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冰冻切片免疫荧光实验步骤

上海远慕生物科技有限公司

2023/11/03 10:00

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冰冻切片免疫荧光实验步骤

1、冰冻切片固定

冰冻切片37℃烘烤10至20分钟,控干水分,置于4%多聚甲醛固定30min。于PBS缓冲液中晃动洗涤3次,每次5分钟。

2、抗原修复

将切片浸没在升满EDTA抗原修复缓冲液(PH8.0)的修复盆中,置于微波炉内进行抗原修复,修复条件:中火8min至沸——停火8min保温——中低火7min(整个过程需防止修复液过度蒸发,切勿干片。

自然冷却后,将切片置于PBS缓冲液中。然后在摇床上,晃动洗涤3次,每次5min。

3、画圈血清封闭

切片稍甩干后,用组化笔在组织周围画圈,滴加组织自发荧光淬灭剂A液,室温孵育30min,纯水洗5分钟,接着滴加BSA牛血清白蛋白,封闭30min。

4、加一抗

轻轻甩掉封闭液,在切片上滴加按比例配好的一抗后,切片平放于湿盒内4℃孵育过夜。

5、加二抗

切片浸没在PBS缓冲液中,然后在摇床上,晃动洗涤3次,每次5min。切片稍甩干后,滴加荧光二抗,覆盖组织,避光室温孵育50min。

6、DAPI复染细胞核

切片浸没在PBS缓冲液中,晃动洗涤3次,每次5min。甩干后,在圈内滴加即用型DAPI染液,避光室温孵育10min。

7、淬光组织自发荧光

切片置于PBS缓冲液中,晃动洗涤3次,每次5min。在圈内滴加组织自发荧光淬灭剂B液,避光室温孵育5min,水洗10min。

8、封片

切片稍甩干后用抗荧光淬灭封片剂封片,推荐使用远慕生物配套试剂、耗材、仪器,实验效果更佳!

冰冻切片免疫荧光结果判读:


DAPI染出来的细胞核在紫外的激发下为蓝色,阳性表达为相应荧光素标记的红光或绿光等。
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