粒DNA被释放出来，线性DNA双螺旋结构被破坏而发生变性。虽然在强碱的条件下共价闭合环状质粒DNA也会发生变性，但两条互补链仍会互相盘绕，并紧密的结合在一起。当加入pH4.8的乙醋酸钾高盐缓冲液使pH恢复中性时，共价闭合环状质粒DNA复性快，而线性的染色体DNA复性缓慢，细菌蛋白质、破裂的细胞壁和变性的染色体DNA会相互缠绕成大型复合物，后者被十二烷基硫酸盐包盖。当用钾离子取代钠离子时，复合物会从溶液中有效地沉淀下来，离心除去变性剂后，就可以从上清中回收复性的质粒DNA。2、煮沸法裂解：将细菌悬浮于含Triton X-100和能消化细胞壁的溶菌酶缓冲液中，然后加热到100℃使其裂解。加热除了破坏细胞壁外，还有助于解开DNA链的碱基配对，并使蛋白质和染色体DNA变性。但是，闭环质粒DNA彼此不会分离，这是因为他们的磷酸二酯骨架具有互相缠绕的拓扑结构，当温度下降后，闭环DNA的碱基又各自就位，形成超螺旋分子，离心除去变性的染色体核蛋白质，就可从上清中回收质粒DNA。煮沸裂解法对于小于15kb的小质粒很有效，可用于提取步至lmL（小量制备），多至250mL（大量制备）菌液的质粒，并且对大多数的大肠杆菌菌株都适用。3、小量一步提取法：由于细菌染色体DNA比质粒大得多,受机械力后细菌染色体DNA会被震断成不同大小的线性片段而缠绕附着在细胞碎片上，并发生变性。同样受机械力质粒DNA会变性，机械力消失后复性。但质粒DNA的复性快，仍溶于溶液而细菌染色体DNA复性较慢，会形成不溶的网状结构，通过高速离心可以分离得到质粒DNA 。

标准溶液的取得有两种方法，一种是用基准物质直接配制，一种是用基准物质或已知准确浓度的标准溶液进行标定来取得。用于配制或标定标准溶液浓度的最高纯度化学试剂称为基准试剂或基准物质，用基准试剂或基准物质配制成已知准确浓度的溶液称为标准溶液。标准溶液的浓度准确与否直接关系检测结果的精密度、准确度。因此配制和标定中你必须知道这些事：1、用于配制或标定的标准溶液浓度的基准物质必须符合以下条件：（1）纯度高、杂质含量一般不得超过0.001%，达到优级纯。（2）化学性质稳定，不易吸湿，不被空气氧化，干燥时不分解。（3）分子量大，使用时易溶于水、稀酸、稀碱和有机溶剂，能精确称量。（4）使用中符合化学反应的要求，组成恒定，标定时能按化学反应式定量完成，没有副反应或逆反应，便于计算。2、基准试剂必须经充分干燥后称取，当zhi定使用含有结晶水的试剂时，只能将其放在适宜的干燥器内进行干燥而不得加热。3、分析实验所用的溶液应用纯水配制，容器应用纯水洗三次以上。特殊要求的溶液应事先作纯水的空白值检验。(应符合GB-6682《实验室用水规格》中三级水的规定。4、所用试剂的纯度应为分析纯或分析纯以上，根据不同的工作要求合理选用相应级别的试剂。5、为保证试剂不受污染，应用清洁的牛角勺从试剂瓶中取出，绝不可用手抓取。6、试剂结块可用洁净的粗玻璃棒或瓷药铲将其捣碎后取出。7、打开易挥发的试剂瓶塞时不可把瓶口对准脸部。夏季由于室温高，试剂瓶中很易冲出气液，最好把瓶子在冷水中浸一段时间再打开瓶塞。放出有毒，有味气体的瓶子应该密封。8、若嗅试剂气味，可将瓶口远离鼻子，用手在试剂瓶上方扇动，绝不可用舌头品尝试剂。9、所用天平的砝码，滴定管，容量瓶及移液管均需定期校正。10、配制硫酸，磷酸，盐酸等溶液时，都应把酸倒入水中。对于溶解时放热较多的试剂，不可在试剂瓶中配制，以免炸裂。11、配制硫酸溶液时，应将浓硫酸分为小份慢慢倒入水中，边加边搅拌，必要时以冷水冷却烧杯外壁。溶解氢氧化钠，氢氧化钾等时，大量放热，也必须在耐热容器中进行。12、用有机溶剂配制溶液时，有时有机物溶解较慢，应不时搅拌，可以在热水浴中温热溶液，不可直接加热。易燃溶剂使用时要远离明火。几乎所有的有机溶剂都有毒，应在通风柜内操作，为避免有机溶剂不必要的蒸发，烧杯应加盖。13、不能用手接触腐蚀性及有ju毒的溶液，剧毒废液应作解毒处理，不可直接倒入下水道。14、溶液要用带塞的试剂瓶盛装，见光易分解的溶液要装于棕色瓶中，挥发性试剂例如用有机溶剂配制的溶液，瓶塞要严密，见空气易变质及放出腐蚀性气体的溶液也要盖紧，长期存放时要密封。浓碱液应用塑料瓶装，如装在玻璃瓶中，要用橡皮塞塞紧，不能用玻璃磨口塞。15、配制或标定标准溶液所用试剂必须是基准试剂或优级纯试剂。16、用直接法配制标准溶液时，准确称取一定量的基准试剂溶解后移入容量瓶中，用溶剂稀释到标线。根据所取的基准试剂的量和容量瓶的容量直接计算溶液的准确浓度。17、用间接法配制标准溶液时，先配成稍高于所需浓度的溶液，用基准试剂或已知浓度的标准溶液准确标定其浓度。必要时用稀释法调整其浓度至所需值。18、配制好的标准溶液应注明名称、浓度、配制日期、有效期、配制人，其浓度：用 mol/L、mg/L、ng/L表示。19、每份基准试剂的用量不应过小，使用25ml滳定管时，以能消耗20ml滴定液为宜；实用50ml滴定管时，以能消耗45ml滳定液为宜。20、对浓度不稳定的标准溶液，应酌情定期重新标定。最好在每次使用前进行标定。21、除高氯酸外，均指20℃时的浓度。在标准滴定溶液标定，直接制备和使用时若温度有差异，应要求补正。22、GB601-2002规定标定标准滴定溶液的浓度时，须两人进行实验，分别各做四平行，每人四平行测定结果极差的相对值不得大于重复性临界极差[CrR95(4)]的相对值0.15%,两人共八平行测定结果极差的相对值不得大于重复性临界极差[CrR95(8)]的相对值0.18%。23、标准滴定溶液浓度平均值的扩展不确定度一般不应大于0.2%。24、滴定分析用标液在常温(15-25C)下,保存时间一般不超过2个月.当溶液出现浑浊、沉淀、颜色变化等现象时，应重新配制。25、制备的标准溶液浓度与规定浓度相对误差不大于5%。浓度值取四位有效数字。26、配制浓度等于或低于0.02mol/L标准溶液时，应于临用前将浓度高的标准溶液用煮沸并冷却的水稀释，必要时应重新标定。27、碘量法反应时，溶液的温度不能过高，一般在15～20℃之间进行滴定。28、在标定和使用标准滴定溶液时，滴定速度一般应保持在6mL/min－8mL/min。29、称量工作基准试剂的质量的数值小于等于0.5ｇ时，按精确至0.00001ｇ称量；数值大于0.5ｇ时按精确至0.0001ｇ称量。30、标准滴定溶液的浓度小于或等于0.02moL/L时，应于临用前将浓度高的标准滴定溶液用煮沸并冷却的水稀释，必要时重新标定。31、储存标准滴定溶液的容器，其材料不应与溶液起理化作用。壁厚最薄出不小于0.5mm。32、所有的溶液以（%）表示的均为质量分数，只有乙醇（95%）中的（%）为体积分数。33、各种标准溶液必须按其化学性质进行配制和储存，对于在稀溶液中不稳定的物质，应先配制浓度较高的储备液，使用前 按分析方法的要求配制成稀释液。34、高浓度剧毒或有毒物质的储备液应按有毒试剂的使用和管理办法执行，妥善保管，不得随意放臵。

免疫学检测即根据抗原、抗体反应的原理,利用已知的抗原检测未知的抗体或利用已知的抗体检测未知的抗原。由于外源性和内源性抗原均可通过不同的抗原递呈途径诱导生物机体的免疫应答,在生物体内产生特异性和非特异性T细胞的克隆扩增,并分泌特异性的免疫球蛋白(抗体)。由于抗体-抗原的结合具有特异性和专一性的特点,这种检测可以定性、定位和定量地检测某一特异的蛋白(抗原或抗体)。免疫学检测技术的用途非常广泛,它们可用于各种疾病的诊断、疗效评价及发病机制的研究。最初的免疫检测方法是将抗原或抗体的一方或双方在某种介质中进行扩散,通过观察抗原-抗体相遇时产生的沉淀反应,检测抗原或抗体,最终达到诊断的目的。这种扩散可以是蛋白的自然扩散,例如环状沉淀试验、单向免疫扩散试验、双向免疫扩散试验。(1)单向免疫扩散试验(single immunodiffusion test):就是在凝胶中混入抗体,制成含有抗体的凝胶板,将抗原加入凝胶板预先打好的小孔内,让抗原从小孔向四周的凝胶自然扩散,当一定浓度的抗原和凝胶中的抗体相遇时便能形成免疫复合物,出现以小孔为中心的圆形沉淀圈,沉淀圈的直径与加入的抗原浓度成正比。(2)双向免疫扩散试验(double immunodiffusion test):一种分析鉴定抗原、抗体纯度和抗原特异性的试验。即抗原和抗体分子在凝胶板上扩散,二者相遇并达到最适比例时形成沉淀线。利用蛋白在不同酸碱度下带不同电荷的特性,可以利用人为的电场将抗原、抗体扩散。例如:免疫电泳试验和双向凝胶电泳。

　　支原体早发现于1898年，1956年Robinson等*从细胞培养物中分离出支原体，之后国内外关于支原体污染细胞的报道屡见不鲜。它广泛存在于自然界中，有80余种，污染细胞常见的支原体包括发酵支原体（ M.fementans）、猪鼻支原体（M.hyorhinis）、口腔支原体（M.orale）、精氨酸支原体（M.arginina）、梨支原体（M.pirum）、唾液支原体（M.salivarium）和人型支原体（M.hominis）。　　　　支原体通常附着在细胞的表面，并影响其宿主细胞的生理、遗传等多方面的正常功能，用这些污染后貌似正常的细胞做试验或生产，将会严重影响结果。　　　　1、对细胞生长繁殖和形态的影响　　　　细胞培养物被支原体污染后生长减慢，且产生细胞病变（cytopathic effect, CPE），表现为细胞体积增大，碎片增多，在细胞质中产生一些颗粒；细胞内病毒繁殖受阻，使细胞形成空斑。光镜下形成不正常密度生长的单层，贴壁细胞形成“流沙样”脱落、裂解。某些支原体可在侵入细胞８ｈ使线粒体膨胀，继而被破坏，细胞核萎缩呈空泡化，细胞微管解聚，培养瓶中细胞与细胞间隙出现膜状沉积，细胞无法传代，甚至整个细胞群体溶解。　　　　2、对细胞代谢和功能的影响　　　　有些被污染后的细胞，虽形态上变化不明显，但培养液pH变化较大，更换培养液后几小时就变酸，培养基中的必需氨基酸被消耗掉，如谷氨酸或核苷前体，改变细胞代谢。　　　　支原体吸附在细胞表面，破坏细胞膜的完整性，影响细胞信号传递；消耗细胞的核苷库，引起细胞染色体异常；发酵型支原体能迅速降解简单糖类，代谢产生的酸能改变细胞的功能；利用精氨酸的支原体则发生精氨酸效应，从而影响蛋白质和核酸的合成、导致细胞的分裂和生长受阻；引起细胞酶谱改变；由于支原体对细胞膜的吸附，干扰膜受体的功能，改变信号传递，破坏膜的完整性。在单克隆抗体制备中，骨髓瘤或杂交瘤细胞因支原体的污染而导致融合失败或抗体分泌能力下降以至丧失。　　　　3、引起染色体异常　　　　改变染色体组型，通常可导致细胞染色体断裂、数目减少，出现双着丝点染色体、环状染色体等。　　　　4、对免疫细胞产量的影响　　　　支原体能影响巨噬细胞的活性，抑制干扰素的合成和降低其活性，加大了继发感染其他细菌和病毒的几率，同时，通过植物血凝素干扰淋巴细胞的刺激、分化。

原理由于 浓盐酸容易挥发，不能用它们来直接配制具有准确浓度的 标准溶液，因此，配制HCl标准溶液时，只能先配制成近似浓度的溶液，然后用基准物质标定它们的准确浓度，或者用另一已知准确浓度的标准溶液滴定该溶液，再根据它们的体积比计算该溶液的准确浓度。标定HCl溶液的基准物质常用的是无水Na CO ，其反应式如下：Na CO +2HCl→2NaCl+CO +H O滴定至反应完全时，溶液pH为3.89，通常选用 溴甲酚绿—甲基红混合液作 指示剂。试剂1.浓盐酸（密度1.19）2.溴甲酚绿-甲基红混合液指示剂：量取30mL溴甲酚绿乙醇溶液（2g/L），加入20mL甲基红乙醇溶液（1g/L），混匀。步骤1．0.1mol·L 1HCl溶液的配制用量筒量取浓盐酸9mL，倒入预先盛有适量水的试剂瓶中，加水稀释至1000mL，摇匀，贴上标签。2．盐酸溶液浓度的标定用减量法准确称取约0.15g在270~300℃干燥至恒量的基准 无水碳酸钠，置于250mL锥形瓶，加50mL水使之溶解，再加10滴溴甲酚绿-甲基红混合液指示剂，用配制好的HCl溶液滴定至溶液由绿色转变为紫红色，煮沸2min，冷却至室温，继续滴定至溶液由绿色变为暗紫色。由Na2CO3的重量及实际消耗的HCl溶液的体积，计算HCl溶液的准确浓度。

核蛋白的简介核蛋白(nucleoprotein)因其最初发现于细胞核中，故称为核蛋白，它是细胞中的一种结合蛋白质。在细胞核及细胞质中都含有核蛋白。此外，在病毒、染色体和核蛋白体中也含有核蛋白。核蛋自在生物的生长和繁殖过程中有着独特的功能和作用。核蛋白是由带阳离子性质的碱性蛋白质(如组蛋白和鱼精蛋白)和蛋白质辅基(核酸)所构成。组蛋白含有碱性氨基酸(如赖氨酸和精氨酸)，所以具有碱性。其相对分子质量为11 000～21 000。鱼精蛋白存在于某些鱼精核蛋白中，由于富含精氨酸，因此也具有碱性。核蛋白的提取方法柱式法 Minute TM 胞质胞核分离试剂盒操作方法：A． 悬浮细胞样品（包括植物，细菌，酵母和真菌制备的原生质体）1.500Xg，3 分钟低速离心收集细胞，用预冷的 PBS 清洗一次2. 将细胞转移到 1.5 ml 离心管中，3000 rpm 离心 1-5 分钟，弃去上清。3. 加入适量的胞浆提取缓冲液（请注意样品及裂解液的比例，以达到最佳效果）, 涡旋大力震荡 15 秒, 冰上孵育 5 分钟, 混匀. 接转胞质胞核分离步骤。B. 贴壁细胞1. 贴壁细胞生长至融合度 90-100%，将预冷的 PBS 直接加入细胞培养板，培养皿或培养瓶中清洗细胞两次，吸去上清。2. 将适量的胞浆提取缓冲液均匀的加入整个器皿表面，冰上静置 5 分钟。用吸头吹打几次后转移到预冷的 1.5 ml 离心管中。涡旋大力震荡 15 秒。接转胞质胞核分离步骤。（请注意样品及裂解液的比例，如浓度较低请减少裂解液使用量）C．组织样品1. 称重适量组织样品，放入预冷的 1.5 ml 离心管中。2. 用预冷的 PBS 清洗组织样品一次。3000rpm 离心 1 分钟，弃去上清，尽可能的使沉淀干燥。3. 加入适量胞浆提取缓冲液，用微型管杵或微粉碎机匀浆，去除没有完全匀浆的组织碎片。接转胞质胞核分离步骤。胞质胞核分离步骤1. 4oC，最高速 (14000-16000 rpm) 离心 5 分钟2. 将上清液（上清为胞浆组份）转移到一个新的预冷的 1.5 ml 离心管中。将沉淀（可选优化：用 0.5 ml 预冷 PBS 重悬，10000 rpm，离心 3-5 分钟清洗沉淀可以减少胞浆蛋白污染）中加入适量的胞核提取缓冲液，涡旋大力震荡 15 秒，冰上孵育 1 分钟。然后重复震荡 15 秒，冰上孵育 1 分钟四次。（如核蛋白提取浓度低，可适当延长每次孵育及震荡时间）3. 迅速将核提取物转入到预冷的离心管套管中，14000-16000 rpm，离心 30 秒。弃掉离心管柱。将核蛋白储存于-80℃。一般产量 1.5-2.5 mg/ml。

　　顾名思义，无血清培养基（serum-free medium, SFM）系指不含任何血清成分的合成培养基。近年来，因为细胞治疗（cell therapy）的快速发展与生物工业上的制备抗体、病毒抗原或是重组蛋白表达时，细胞培养基中的血清成分复杂，可能会影响制程或是增加不稳定的因素，因此，无血清培养基成为其目标，现今已有许多成熟的产品可供应研究人员做选择。　　　　血清培养基的缺点　　　　血清是一种成分极为复杂的混合物，为细胞培养增添了许多不可控制的变因。含有血清的培养基缺点如下：　　　　(1) 价格昂贵，血清的费用约占细胞培养费用的50-60%。　　　　(2) 血清可能会带有污染源，FBS最常见的即为支原体或黑胶虫污染。　　　　(3) 血清中复杂的成分会使疫苗、细胞因子、单克隆抗体等的分离或纯化带来很大的困扰。　　　　无血清培养基的优点　　　　避免血清批次间的差异，提高细胞培养的可重复性。　　　　避免血清自身的污染源污染。　　　　避免血清成分影响研究结果或是产品制程。　　　　提高产品表达水平并易于纯化。　　　　无血清培养基的基本配方　　　　基本成分为基础培养基及添加组分两大部分。 用于生物制药和疫苗生产的细胞在体外培养时，多数呈贴壁生长或兼性贴壁生长；而当其在无血清、无蛋白培养基中生长时，由于缺乏血清中的各种粘附贴壁因子如纤粘连蛋白、层粘连蛋白、胶原、玻表粘连蛋白，细胞往往以悬浮形式生长。　　　　添加组分　　　　1. 促贴壁物质：许多细胞必须贴壁才能生长，这种情况下无血清培养基中一定要添加促贴壁和扩展因子，一般为细胞外基质，如纤连蛋白、层粘连蛋白等。它们还是重要的分裂素以及维持正常细胞功能的分化因子，对许多细胞的繁殖和分化，起着重要作用。纤连蛋白主要促进来自中胚层细胞的贴壁与分化，这些细胞包括成纤维细胞、肉瘤细胞、粒细胞、肾上皮细胞、肾上腺皮质细胞、CHO细胞、成肌细胞等。　　　　2. 促生长因子及激素：针对不同细胞添加不同的生长因子。激素也是刺激细胞生长、维持细胞功能的重要物质，有些激素是许多细胞必不可少的，如胰岛素。　　　　3. 酶抑制剂：培养贴壁生长的细胞，需要用胰酶消化传代，在无血清培养基中必不可少须含酶抑制剂，以终止酶的消化作用，达到保护细胞的目的。最常用的是大豆胰酶；抑制剂。　　　　4. 结合蛋白和转运蛋白：常见如转铁蛋白和牛血清白蛋白。牛血清白蛋白的添加比较大，可增加培养基的粘度，保护细胞免受机械损伤。许多旋转式培养的无血清培养基都含有牛血清白蛋白。　　　　5. 微量元素：硒是最常见的。

近日，全国多地医院出现较多肺炎支原体感染患者，支原体是一类缺乏细胞壁的原核细胞型，它既不同于，也不同于病毒，是介于细菌和病毒之间，能在无活细胞的人工培养基上生长繁殖的最小微生物。它广泛分布于自然界，与人类、 动植物的疾病有密切的关系。支原体的种类繁多，造成的危害非常广泛。目前证明对人体有致病作用的支原体有肺炎支原体、 解脲支原体、 人型支原体、 生殖支原体等几种，但临床以肺炎支原体最为常见。肺炎支原体主要以飞沫传播，引起儿童、 青少年呼吸道感染、 咽炎、 气管炎、 肺炎等。支原体检测方法：1、支原体的分离培养它是支原体污染鉴定的金标准，准确，价格便宜。但支原体在分离培养的过程中，要长出明显克隆至少需要4周时间，所需时间较长。2、ELISA方法检测步骤复杂，出现误差的几率较高，对实验者操作技巧有要求。同时试剂盒成本较高，普遍不被选用。3、DNA荧光染色法它采用荧光染色剂Hoechst 33258和支原体DNA富含A-T的区域结合。价格适中。由于DNA检测需要将可疑样品与指示细胞共同培养，因此一般需要几天后才出结果。有假阳性和假阴性，需要与其他方法结合使用。4、PCR技术它根据支原体核糖体16s-23s rRNA的特异保守序列设计引物，对待检样本DNA进行扩增，通过对扩增产物的大小分析作出诊断。操作简单、速度快，只需2-3小时即可出结果，通量高，价格适中。但是，不同厂家生产的PCR检测试剂盒由于引物及内在设计的不同，其准确度和敏感度有天壤之别。用PCR方法检测支原体，其准确性与选择的试剂盒的质量有直接相关性。

　　细胞因子（CK）是由活化免疫细胞和非免疫细胞（如某些基质细胞）合成分泌的能调节细胞生理功能、参与免疫应答和介导炎症反应等多种生物学效应的小分子多肽或糖蛋白，是不同于免疫球蛋白和补体的又一类免疫分子。　　　　根据来源初将活化淋巴细胞产生的细胞因子称为淋巴因子（LK），将单核-吞噬细胞产生的细胞因子称为单核因子（MK）。目前根据功能，可将细胞因子粗略分为以下6类：　　　　1.白细胞介素　　　　白细胞介素（IL）简称白介素，初被定义为由白细胞产生，在白细胞间发挥作用的细胞因子。虽然后来发现它们的产生细胞和作用细胞并非局限于白细胞，但这一名称仍被沿用。目前已报道的白细胞介素有18种，摘要列表如下：　　　　2.干扰素（IFN）　　　　干扰素是-先发现的细胞因子，因其具有干扰病毒感染和复制的能力故称为干扰素。根据来源和理化性质，可将干扰素分为α、β和γ三种类型。IFN-α/β主要由白细胞、成纤维细胞和病毒感染的组织细胞产生，称为Ⅰ型干扰素。IFN-γ主要由活化T细胞和NK细胞产生，称为Ⅱ型干扰素。　　　　丙型干扰素生物学性能比较详见下表：　　　　3.肿瘤坏死因子（TNF）　　　　肿瘤坏死因子是一类能引起肿瘤组织出血坏死的细胞因子。1975年Garwell等将卡介苗注射给荷瘤小鼠，两周后再注射脂多糖，结果在小鼠血清中发现一种能使肿瘤发生出血坏死的物质，称为肿瘤坏死因子。肿瘤坏死因子分为TNF-αTNF-β两种，前者主要由脂多糖/卡介苗活化的单核巨噬细胞产生，亦称恶病质素；后者主要由抗原/有丝分裂原激活的T细胞产生，又称淋巴毒素。TNF-α/β为同源三聚体分子，主要生物学作用如下：　　　　（1）对肿瘤细胞和病毒感染细胞有生长抑制和细胞毒作用；　　　　（2）激活巨噬细胞、NK细胞，增强吞噬杀伤功能，间接发挥抗感染、抗肿瘤作用；　　　　（3）增强T、B细胞对抗原和有丝分裂原的增生反应，促进MHC-Ⅰ类分子表达，增强Tc细胞杀伤活性；　　　　（4）诱导血管内皮细胞表达粘附分子和分泌IL-1、IL-6、IL-8、CSF等细胞因子促进炎症反应发生；　　　　（5）直接作用或刺激巨噬细胞释放IL-1间接作用下丘脑体温调节中枢引起发热；　　　　（6）引起代谢紊乱，重者出现恶病质。　　　　4.集落刺激因子（CSF）　　　　集落刺激因子是指能够刺激多能造血干细胞和不同发育分化，阶段造血干细胞增殖分化在半固体培养基中形成相应细胞集落的细胞因子。主要包括：干细胞生成因子（SCF）多能集落刺激因子（IL-3）、巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）、粒细胞集落刺激因子（G-CSF）、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）和促红细胞生成素（EPO）。上述集落刺激因子除具有刺激不同发育分化阶段造血干细胞增生分化的功能外，其中有些还能促进或增强巨噬细胞和中性粒细胞的吞噬杀伤功能。　　　　5.生长因子　　　　生长因子是具有刺激细胞生长作用的细胞因子。有些生长因子被直接命中为生长因子，如转化生长因子-β（TGF-β）、表皮生长因子、血管内皮生长因子、成纤维细胞生长因子、神经生长因子、血小板衍生的生长因子和细胞生长因子等。多种细胞因子都具有刺激细胞生长的作用，从这个意义上讲，它们也是生长因子，如IL-2是T细胞的生长因子，TNF是成纤维细胞的生长因子。有些生长因子在一定条件下也可表现抑制活性。生长因子在免疫应答、肿瘤发生、损伤修复等方面有重要作用。　　　　6.趋化因子　　　　趋化因子是一组由70～90个氨基酸组成的小分子量的蛋白质（8～10kD）。几乎所有趋化因子分子的多肽链中都有4个保守的丝氨酸残基，并对白细胞具有正向的趋化和激活作用。根据其氨基酸序列中丝氨酸的数量和位置关系，将其分为4大类或4个亚家族。　　　　（1）α趋化因子，其近氨基端的两个丝氨酸残基之间被一个任意的氨基酸残基分隔，故称CXC趋化因子；　　　　（2）β趋化因子，其近氨基端的两个丝氨酸残基是相邻排列的，即CC趋化因子；　　　　（3）γ趋化因子，只有两个丝氨酸残基，其中一个位于多肽链的氨基端，又被称为C趋化因子；　　　　（4）δ趋化因子，其氨基端的两个丝氨酸之间被其他三个氨基酸残基分隔，即CX3C趋化因子。　　

1、1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度：1 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。PH值     浓HCl7.4     约70ml7.6     约60ml8.0     约42ml4. 将溶液定容至1 L。5. 高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。2、10×TE Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA配制量：1 L配制方法：1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。1M Tris－HCl Buffer（PH7.4，7.6，8.0）     100ml500mM EDTA(PH8.0)     20ml2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合。3. 将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。4. 室温保存。3、1.5 M Tris-HCl (pH8.8)组份浓度：1.5 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1. 称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。3. 用浓盐酸调节pH值至8.8。4. 将溶液定容至1 L。5. 高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。4、3 M 醋酸钠(pH5.2)组份浓度：3M 醋酸钠配制量：100ml配制方法：1.称量40.8g NaAc·3H2O置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解2.加入冰醋酸调节pH值至5.23.加去离子水将溶液定容至100ml4高温高压灭菌后，室温保存。5、PBS Buffer组份浓度：137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4配制量：1 L配制方法：1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。NaCl     8gKCl     0.2gNa2HPO4     1.42gKH2PO4     0.27g2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。3. 滴加浓盐酸将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1 L。4. 高温高压灭菌后，室温保存。注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。6、10 M 醋酸铵组份浓度：10 M 醋酸铵配制量：100 ml配制方法：1. 称量77.1 g醋酸铵置于100～200 ml烧杯中，加入约30 ml的去离子水搅拌溶解。2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。3. 使用0.22 mm滤膜过滤除菌。4. 密封瓶口于室温保存。注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。7、苯ben酚/lv仿/yi戊醇 (25 : 24 : 1)配制方法：1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯ben酚/lv仿/yi戊醇（25 : 24 : 1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。2. 配制方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的lv仿/yi戊醇（24 : 1）混合均匀后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。8、10％ (W/V) SDS组份浓度：10％ (W/V)SDS配制量：100ml配制方法：1.称量10g高纯度的SDS置于100-200ml烧杯中，加入约80ml的去离子水，68℃加入溶解2.滴加浓盐酸调节pH值至7.23.将溶液定容至100ml后，室温保存。9、2 N NaOH组份浓度：2 N NaOH配制量：100 ml配制方法：1. 量取80 ml去离子水置于100～200 ml塑料烧杯中（NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂)。2. 称取8 g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。3. 待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100 ml。4. 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。10、2.5 N HCl组份浓度：2.5 N HCl配制量：100 ml配制方法：1. 在78.4 ml的去离子水中加入21.6 ml的浓盐酸（11.6 N)，均匀混合。2. 室温保存。11、5 M NaCl组份浓度：5 M NaCl配制量：1 L配制方法：1. 称取292.2 g NaCl置于1 L烧杯中，加入约800 ml的去离子水后搅拌溶解。2. 加去离子水将溶液定容至1 L后，适量分成小份。3. 高温高压灭菌后，4℃保存。12、20％ (W/V) Glucose组份浓度：20％ (W/V) Glucose配制量：100 ml配制方法：1. 称取20 g Glucose置于100～200 ml烧杯中，加入约80 ml的去离子水后，搅拌溶解。2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。3. 高温高压灭菌后，4℃保存。13、Solution I(质粒提取用)组份浓度：25 mM Tris-HCl（pH8.0), 10 mM EDTA, 50 mM Glucose配制量：1 L配制方法：1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。1M Tris-HCl（PH8.0）     25ml0.5M EDTA（PH8.0）     20ml20％Glucose（1.11M）     45mldH2O     910ml2. 高温高压灭菌后，4℃保存。3. 使用前每50 ml的Solution I中加入2 ml的RNase A（20 mg/ml)。14、Solution II(质粒提取用)组份浓度：200mM NaOH，1％(W/V)SDS配制量：500ml配制方法：1.量取下列溶液，置于500ml烧杯中10％ SDS 50ml2N NaOH 50ml2.加灭菌水定容至500ml，充分混匀3.室温保存，此溶液保存时间最好不要超过一个月注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌15、Solution III(质粒提取用)组份浓度：3 M KOAc, 5 M CH3COOH配制量：500 ml配制方法：1. 称量下列试剂，置于500 ml烧杯中。KOAc                      147gCH3COOH     57.5ml2. 加入300 ml去离子水后搅拌溶解。3. 加去离子水将溶液定容至500 ml。4. 高温高压灭菌后，4℃保存。16、0.5 M EDTA(pH8.0)组份浓度：0.5 M EDTA配制量：1 L配制方法：称取186.1 g Na2EDTA·2H2O，置于1 L烧杯中。2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌。3. 用NaOH调节pH值至8.0（约20 g NaOH)。注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。4. 加去离子水将溶液定容至1 L。5. 适量分成小份后，高温高压灭菌。6. 室温保存。17、1 M DTT组份浓度：1 M DTT配制量：20 ml配制方法：1. 称取3.09 g DTT，加入到50 ml塑料离心管内。2. 加20 ml的0.01 M NaOAc（pH5.2)，溶解后使用0.22 mm滤器过滤除菌。3. 适量分成小份后，-20℃保存。18、10 mM ATP组份浓度：10 mM ATP配制量：20 ml配制方法：1. 称取121 mg Na2ATP·3H2O，加入到50 ml塑料离心管内。2. 加20 ml的25 mM Tris-HCl（pH8.0)，搅拌溶解。3. 适量分成小份后，-20℃保存。

  培养基变浑浊的原因可能有如下几点：    1、细胞存在污染，污染早期可以见到细胞生长；    2、不排除传代时细胞密度过大，或者操作不当导致多数细胞不贴壁，大量细胞漂浮。    3、细胞破碎。    细胞培养中常见的生物污染类型有7种,分别是细菌污染、支原体污染、原虫污染、黑胶虫污染、真菌污染、病毒污染以及非细胞污染.他们在细胞培养中污染的特点如下：    1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状,根据感染细菌的不同,可有不同的外形,培养液一般会浑浊变黄,对细胞生长影响明显.    2、支原体：黑色的,好象多为多形,培养液一般培养液一般会浑浊,原体感染,国内血清很多都没有做支原体阴性检测,而支原体是牛血清中最常见的微生物之一.而且它不能用过滤的办法除去.支原体感染细胞以后,细胞病变不很明显,只是慢慢死去.    3、黑胶虫：可以穿透滤膜,也可以通过空气传播,低倍下为黑色点状,高倍下可看见黑色的小虫游来游去,培养液也是不浑的,一般不会太影响,细胞还是可以用的.常常是细胞生长状态良好,且观测到的运动物无明显增多,且培养液颜色、透明度无明显变化,可在同一批号的血清养的细胞中发现类似现象.对细胞生长状态不会有明显影响,在细胞增殖旺盛之后会自然消失,除更换血清外无须特殊处理.    4、真菌：一般培养液清亮,不变色,镜下有丝状物,有些真菌开始很像死细胞碎片,只是它很多很多的小块很清楚,象珊瑚状,不象细胞碎片分不清,慢慢的会长出很细的黑色丝状物.真菌生长的比较慢,不象细菌那么容易被发现,但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了,也很难救活了.    5、原虫：培养液可轻微浑浊,显微镜下那些细小的点状物数量非常多,轻微活动,细胞虽然可以生长但繁殖速度却明显减慢,而且细胞状态不好,边缘不清楚,细胞不透亮.他们与细胞可共生但会与细胞争夺营养.这种共生是非常普遍的,但他们的数量小,细胞站优势所以不会影响到细胞的正常生长,只有当他们到达一定的数量时就会影响到细胞的生长,最终形成恶性循环.    6.病毒：组织细胞培养过程中,如果没有除去潜在的病毒,就会产生病毒污染.目前,从原代猴肾细胞的培养中已发现不少于20种血清性病毒.尽管病毒污染的细胞不影响原代培养,但生产疫苗是不安全的.因此,潜在病毒是细胞大量生产和疫苗、干扰素等生物制品制作中的难题 。    7、非同种细胞污染 ：即是细胞交叉污染,由于细胞培养操作时各细胞株所需的器材和溶液没有严格分开,往往会使一种细胞被另一种细胞污染.目前,世界上已有几十种细胞都被HeLa细胞所污染,致使许多实验宣告无效.非细胞培养物所造成的化学成分的污染也偶有发生,大多是由于细胞培养所需物品清洗消毒不彻底而带入一些有毒化学物质所致.

产品描述：适合于稀释所有免疫抗体测定（Immunofluorescence, IHC, ELISA, WB）实验中的抗体。该试剂可用于一抗或二抗的稀释和配制，在4℃保存和使用不少于六个月；稀释液中加入了多种抗体结合反应增强剂及稳定剂，增强免疫反应，减少非特异性结合，获得更佳的效果，可反复使用，节约宝贵的抗体。试剂中不含有动物源的蛋白、磷酸盐、叠氮钠或硫柳汞类防腐剂，适合于所有类型抗体稀释，包括HRP，AP标记的抗体。产品优势：没有叠氮钠等剧毒防腐剂，使用医疗级别防腐剂；含免疫增强剂和稳定剂，背景更加干净；保存时间更长，使用后工作液能保存4-6个月（正常一抗稀释液只能一个月），节省一抗用量。一抗专用稀释液+二抗专用稀释液+ELISA专用抗体稀释液+免疫荧光抗体专用稀释液+免疫组化抗体稀释液+HRP标记抗体稀释液+AP标记抗体稀释液+免疫信号增强剂+非叠氮钠无毒防腐剂。操作步骤：根据抗体使用说明书，直接用本品对一抗或二抗进行适当倍数的稀释。保存在NCM Universal Antibody Diluent 稀释液中的抗体可回收于4℃保存，至少可反复多次使用长达6个月以上，直至不能达到理想结果后丢弃。注意事项：1. 孵育抗体时尽量在4C进行，可延长稀释后抗体的使用寿命。2. 本品不含叠氮钠或硫柳汞类防腐剂，但含安全性更高的防腐剂，还需小心操作避免皮肤直接接触。产品规格：100ml/500ml保质期：24个月本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。

　　稀释倍数=原液浓度/（原液浓度×移取体积/定容体积）。如1mol/L稀释一倍就是0.5mol/L，10%稀释一倍就是5%　　稀释是指对现有溶液加入更多溶剂而使其浓度减小的过程。在稀释后溶液的浓度减小，但溶质的总量不变。　　稀释前溶液浓度除以稀释后的溶液浓度所得的商。　　溶液是由一种或几种物质分散到另一种物质里，组成的均一、稳定的混合物，被分散的物质(溶质)以分子或更小的质点分散于另一物质(溶剂)中。物质在常温时有固体、液体和气体三种状态。因此溶液也有三种状态，大气本身就是一种气体溶液，固体溶液混合物常称固溶体，如合金。　　一般溶液只是专指液体溶液。液体溶液包括两种，即能够导电的电解质溶液和不能导电的非电解质溶液。所谓胶体溶液，更确切的说应称为溶胶。其中，溶质相当于分散质，溶剂相当于分散剂。在生活中常见的溶液有蔗糖溶液、碘酒、澄清石灰水、稀盐酸、盐水、空气等。　　1、严格意义上，每次检测样品都要带标准品，拟合标准曲线。原因是每次检测都要受不同条件的影响，比如人为操作，环境的变化等。　　2、尽量把样本同时检测这样就可以就可以节约了。　　3、一般来说，ELISA是不需要稀释的，除非测定值超过标准品的上限，这样推算出来的结果可能误差较大，然后可以根据推算出来的结果，把它稀释到标准品的范围就可以了！　　4、可以使用稀释标准品的稀释液！

　　1、铁架台：用于固定和支持各种仪器，一般常用于过滤、加热等实验操作　　2、烧杯：①溶解固体物质、配制溶液，以及溶液的稀释、浓缩②也可用做较大量的物质间的反应　　3、量筒：量度液体体积　　4、集气瓶：用于收集或贮存少量气体，也可用作部分反应的反应容器　　5、试管：①少量试剂的反应容器②也可用做收集少量气体的容器③或用于装置成小型气体的发生器　　6、试管夹：用于夹持试管　　7、玻璃棒：用于搅拌、过滤或转移液体　　8、酒精灯：用于加热　　9、胶头滴管：胶头滴管用于吸取和滴加少量液体　　10、滴瓶：滴瓶用于盛放液体药品　　11、广口瓶：（内壁是磨毛的）常用于盛放固体试剂，也可用做集气瓶　　12、细口瓶：用于存放液体试剂的玻璃器皿　　13、烧瓶：有圆底烧瓶，平底烧瓶①常用做较大量的液体间的反应②也可用做装置气体发生器　　14、锥形瓶：①加热液体，②也可用于装置气体发生器和洗瓶器③也可用于滴定中的受滴容器。　　15、蒸发皿：通常用于溶液的浓缩或蒸干。　　16、漏斗：用于向试管、酒精灯等添加液体。有普通漏斗、分液漏斗（可以控制流速）和长颈漏斗

　　对检测样品的接收、流转、贮存、处置以及检测样品的识别等各个环节实施有效的质量控制至关重要。管理检测样品可以确保检测样品的代表性、有效性和完整性，从而保证检测结果的准确度。　　一.管理检测样品需做到这8个方面　　1. 样品的采集：　　样品应具有代表性。以样品的结果说明总体的情况，对总体作出结论。采样遵循如下原则：　　1.1 代表性：　　采样时应特别注意克服和消除各种因素的影响，使样品最大限度地接近总体情况，保证样品对总体有充分的代表性 。　　1.2 可获性：　　某些情况下，样品可能不具备代表性，而是由其可获性所决定。　　1.3 公证性：　　采样必须保证公正，由具有资格的人员（接受过采样培训且考核合格的人员）进行。必要时在现场与受检单位陪同人员一起签封，并做好现场采样记录。填写样品采集记录表，双方签字确认。　　2.样品的接收　　2.1 填写委托书　　无论抽检还是送检样品首先应由委托方填写“样品检验委托书，一般委托书一式二份，一份留检验机构存档，一份交委托方作为领取报告凭证”。　　2.2 审核委托书　　接收人员应审核样品检验委托书填写是否规范，是否有空项，手续是否齐备，资料是否完整，标准引用是否正确、适宜。　　2.3 核查样品　　样品应与“样品检验委托书”填写内容一致。样品包装应完好，如不完好应有文字记录。送检样品数量应符合检验、复验、仲裁的要求，如送检样品仅为检验样品应有文字说明。　　2.4 正式受理　　样品接收人员在“样品检验委托书”上签字并承诺出具报告日期。　　3.样品的编号　　为保证检验样品溯源 ，原则上一份样品给予一个唯1性编号（CNAS的要求是避免混淆，并不是要唯1性编号，当然唯1性编号肯定也满足要求）。　　对于同一事件的若干样品可视为一份样品给予一个编号。样品编号可由年份、样品类别代码和样品序号组成（或者其他的适合实验室的编号）。为保证样品编号的唯1性，一般由样品接收部门负责统一编制，或者有LIMS的实验室可以由系统生成。　　4.样品的识别　　样品的识别包括唯1性编号(样品受理编号)和样品不同试验状态(未检、在检 、检毕 、留样)标识 。对检毕样品应有“检毕”、“合格”、“不合格”标识。对于多个包装的同一样品应在样品受理编号后面加横杠和数字加以细分识别，以确保每个包装的唯1性。样品管理员负责将样品的识别标签逐一贴在样品上。　　5.样品的流转　　样品受理后，由承办人根据客户“样品检验委托书中的要求，向检测部门（人员）下达“样品检验交接单”，并通知检测室样品管理员取待检样品。检测室样品管理员在交接时应核查样品状况并在“样品检验交接单”上签收认可。样品传递到检测室后由检测室样品管理员统一登记。未检、在检、检毕样品应分别存放。检测员领取样品作试验时，样品识别号不得改变。样品在流转和检测过程中应加以防护，避免受到非检测性损坏或丢失。　　6.分包样品的管理　　对外提供给分包实验室的样品，在交付前应检查样品完好性，交付分包实验室的样品应有对方接收凭证。分包管理部门应做好分包样品的登记工作。分包方应有保护样品完整性的措施，做好样品的标记和保管。　　7.样品的贮存、保管　　样品贮存、保管应设有专门的样品窒并配备合适的设施；　　样品室由样品管理员专人负责，限制出入；　　样品贮存环境应安全，无腐蚀，清洁干燥且通风良好，有温湿度监控；　　对要求在特殊环境条件下贮存的样品，应严格控制环境条件，环境条件应定期加以记录；　　留样应按照规定数量、品种执行，以备复检、仲裁用；　　腐蚀性、易燃、易爆和有毒的危险样品应隔离存放，做出明显标记；　　样品管理员要对留样样品认真进行验收登记，不同性质的样品分类保存。　　8.样品的处理　　报告发出后留样样品留样期不得少于报告投诉反馈时间，对超标样品和特殊样品如有必要可重点延长留样期，检毕样品处理分以下几种处理方式：　　8.1 客户要求领回的样品，在留样期满后，客户可领回。客户领回样品时，领样员需凭“样品检验委托书”到样品室，由样品管理员办理退样手续。　　8.2 客户需提前(留样期内)领回样品时，应在样品检验委托书上签注“对本检测报告无异议”之后，方可由样品管理员办理退样手续；　　8.3 对留样期已过的客户委托处理样品，应按客户填写的要求处理；　　8.4 必须监护处理的样品，样品管理员必须按规定办法监护处理，防止污染环境及造成危害，监护处理应有记录。　　二.样品管理过程中不可忽视的几个小细节　　1.检测样品流转：　　1.1 样品管理员对接收的所有委托送检样品应做好记录，按照检测要求将送检样品交给相关检测室，办理好交接手续；　　1.2 检测人员对送检样品进行核对交接，按照要求进行制样；　　1.3 检测人员在检测样品试毕后，应将试毕检测样品放在试样已检区；　　2.检测样品的贮存：“试毕”试样及客户有特殊要求的剩余送检检测样品最后交样品管理员“留存”保管。　　3.检测样品的处置：　　3.1 试毕检测样品的试样，留样期不少于国家有关法律、法规所规定的期限。　　3.2 对无特殊要求的剩余送检样品留样期不超过报告申诉期。　　3.3 公司内部常规例行委托检测的检测样品无特殊要求时留样期为1星期。　　4.检测样品的保密与安全：　　4.1 严格按照与客户签订协议或有关规定进行检测样品的检测、储存与处置 ，严格执行保密管理规定，对客户的检测样品、技术资料及有关信息负有保密责任。　　4.2 对有特殊要求的检测样品，应做出相应安排，包括检测样品接收、流转、贮存、处置及技术资料的管理，采取安全防护措施，保证检测样品的完好及机密性。　　三.检验机构样品室要怎样管理才规范　　1.样品管理员的职责：　　1.1 样品管理员必须保证样品室的清洁、整齐、美观，确保在最you有效的时间内查找所需样品。　　1.2 未经允许，无关人员不得随意进出样品室，样品管理员有权拒绝wu无关人员进出样品室。　　1.3 样品管理员有权监督进出样品室人员的活动。　　1.4 未经样品管理员的同意，其他人不得将样品带入或带出样品室。　　1.5 样品管理员必须对样品室发生的一切异常状况负责，发现异常必须及时向领导汇报。　　2.一般规定：　　2.1 每天清理样品室，保证样品室的清洁、整齐、有序。　　2.2 新到样品时，必须检验样品的完好性，及时入库并贴标、拍照、排放（或收藏）、入帐。　　2.3 保证每款样品标签完整，标明货号及颜色（标签贴于鞋底）。将样品用数码像机拍照，存入电脑（图片以样品的货号命名），以厂家、日期为分类标准。　　2.4 出、入库一定要有单据，双方签字后样品方可出、入库，样品去向要落实到人。　　3.出库管理：　　3.1 样品装箱出库前，样品管理员应确保样品的完好性，决不能有不良样品流出至客户手中。杜绝样品上带有原厂家商标、电话、地址、金额等资料，否则视情节轻重扣发岗位津贴。　　3.2 样品管理员接到样品出库通知时，填写出库单，领样人、样品管理员签字后方可出库。　　3.3 任何样品出库或外借，不得损坏，如有毁损，样品管理员有权申请要求赔偿。　　4.入库管理：　　4.1 新到样品时，按到货单认真验货，必须检验样品的完好性。及时入库并贴标、拍照、入帐、排放或收藏。　　4.2 入箱存放的样品，要做好保护，填纸、装袋后装箱，箱上标明数量，品名及厂家后有序排放入库（以厂家名为装箱标准）。　　4.3 定期整理样品室，挑出长期不用、已破损或一款相同数只的样品报批作废。　　4.4 可配成对的鞋子单独装箱，跨年度的成对鞋报批处理。　　4.5 样品架上的样品要按厂家、类型、材质的顺序摆放，用吊牌标清，定期整理样品架，长期不用、重复的样品装箱备查。　　4.6 定期盘点（每月27日），盈亏要究责（按财务实际核算金额按比例赔付）。　　5.罚责：　　5.1 样品室的门、灯、空调等未关，发现一次扣罚责任人5元。　　5.2 未经允许，样品管理员私自外借样品或样品资料，一经发现将视情节严重扣罚当月岗位津贴。　　5.3 因样品管理员工作失误，导致不良样品流入客户手中，全数扣除当月岗位津贴。　　5.4 厂家、工厂的货号、价格、电话hao号码、商标或标签等信息出现在样品上，致使客人获得以上资料，将视为样品管理员的工作失职，相应扣罚当月岗位津贴。　　5.5 样品丢失或样品管理员不明样品的去向，样品管理员需原价赔偿。　　四.小结　　样品管理是实验室管理过程中的重要内容，是保证检测数据真实可靠和溯源的重要依据，需要严格管理。样品管理工作琐碎，注重细节，需要耐心对待，在长期工作中不断总结经验，才能更有效的提高样品管理的效率和水平呦。

限制性核酸内切酶（以下简称限制酶）：限制酶主要存在于微生物（细菌、霉菌等）中。一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割DNA分子。是特异性地切断DNA链中磷酸二酯键的核酸酶（“分子手术刀”）。发现于原核生物体内，现已分离出100多种，几乎所有的原核生物都含有这种酶。是重组DNA技术和基因诊断中重要的一类工具酶。例如，从大肠杆菌中发现的一种限制酶只能识别GAATTC序列，并在G和A之间将这段序列切开。目前已经发现了200多种限制酶，它们的切点各不相同。苏云金芽孢杆菌中的抗虫基因，就能被某种限制酶切割下来。在基因工程中起作用。DNA连接酶：主要是连接DNA片段之间的磷酸二酯键，起连接作用，在基因工程中起作用。基因工程中，大肠杆菌连接酶只连接黏性末端，而T4连接酶既可连接黏性末端，又可连接平末端。DNA聚合酶：主要是连接DNA片段与单个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键，在DNA复制中起作用。DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核酸片段的3′末端的羟基上，形成磷酸二酯键；而DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，不是在单个核苷酸与DNA片段之间形成磷酸二酯键。DNA连接DNA聚合酶是以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键形成一条与模板链互补的DNA链；而DNA连接酶是将DNA双链上的两个缺口同时连接起来。因此DNA连接酶不需要模板。RNA聚合酶（又称RNA复制酶、RNA合成酶）的催化活性：RNA聚合酶以完整的双链DNA为模板，转录时DNA的双链结构部分解开，转录后DNA仍然保持双链的结构。真核生物RNA聚合酶：真核生物的转录机制要复杂得多，有三种细胞核内的RNA聚合酶：RNA聚合酶I转录rRNA，RNA聚合酶II转录mRNA，RNA聚合酶III转录tRNA和其它小分子RNA。在RNA复制和转录中起作用。反转录酶：RNA指导的DNA聚合酶，具有三种酶活性，即RNA指导的DNA聚合酶，RNA酶，DNA指导的DNA聚合酶。在分子生物学技术中，作为重要的工具酶被广泛用于建立基因文库、获得目的基因等工作。在基因工程中起作用。解旋酶：是一类解开氢键的酶，由水解ATP来供给能量它们常常依赖于单链的存在，并能识别复制叉的单链结构。在细菌中类似的解旋酶很多，都具有ATP酶的活性。大部分的移动方向是5'→3'，但也有3'→5'移到的情况，如n'蛋白在φχ174以正链为模板合成复制形的过程中，就是按3'→5'移动。在DNA复制中起做用。DNA限制酶作用于磷酸二酯键DNA连接酶作用于磷酸二酯键DNA聚合酶作用于磷酸二酯键DNA解旋酶作用于氢键

现在行业中所应用的定量菌株种类是非常多的，并且不同种类的菌株所呈现的状态都是不一样的，那么主要有哪些形态呢？分别是典型类、大肠菌样型、粗糙型、黏液型、以及侏儒型等等这几种形态。我们在使用它的时候，还要注意使用的步骤，以及使用时的注意事项，下文中远慕就为大家详细介绍了这三个关于定量菌株的知识点，感兴趣的朋友们一起来看看吧！定量菌株的主要形态：1、典型类此类定量菌株的菌落不规则，菌落的边缘像伞状一样伸展。2、大肠菌样型此类定量菌株的菌落圆形凸起，无色透明，似大肠埃希菌菌落。3、粗糙型此类定量菌株的菌落呈纽扣状，表面粗糙，菌落中间是隆起的，但是边缘扁平。4、黏液型此类定量菌株的菌落光滑，隆起，呈黏液状，嵌入培养基之后不易挑起，非常像肺炎克雷伯菌菌落，但是这种菌株是无色的。5、侏儒型此类定量菌株生长缓慢，培养18h尚不见菌落，24 h后才有细小菌落。定量菌株使用时的步骤：1、取出所需数量及品种的定量菌株，复温定量菌株至室温，等待使用。2、无菌环境下，旋开复溶液的瓶盖，用移液枪等准确吸取1mI定量菌株的复溶液，转移到冷冻管中。3、轻轻振荡盛有定量菌株复溶液的冷冻管，使内部的冻干粉全部溶解，溶解之后呈悬浮状。4、用移液枪准确吸取0.1ml定量菌株的菌恳液，接种到待检的培养基上，按照适宜的温度、时间培养后取出，观察结果。定量菌株使用时的注意事项：1、定量菌种活化前，将盛有它复溶液的冷冻管保存在低温、清洁、干燥的环境中，如果长时间在室温下放置，会导致定量菌种的衰退。2、将盛有复溶液的冷冻管开封、冻干粉复溶等操作应在无菌条件下进行。3、每次只进行一种定量菌株的操作，如要操作多种菌株，需严格消毒所用的设备、仪器等，防止菌种间的交叉污染。4、如发现盛装定量菌株的冷冻管盖松动、复溶液浑浊等情况的话，应该停止使用。