生物类废物应根据其病源特性、物理特性选择合适的容器和地点，专人分类收集进行消毒、烧毁处理，日产日清。液体废物一般可加漂白-粉进行氯化消毒处理。固体可燃性废物分类收集、处理、一律及时焚烧。固体非可燃性废物分类收集，可加漂白-粉进行氯化消毒处理。满足消毒条件后作最终处置。1. 一次性使用的制品如手套、帽子、工作物、口-罩等使用后放入污物袋内集中烧毁。2. 可重复利用的玻璃器材如玻片、吸管、玻璃瓶等可以用1000-3000mg/L有效氯溶液浸泡2-6h。然后清洗重新使用，或者废弃。3. 盛标本的玻璃、塑料、搪瓷容器可煮沸15min，或者用1000mg/L有效氯漂白-粉澄清液浸泡2-6h，消毒后用洗涤剂及流水刷洗、沥干；用于微生物培养的，用压力蒸汽灭菌后使用。4. 微生物检验接种培养过的琼脂平板应压力灭菌30min，趁热将琼脂倒弃处理。5. 尿、唾液、血液等生物样品，加漂白-粉搅拌后作用2-4h，倒入化粪池或厕所，或者进行焚烧处理。

一、反复冻融法：1.  将细胞在-20度以下冰冻，室温融解，反复几次，由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。2.  至少3次以上冻溶。3.  IFCC推荐法：收集细胞悬液，4℃低温离心（3000rpm，5min），弃上清，加入一定量PBS（200ul），轻轻吹打混匀，-200C 冷冻30 min，370C 解冻，如此反复3次，可形成细胞裂解液。4.  用液氮冻融三四次就可以了，细胞冻住后，取出放37度水浴，溶解后震荡，再冻二、超声波处理法1.  要设定好超声时间和间隙时间，一般超声时间不超过5秒，间隙时间最-好大于超声时间，这些都有利于保护酶的活性。我的实验超声时间5秒、间隙时间10秒、工作次数20次。2.  每个样本超声时间5秒,每个间隔5秒,粉碎5次。3.  100ml菌液离心，用8ml缓冲液悬浮，加8mg溶菌酶，冰浴30min，然后超声处理。750W 40％功率。5秒超声，9秒间隔。超声至少90min。4.  综合冻融和超声的方法：1500g离心，弃除上清。冰上，用小体积PBS重悬细胞。将重悬液集中，1500g离心浓缩，弃除上清。液氮骤冷。用约5倍体积的PBS缓冲液重悬细胞，并搅拌。可选择：4℃下超声破碎细胞。加入终浓度为0.25M的KCl，15mM的DTT。4℃下111500g×60min离心裂解液。取出上清。过柱子。Purification of GST-Fusion Proteins from E. coli-Alternate Protocol三、渗透法：冰冷的20 mmol/L Tris-Cl（pH8.0），2.5 mmol/L EDTA处理，冰浴放置10min。四、裂解液处理法：1.  细胞裂解液：50 mmol/L Tris-Cl pH 6.8，100 mmol/L DTT，2% SDS，0.1%溴酚蓝，10%甘油。SDS是阴离子型表面活性剂、极易促溶、强变性作用。2.  在loading buffer加SDS，100度5分钟，是变性方法。SDS与蛋白等量结合，可以通过条带位移判断蛋白大小，考染不会影响结果。3.  如果是做小量菌液，跑PAGE胶看其表达情况的话，可以直接加蛋白loading buffer煮沸5分钟即可，需注意的是上样前要离心12000rpm至少5分钟，然后上样时，枪头别吸最底下的。4.  20毫升细胞裂解液配方:40 μL 0.5M EDTA (PH8.0)，4 ml 10% SDS，1 ml 1M Tris-cl(PH6.8)，14.96 ml 蒸馏水。5.  我始终未明白楼主如果想收集全蛋白，而不考虑包涵体的话，为何要用超声呢？直接水煮不就可以了吗？6.  将1ml菌离心弃上清，留大概50ul，再加50ul 2×上样缓冲液，煮10min，取20ul上样，就可以了。7.  检测蛋白诱导：从培养的不同时期各取出1ml，12000g×1min离心。将沉淀重悬于100ul 1×SDS上样缓冲液（50mM Tris-Cl（pH6.8），100mM DTT，2％SDS，0.1％溴酚蓝，10％甘油）中，100℃加热3min，然后12000g×1min离心。上样15ul，6％SDS-PAGE电泳。8.  5-10秒离心，弃除上清，用50ul蒸馏水重悬沉淀。加入1ul PMSF，再加入50ul热的2×SDS上样缓冲液（100℃加热）。迅速混匀后100℃加热3-5min。将样品冰上放置（或-20℃放置），然后再溶解，煮沸1min。离心30秒。上样5ul进行SDS-PAGE电泳。2×SDS上样缓冲液：250mM Tris-Cl，6.2％（w/v）DTT，8％SDS，0.002％（w/v）溴酚蓝，40％甘油。Purification of GST-Fusion Proteins from E. coli。9.  裂解液：50mMTris-HCl(pH8.5~9.0)，2mMEDTA，100mMNaCl，0.5%TritonX-100，1mg/ml溶菌酶。10.  我们用NP40（NP40：NONIDET p-40 乙基苯基聚乙二醇，是一种非离子表面活性剂。）加DTT和蛋白酶抑制剂裂解细胞，冰上放30－60min，然后13000rpm离心15min，取上清定量。11.  裂解液配方是：50mmol/L Tirs-HCI (PH 8.0)，150mmol/L NaCI，0. 02% 叠氮钠，100μg/ml PMSF，1μg/ml Aprotinin，1% Triton X-100 ( or NP-40)。12.  对于组织培养中生长的细胞，最-有效的裂解方法是用去污剂（表面活性剂）进行处理，溶解细胞膜并溶解蛋白质。50mmol/L Tirs-HCl(PH 8.0)、150mmol/L NaCl、0. 02% 叠氮钠、100μg/ml PMSF、1μg/ml Aprotinin、1% Triton X-100 ( or NP-40) ，这种裂解液可能是最-常用的裂解缓冲液。13.  细胞裂解液的主要目的：（1）利用去污剂破坏脂质双分子层，破裂细胞；（2）溶解蛋白；（3）蛋白变性使其稳定；（4）抑制蛋白酶活性。推荐RIPA buffer:50 mM Tris-HCl pH 7.4（缓冲体系），150 mM NaCl（等渗体系），1 mM PMSF （强大的蛋白酶抑制剂），1 mM EDTA（变性剂和稳定剂），5 μg/ml Aprotinin（蛋白酶抑制剂），5 μg/ml Leupeptin（蛋白酶抑制剂），1% Triton x-100（破坏细胞），1% Sodium deoxycholate（中度变性剂和蛋白溶解剂），0.1% SDS（强变性剂和蛋白溶解剂）。14.  裂解buffer：50mM HEPES pH7.0，1mM 甘油，1mM DTT（还原剂），7M 尿素，2M硫脲(可以提高膜蛋白的融解），1mM EDTA(金属鏊合剂），1mM PMSF，1mg/ml leupeptin，1mg/ml aprotinin，1mg/ml pepstatin(蛋白酶抑制剂），50mM NaF(ph7.0)（anti hemoaggulating），1mM Na3VO4(ph7.0)（inhibitor of phosphatases），2mM benzamidine（inhibitor of trypsin）。15.  可选择：取0.5ml诱导的细胞并离心2min。弃除上清，用100ul 1×SDS上样缓冲液重悬，冰上放置。6000rpm×10min离心培养物。弃除上清，用10ml预冷的裂解液重悬沉淀。液氮骤冷细胞或-20℃冷冻细胞。在冷水中溶解细胞。15秒、4次超声处理细胞。冰浴降温。4℃，9000g×30min离心。取上清。裂解液：5 mM DTT，15 mM KCl，5 mM MgCl2，50 mM HEPES, pH 7.9，1 mM EDTA，10 mg/ml溶菌酶（临用前加上DTT和溶菌酶）。Purification of GST-Fusion Proteins from E. coli-Basic Protocol16.  收集细胞。在液氮中突然冷冻细胞。用含有蛋白酶抑制剂的PBS缓冲液悬浮沉淀。用100 μg/ml溶菌酶处理并在冰上孵育15 min。加上10% N-laurylsarcosine (终浓度1.5%)，然后超声波破碎。16000 rpm×30 min离心。取上清然后加入Triton X-100至终浓度为2.0%。过Ni-NTA–琼脂糖柱层析。

基本原理将荧光素标记在相应的抗体上，直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高，非特异性荧光染色少，相对使用标记抗体用量偏大。试剂与仪器磷酸盐缓冲盐水(PBS)：0.01mol/L，pH7.4荧光标记的抗体溶液：以 0.01mol/L，pH7.4 的 PBS 进行稀释缓冲甘油：分析纯无荧光的甘油 9 份+ pH9.2 0.2M 碳酸盐缓冲液 1 份配制搪瓷桶三只(内有 0.01mol/L，pH7.4 的 PBS 1500ml)有盖搪瓷盒一只(内铺一层浸湿的纱布垫)荧光显微镜玻片架滤纸37℃温箱等。实验步骤1. 滴加 0.01mol/L，pH7.4 的PBS于待检标本片上，10min后弃去，使标本保持一定湿度。2. 滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液，使其完全覆盖标本，置于有盖搪瓷盒内，保温一30min定时间(参考：30min)。3. 取出玻片，置玻片架上，先用 0.01mol/L，pH7.4 的 PBS 冲洗后，再按顺序过 0.01mol/L，pH7.4 的 PBS 三缸浸泡，每缸 3-5 min，不时振荡。4. 取出玻片，用滤纸吸去多余水分，但不使标本干燥，加一滴缓冲甘油，以盖玻片覆盖。5. 立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度，一般可用“+”表示：(-)无荧光；(±)极弱的可疑荧光；(+)荧光较弱，但清楚可见；(++)荧光明亮；(+++--++++)荧光闪亮。待检标本特异性荧光染色强度达“++”以上，而各种对照显示为(±)或(-)，即可判定为阳性。 注意事项1. 对荧光标记的抗体的稀释，要保证抗体的蛋白有一定的浓度，一般稀释在 1：20-100 之间，要自行摸索最佳梯度，建立最好的稀释比例，抗体浓度过低，会导致产生的荧光过弱，影响结果的观察。2. 染色的温度和时间需要根据各种不同的标本及抗原而变化，染色时间可以从 10 min 到数小时，一般 30 min 已足够。染色温度多采用室温(25℃左右)，高于 37℃可加强染色效果，但对不耐热的抗原(如流行性乙型脑炎病毒)可采用 0-2℃的低温，延长染色时间。低温染色过夜较 37℃30 min 效果好的多。3. 为了保证荧光染色的正确性，首次试验时需设置下述对照，以排除某些非特异性荧光染色的干扰。(1)标本自发荧光对照：标本加 1-2 滴 0.01mol/L，pH7.4 的 PBS。(2)特异性对照(抑制试验)：标本加未标记的特异性抗体，再加荧光标记的特异性抗体。如果标本自发荧光对照和特异性对照呈无荧光或弱荧光， 待检标本呈强荧光，则为特异性阳性染色。4. 一般标本在高压汞灯下照射超过 3min，就有荧光减弱现象，经荧光染色的标本最好在当天观察，随着时间的延长，荧光强度会逐渐下降。

优质的试剂，良好的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条件。ELISA的操作因固相载体的形成不同而有所差异，国内医学检验一般均用板式点。本文将叙述板式ELISA各个操作步骤的注意要点，珠式、管式及磁性球ELSIA，国外试剂均与特殊仪器配合应用，两者均有详细的使用说明，严格遵照规定操作，必能得出准确的结果。　　标本的采取和保存　　可用作ELISA测定的标本十分广泛，体液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、粪便）等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行测定（如血清、尿液），有些则需经预处理（如粪便和某些分泌物）。大部分ELISA检测均以血清为标本。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外，其他成份均同等于血清。制备血浆标本需借助于抗凝剂，而血清标本只要待血清自然凝固、血块收缩后即可取得。除特殊情况外，在医学检验中均以血清作为检测标本。在ELISA中血浆和血清可同等应用。血清标本可按常规方法采集，应注意避免溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为标记的ELISA测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色。　　血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应。如在冰箱中保存过久，其中的可发生聚合，在间接法ELISA中可使本底加深。　　一般说来，在5天内测定的血清标本可放置于4℃，超过一周测定的需低温冰存。冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀宜轻缓，避免气泡，可上下颠倒混和，不要在混匀器上强烈振荡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤，澄清后再检测。反复冻融会使抗体效价跌落，所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测，宜少量分装冰存。保存血清自采集时就应注意无菌操作，也可加入适当防腐剂。　　试剂的准备　　按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。ELISA中用的蒸馏水或去离子水，包括用于洗涤的，应为新鲜的和高质量的。自配的缓冲液应用pH计测量较正。从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后使用。试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。　　加样　　在ELISA中一般有3次加样步聚，即加标本，加酶结合物，加底物。加样时应将所加物加在LEISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。　　加标本一般用微量加样器，按规定的量加入板孔中。每次加标本应更换吸嘴，以免发生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加样。有此测定（如间接法ELISA）需用稀释的血清，可在试管中按规定的稀释度稀释后再加样。也可在板孔中加入稀释液，再在其中加入血清标本，然后在微型震荡器上震荡1分钟以保证混和。加酶结合物应用液和底物应用液时可用定量多道加液器，使加液过程迅速完成。　　保温　　在ELISA中一般有两次抗原抗体反应，即加标本和加酶结合物后。抗原抗体反应的完成需要有一定的温度和时间，这一保温过程称为温育(incubation)，有人称之为孵育，在ELISA中似不恰当。　　ELISA属固相免疫测定，抗原、抗体的结合只在固相表面上发生。以抗体包被的夹心法为例，加入板孔中的标本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗结合的机会，只有最贴近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触。这是一个逐步平衡的过程，因此需经扩散才能达到反应的终点。在其后加入的酶标记抗体与固相抗原的结合也同样如此。这就是为什么ELISA反应总是需要一定时间的温育。　　温育常采用的温度有43℃、37℃、室温和4℃（冰箱温度）等。37℃是实验室中常用的保温温度，也是大多数抗原抗体结合的合适温度。在建立ELISA方法作反应动力学研究时，实验表明，两次抗原抗体反应一般在37℃经1-2小时，产物的生成可达顶峰。为加速反应，可提高反应的温度，有些试验在43℃进行，但不宜采用更高的温度。抗原抗体反应4℃更为彻底，在放射免疫测定中多使反应在冰箱中过夜，以形成最多的沉淀。但因所需时间太长，在ELISA中一般不予采用。　　保温的方式除有的ELISA仪器附有特制的电热块外，一般均采用水浴，可将ELISA板置于水浴箱中，ELISA板底应贴着水面，使温度迅速平衡。为避免蒸发，板上应加盖，也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔，此时可让反应板漂浮在水面上。若用保温箱，ELISA板应放在湿盒内，湿盒要选用传热性良好的材料如金属等，在盒底垫湿的纱布，最后将ELISA板放在湿纱布上。湿盒应先放在保温箱中预温至规定的温度，特别是在气温较低的时候更应如此。无论是水浴还是湿盒温育，反应板均不宜叠放，以保证各板的温度都能迅速平衡。室温温育的反应，操作时的室温应严格限制在规定的范围内，标准室温温度是指20-25℃，但具体操作时可根据说明书的要求控制温育。室温温育时，ELISA板只要平置于操作台上即可。应注意温育的温度和时间应按规定力求准确。为保证这一点，一个人操作时，一次不宜多于两块板同时测定。

试验过程中，生物样本可能是最敏感的，因为它们的活性和特性依赖于合适的试验操作和贮藏条件。实验室菌种的处理和保藏的程序应标准化，使尽可能减少菌种污染和生长特性的改变。按统一操作程序制备的菌株是微生物试验结果一致性的重要保证。（对于菌株的验收，复苏传代，使用，必须有规范化的程序，以保证菌株的标准特性）微生物检验用的试验菌应来自认可的国内或国外菌种收藏机构的标准菌株，或使用与标准菌株所有相关特性等效的商业派生菌株。（一般是ATCC国内也有CMCC，食品相关的CICC的菌株也可以。）标准菌株的复活或培养物的制备应按供应商提供的说明或按已验证的方法进行。从国内或国外菌种收藏机构获得的标准菌株经过复活并在适宜的培养基中生长后，即为标准储备菌株。标准储备菌株应进行纯度和特性确认。标准储备菌株保存时，可将培养物等份悬浮于抗冷冻的培养基中，并分装于小瓶中，建议采用低温冷冻干燥，液氮储存，超低温冷冻（低于-30℃）等方法保存。低于-70℃或低温冷冻干燥方法可以延长菌种保存时间。标准储备菌株可用于制备每月或每周一次转种的工作菌株。冷冻菌种一旦解冻转种制备工作菌株后，不得重新冷冻和再次使用。工作菌株的传代次数应严格控制，不得超过 5 代（从菌种收藏机构获得的标准菌株为第 0 代），以防止过度的传代增加表型变化的风险。1代是指将活的培养物接种到微生物生长的新鲜培养基中培养，任何亚培养的形式均被认为是转种或传代一次。必要时，实验室应对工作菌株的特性和纯度进行确认。工作菌株不可代替标准菌株，标准菌株的商业衍生物仅可用作工作菌株。在这里有些概念需要理顺：标准菌株，这里指的是冻干菌粉。储备菌株：复苏后的1代培养物。工作菌株：由储备菌株转种传代而来。实验室必须建立和保存其所有菌种的进出、收集、贮藏、保存、确认试验以及销毁的记录（有了程序，就应该有配套的记录），应有文件化的程序管理菌种（从标准菌株到工作菌株），该程序包括：标准菌种的申购记录；从标准菌株到工作菌株操作及记录；菌种必须定期转种传代，并做纯度、特性等实验室所需关键诊断指标的确认，并记录；每支菌种都应适当标注，注明其名称、标准号、接种日期、所传代数；菌种生长的培养基和培养条件；菌种保存的位置和条件；其它需要的程序。标准菌株复活1、安瓿bai瓶装微生物菌种开封1-1、用浸过70％酒精的du脱脂棉擦净安瓿瓶。1-2、用火焰将安瓿瓶口加热灭菌。1-3、用镊子将铝封口撕开。2、菌株恢复培养2-1、用无菌吸管，吸取0.3-0.4ml适宜的液体培养基，滴入安瓿管内，轻轻振 荡，使冻干菌体溶解呈悬浮状。2-2、取约0.2ml菌体悬浮液，移植于指定的琼脂斜面培养基上，剩余的菌液，注入指定的液体培养基内（3-4mL），然后在建议的温度下培养。三、注意事项3-1、菌种活化前，请将安瓿瓶保存在5-10℃的环境下。3-2、厌氧菌的培养，如无特别说明，自开封至接种完成，均需以无氧气体充填，以保持厌氧状态。3-3、某些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，需连续两次继代培养才能正常生长。

1、大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界广泛存在。调查研究表明，大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方，人、畜粪便对外界环境的污染是大肠菌群在自然界存在的主要原因。粪便中多以典型大肠杆菌为主，而外界环境中则以大肠菌群其他型别较多。2、大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出来的，主要是以该菌群的检出情况来表示食品中有否粪便污染。大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。粪便是人类肠道排泄物，其中有健康人粪便，也有肠道患者或带菌者的粪便，所以粪便内除一般正常细菌外，同时也会有一些肠道致病菌存在(如沙门氏菌、志贺氏菌等)，因而食品中有粪便污染，则可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染的可能性，潜伏着食物中毒和流行病的威胁，必须看作对人体健康具有潜在的危险性。3、如果食品的菌落总数严重超标，说明其产品的卫生状况达不到基本的卫生要求，将会破坏食品的营养成分，加速食品的腐-败变质，使食品失去食用价值。有专家分析，造成食品中的大肠菌群超标的主要原因是二次污染，大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小，所以导致大肠菌群超标的主要原因是二次污染。如加工器具没有定期清洗消毒，操作人员在上完卫生间后洗手不彻底，个人卫生状况未达标，直接影响最终产品的卫生状况。4、大肠菌群超标一般引起的疾病如下：a、肠道外感染。多为内源性感染，以泌尿系感染为主，如尿道炎、膀胱炎、肾盂肾炎。也可引起腹膜炎、胆囊炎、阑尾炎等。婴儿、年老体弱、慢性消耗性疾病、大面积烧伤患者，大肠杆菌可侵入血流，引起败血症。早产儿，尤其是生后30天内的新生儿，易患大肠杆菌性脑膜炎；b、急性腹泻。某些血清型大肠杆菌能引起人类腹泻。其中肠产毒性大肠杆菌会引起婴幼儿和旅游者腹泻，出现轻度水泻，也可呈严重的霍乱样症状。腹泻常为自限性，一般2～3天即愈，营养不良者可达数周，也可反复发作。肠致病性大肠杆菌是婴儿腹泻的主要病原菌，有高度传染性，严重者可致死。细菌侵入肠道后，主要在十二指肠、空肠和回肠上段大量繁殖。此外，肠出血性大肠杆菌会引起散发性或暴发性出血性结肠炎，可产生志贺氏毒素样细胞毒素。预防方法：1．保持地方及厨房器皿清洁，应该经常使用消毒柜消毒餐具器皿（最-好做到“餐具要消毒”），并把垃圾妥为弃置。2．保持双手清洁，经常修剪指甲。3、进食或处理食物前，应用肥皂及清水洗净双手，如厕或更换尿片后亦应洗手。4．食水应采用自来水，并最-好煮沸后才饮用。5．应从可靠的地方购买新鲜食物，不要光顾无牌小贩。不要吃不干净的东西6．避免进食高危食物，例如未经低温消毒法处理的牛奶，以及未熟透的汉堡扒、碎牛肉和其它肉类食品。7．烹调食物时，应穿清洁、可洗涤的围裙，并戴上帽子。8．食物应彻底清洗。9．易腐坏食物应用盖盖好，存放于雪柜中。10．生的食物及熟食，尤其是牛肉及牛的内脏，应分开处理和存放(雪柜上层存放熟食，下层存放生的食物)，避免交叉污染。11．冰柜应定期清洁和融雪，温度应保持于摄氏4度或以下。12．若食物的所有部分均加热至摄氏75度，便可消灭大肠杆菌O157 : H7；因此，碎牛肉及汉堡扒应彻底煮至摄氏75度达2至3分钟，直至煮熟的肉完全转为褐色，而肉汁亦变得清澈。13．不要徒手处理熟食；如有需要，应戴上手套。14．食物煮熟后应尽快食用。15．如有需要保留吃剩的熟食，应该加以冷藏，并尽快食用。食用前应彻底翻热。变质的食物应该弃掉。

无菌室实验操作过程中要注意什么？有哪些必须遵守的条件？一、无菌室的级别：根据空气洁净度的不同，无菌室可分为哪几个级别一般情况下，无菌室的等级有百级，千级，万级，十万级，百万级等等。净化等级一般分为100级、1000级、10000级、100000级，现在2010年版的GMP 净化车间已经不用这个叫法了，分为ABCD级别，分别相对应于98版的几个级别，通过检测区域内的尘埃粒子数、浮游菌数、沉降均数评价净化级别，各个级别 有不同的要求，净化等级分静态、动态两种。无菌室设计建设要点：无菌室内的地面、墙壁必须平整，不易藏污纳垢，便于清洗。工作台的台面应该处于水平状态。无菌室和缓冲间都装有紫外线灯，无菌室的紫外线灯距离工作台面 1 米。工作人员进入无菌室应穿灭过菌的服装，戴帽子。当前无菌室多存在于微生物工厂，一般实验室则使用超净台。超净台其主要功能是利用空气层流装置排除工作台面上部包括微生物在内的各种微小尘埃。通过电动装置使空气通过高效过滤器具后进入工作台面，使台面始终保持在流动无菌空气控制之下。而且在接近外部的一方有一道高速流动的气帘防止外部带菌空气进入。在条件较困难的地方，也可以用木制无菌箱代替超净台。无菌箱结构简单，便于移动，箱正面开有两个洞，不操作时用推拉式小门挡住，操作时可以将双臂伸进去。正面上部装有玻璃，便于在内部操作，箱内部装有紫外线灯，从侧面小门可以放进去器具和菌种等。二、无菌室操作规范1.无菌室应保持清洁，严禁堆放杂物，以防污染。2.严防一切灭菌器材和培养基污染，已污染者应停止使用。3.无菌室应备有工作浓度的消毒液，如5%的甲酚溶液，70%的酒精，0.1%的新洁尔灭溶液，等等。4.无菌室应定期用适宜的消毒液灭菌清洁，以保证无菌室的洁净度符合要求。5.需要带入无菌室使用的仪器，器械，平皿等一切物品，均应包扎严密，并应经过适宜的方法灭菌。6.无菌室使用前必须打开无菌室的紫外灯辐照灭菌30分钟以上，并且同时打开超净台进行吹风。操作完毕，应及时清理无菌室，再用紫外灯辐照灭菌20分钟。7.无菌室应每月检查菌落数。在超净工作台开启的状态下，取内径90mm的无菌培养皿若干，无菌操作分别注入融化并冷却至约45℃的营养琼脂培养基约15mL，放至凝固后，倒置于30-35℃培养箱培养48小时，证明无菌后，取平板3-5个，分别放置工作位置的左中右等处，开盖暴露30分钟后，倒置于30-35℃培养箱培养48小时，取出检查。100级洁净区平板杂菌数平均不得超过1个菌落，10000级洁净室平均不得超过3个菌落。如超过限度，应对无菌室进行彻底消毒，直至重复检查合乎要求为止。

一. 不常见革兰阴性菌1. 布氏杆菌属布氏杆菌属是一类革兰阴性细小杆菌，牛、羊、猪等动物最易感染。人类接触带菌动物或食用病畜及其乳制品，均可被感染。布氏杆菌病广泛分布世界各地，我国部分地区曾有流行。布氏杆菌属分为羊、牛、猪、鼠、绵羊及犬布氏杆菌6个种，20个生物型。中国流行的主要是羊、牛、猪三种布氏杆菌，其中以羊布氏杆菌病最-为多见。布氏杆菌属细菌为非抗酸性，无芽胞，无荚膜，无鞭毛，呈球杆状(见图1)。血琼脂(BAP)上为透明或半透明、光滑且有光泽菌落。此细菌不在麦康凯琼脂上生长。布氏杆菌属细菌尿素阳性，触酶、氧化酶阳性，而吲哚阴性。由于该菌属细菌具有强的传染性，因此一旦怀疑应送往LRN B级参考实验室进行确认。2. 空肠弯曲菌空肠弯曲菌是一种人畜共患病病原菌，可以引起人和动物发生多种疾病，并且是一种食物源性病原菌，认为是引起全世界人类细菌性腹泻的主要原因。其致病因素包括粘附、侵袭、产生毒素和分子模拟机制等四个方面，通过分子模拟机制可以引起最严重的并发症一格林一巴利综合征。空肠弯曲菌可以通过产生细胞紧张性肠毒素、细胞毒素和细胞致死性膨胀毒素而致病。空肠弯曲菌对红霉素、新霉素、庆大霉素、四环素、氯霉素、卡那霉素等抗生素敏感，但近年发现了不少耐药菌株及多重耐药性菌株。空肠弯曲菌菌体轻度弯曲似逗点状。菌体一端或两端有鞭毛，运动活泼，在暗视野镜下观察似飞蝇。有荚膜，不形成芽胞。微需氧菌，在含2.5～5%氧和10% CO2的环境中生长最-好，在正常大气或无氧环境中均不能生长，最适温度为37～42℃。本菌在普通培养基上难以生长，在凝固血清和血琼脂培养基上培养36小时可见无色半透明毛玻璃样小菌落，单个菌落呈中心凸起，周边不规则，无溶血现象。空肠弯曲生化反应不活泼，不发酵糖类，不分解尿素。可还原硝酸盐，氧化酶和触酶为阳性。能产生微量或不产生硫化氢，甲基红和v-p试验阴性，枸椽酸盐培养基中不生长,在弯曲菌中马尿酸呈阳性反应具有重要鉴定价值。3.“HACEK”群细菌HACEK是指一组革兰阴性杆菌：嗜血杆菌属(H)、放线杆菌属(A)、人心杆菌属(C)、艾肯菌属(E)、金氏杆菌属(K)。这组微生物的共同特征是易导致心内膜感染，约占全部感染性心内膜炎的5-10%，它们是导致正常人群(非静脉药物滥用者)心内膜炎的常见原因之一。所有这些微生物都是口咽部正常菌群的一部分，生长缓慢、喜好富二氧化碳环境。除心脏瓣膜感染，HACEK菌还导致其他感染：菌血症、各类脓肿、腹膜炎、中耳炎、结膜炎、肺炎、化脓性关节炎、骨髓炎、尿路感染、伤口感染、脑脓肿、牙周感染。嗜血杆菌属因在生长过程中需含有生长因子X(氯化高铁血红素)和(或)V(辅酶Ⅰ)的血液琼脂而得名。本属细菌为革兰阴性小杆菌，无动力，具有明显的多型性，不形成芽胞，需氧或兼性厌氧。流感嗜血杆菌是嗜血杆菌属最重要的病原菌，镜下呈球杆状、长杆状、少数为丝状。粘液型菌株有荚膜，毒力较强。菌落一般为光滑型，若与金黄色葡萄球菌在BAP上共同孵育，则在葡萄球菌菌落周围生长的流感嗜血杆菌菌落较大，这叫做“卫星现象”。原因是金黄色葡萄球菌能合成较多的V因子，促进流感嗜血杆菌的生长。放线杆菌属为革兰阴性杆菌，有时呈球形、椭圆形(见图3)。兼性厌氧菌，无动力，无荚膜，在含血清或血液的培养基上生长良好，37℃培养2～3天后形成直径约1mm的菌落。在肉汤培养液中生长呈颗粒状。对人或动物致病的有伴放线放线杆菌、林氏放线杆菌和马驹放线杆菌。伴放线放线杆菌因常见于人类的某些放线菌病的病灶中而得名。但也可单独致病，如一些亚急性细菌性心内膜炎是由本菌引起的。本属细菌能还原硝酸盐，不产生吲哚，尿素阳性。人心杆菌是心杆菌属内唯1的种，是人的鼻腔和咽喉部的正常菌群，可引起心内膜炎、尿路感染、脑脓肿和牙周炎等疾病。大部分菌株可从血液中分离而来，有的菌株也可从脑脊液中分离而来。人心杆菌为无鞭毛、无荚膜、无芽孢，并具有多形性的革兰阴性杆菌(见图4)。革兰染色不易被脱色，单个存在或成对排列，有时形成短链或呈葡萄状排列。该菌为兼性厌氧菌，某些菌株在初代分离时需要CO2，在生长过程中要有一定湿度，在干燥环境中不生长；在35～37 ℃均可生长，但在22 ℃或42 ℃均不生长。该菌在BAP上不溶血，经24h 培养后菌落很小，48h 后可达1mm，菌落为圆形、凸起、光滑、有光泽而边缘整齐，某些菌株的菌落可长入培养基中，使培养基表面琼脂凹陷。麦康凯琼脂上不生长。人心杆菌氧化酶阳性，触酶阴性，吲哚阳性，不还原硝酸盐。啮蚀艾肯菌是革兰阴性多形性球杆菌(见图5)，有一种漂白剂的气味，兼性厌氧，是口腔和许多其他粘膜表面的正常菌群。啮蚀艾肯菌是人咬伤后发生的蜂窝织炎的病原体，它也是已发现静脉药物滥用者软组织感染和心内膜炎主要病原体。它也能导致各种各样的肺部感染(如脓胸、肺炎、败血症栓子)，类似严格偏性厌气菌。大多数啮蚀艾肯菌性心内膜炎患者有潜在的生物瓣膜病变。与其他HACEK菌不同，大多数啮蚀艾肯菌性心内膜炎与静脉药物滥用有关。啮蚀艾肯菌在培养基上凹陷生长，吲哚阴性，鸟氨酸阳性。金氏杆菌属是革兰阴性球杆菌，有3个种：金氏金氏杆菌、产吲哚金氏杆菌、去硝化金氏杆菌，只有金氏金氏杆菌引起心内膜炎。与其他HACEK菌不同，金氏杆菌感染进展相当迅速。金氏金氏杆菌在BAP呈大的、光滑、不透明、白色或米色、β-溶血菌落，与肠杆菌科细菌相似，但在麦康凯琼脂上不生长。金氏金氏杆菌触酶阴性，氧化酶阳性，通常分离自无菌组织和体液。4. 土拉热弗朗西斯氏菌土拉热弗朗西斯氏菌简称土拉弗氏菌，是引起土拉弗氏菌病(野兔热)的病原菌。人类感染此病多因接触患病动物而致，或摄食污染食物和吸入污染空气所致。土拉杆菌是革兰阴性多形性细菌，镜下呈球状、杆状、豆状和丝状等，无芽胞、无动力、有荚膜。该菌营养要求较高，在普通琼脂培养基和肉汤中均不生长，只在加入胱氨酸、半胱氨酸、血液或卵黄的培养基中生长，形成圆形、光滑、灰色、凸起、有粘性的菌落，在鸡胚绒尿膜上也能生长，在卵黄囊中生长尤为茂盛，最适生长温度35℃ ～37℃ 。若从动物或人体初次分离，一般需要3—5天。常用培养基主要有半胱氨酸葡萄糖血液琼脂平板(Francis培养基)、卵黄琼脂平板和半胱氨酸巧克力琼脂。土拉热弗朗西斯氏菌氧化酶阴性，触酶阴性或弱阳性，β-内酰胺酶阳性。由于该菌具有强传染性，必须在生物安全柜中处理，一旦怀疑需送往LRN参考实验室进行确认。5. 卡他莫拉菌卡他莫拉菌为革兰阴性双球菌。过去一直认为卡他莫拉菌是对人体无致病性的上呼吸道正常寄居菌，但是，近20多年的研究发现，该菌不仅可以引起儿童和老年人的上呼吸道感染，而且还是引起成人下呼吸道感染的重要病原菌，是儿童上颌窦炎、中耳炎、肺炎以及成人的慢性下呼吸道感染的第3位最-常见致病菌，仅次于流感嗜血杆菌和肺炎链球菌。卡他莫拉菌在BAP上不溶血，整个菌落可推动，氧化酶、触酶阳性，丁酸盐、吲哚酚醋酸盐阳性。6. 奈瑟菌属奈瑟菌属细菌为革兰阴性球菌，单个或成双排列，无芽孢、无鞭毛、有菌毛，触酶、氧化酶阳性，包括脑膜炎奈瑟菌(见图7)、淋病奈瑟菌等9种，其中有临床意义的致病菌为脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌。BAP上呈透亮不溶血菌落，氧化酶、γ-谷氨酰氨肽酶阳性为脑膜炎奈瑟菌。BAP上呈浅灰色不溶血菌落，氧化酶、β-半乳糖苷酶阳性为乳糖奈瑟菌。淋病奈瑟菌在巧克力琼脂上呈小的、有光泽的菌落，通常在BAP、MH和胰大豆琼脂上生长，氧化酶阳性，触酶强阳性(30%过氧化氢)，而γ-谷氨酰氨肽酶、β-半乳糖苷酶阴性。二. 不常见革兰阳性菌1．产单核李斯特菌李斯特菌是一种典型的胞内寄生的革兰阳性短杆菌，共分为2个群，7个种。第一群包括产单核细胞李斯特菌、伊氏李斯特菌、无害李斯特菌(又名英洛克李斯特菌) 、韦氏李斯特菌及西尔李斯特菌；第二群为较少见的格氏李斯特菌和莫氏李斯特菌。其中产单核细胞李斯特菌和伊氏李斯特菌具有致病性，且产单核细胞李斯特菌是惟一能引起人类疾病的，是一种人兽共患病的病原菌，能引起人、畜的李斯特菌病，感染后主要表现为败血症、脑膜炎、流-产和单核细胞增多。这种病菌在自然界广泛存在，食品中存在的产单核细胞李斯特菌对人类的安全具有危险，世界卫生组织(WHO)指出，水产品、奶及奶制品、肉制品均有不同程度的污染，并曾将其列为20世纪90年代食品中四大致病菌之一。产单核李斯特菌是一种革兰阳性短小杆菌，通常成双排列，偶尔可见双球状(见图8)。有鞭毛，但仅在18~20℃有动力，在37℃动力缓慢。无芽胞，一般不形成荚膜，但在含有血清的葡萄糖蛋白胨水中能形成粘多糖荚膜。兼性厌氧，对营养要求不高，普通培养基上可生长，在血平板上会形成β-溶血。最适的生长温度是30~37℃，并可在4℃条件下进行冷增菌。本菌耐碱不耐酸，对热较为敏感，加热50℃10min即可死亡同时该菌对多种抗生素敏感，以氨苄青霉素为首-选，尚有青霉素、链霉素、四环素、氯霉素和红霉素等敏感。但该菌对磺胺、杆菌肽和多粘菌素耐药。产单核李斯特菌触酶阳性，马尿酸盐阳性。2．链球菌属链球菌属细菌广泛分布于自然界、人和动物肠道、健康人鼻咽部等，致病链球菌可引起各种化脓性炎症、猩红热、风湿热等疾病。本属细菌为革兰阳性球菌，链状排列，无鞭毛，无芽孢，可形成荚膜，在液体培养基中易形成长链，致病性强的菌株多为长链，在脓汁标本中多为短链。本属细菌为需氧或兼性厌氧菌，部分为厌氧菌。营养要求较高，需在加有血液、血清等成分的培养基生长良好。根据链球菌在血液琼脂平板上菌落周围溶血情况，有草绿色溶血环的称为α型溶血，如草绿色链球菌；呈透明溶血环的称为β型溶血，称β溶血性链球菌或化脓性链球菌；也有不溶血的，称为γ型溶血，如肠球菌。根据族特异性抗原将链球菌分A－T 18个族。链球菌属细菌触酶阴性。化脓链球菌(A群) PYR阳性。无乳链球菌(B群) 马尿酸盐阳性，CAMP阳性。草绿色链球菌PYR阴性，LAP阳性，胆汁溶菌试验阴性。肺炎链球菌镜下为革兰阳性球菌，矛尖状，成双排列，在人和动物体内形成荚膜，菌落细小、周围有草绿色溶血环，48小时后，由于菌落自溶，呈现“脐窝状”，Optochin敏感试验阳性，胆汁溶菌试验阳性，菊糖分解试验阳性。

水的基本性质1个水分子(H2O)是由1个氧原子和2个氢原子弯曲键结而成。由于正、负电荷的中心不一致，因此属于极性分子。当2个水分子同时存在时，二者会由静电交互作用与氢键结合，互相吸引并保持一定的距离。而1个水分子可以同时与4个水分子结合，形成晶体般的整齐结构。水分子聚合体中，由于氢键键结的网状结构会部分断裂，而形成逐次移动变化的状态，因此水在整体上呈现液态，而此结构变化每秒可达1012次。一般而言，水若含有适量的钠、钾离子及硅酸盐等矿物质，就会觉得好喝，若含有大量残留的盐类，如镁、钙等非酸碱中性盐类，就会觉得难喝。也就是说，所谓的水除了H2O外，还含有许多其它的成分，而这些成分的种类和含量决定了水的味道。 水极易溶解盐类，即使阴阳离子经由静电的交互作用，很强的结合在一起，在水中也很容易电解。这是因为，水分子可以和离子结合产生“水合离子”。离子的半径很小，电荷大的离子会与水分子强力的交互作用，由水分子在离子的周围紧密排列。这时候，阳离子会与带负极矩的氧原子相互作用，而阴离子则形成相反的结构。 水中存在的杂质可溶性无机物：无机盐类、溶解气体、重金属、硬度成分(钙、镁等)。可溶性有机物：木质素、单宁、腐植酸、内毒素、RNA分解酶、农药。、三氯-甲烷、环境荷尔蒙物质、界面活性剂、有机溶剂。微粒子：铁锈、胶体、悬浮物、固体颗粒。微生物：细菌类、藻类。实验用水所要求的纯度所谓实验，是指对现象所推测的假设加以验证的动作。假设能否被证明为真理，与假设能否具有再现性的结果至关重要。实验的再现性除了要有良好的技巧，还受到所用化学试剂的纯度和分析仪器的精密度的影响。实验中用来配置溶液的化学试剂，及所使用的水的纯度也非常重要。假设水中污染物对实验检测会造成影响，就必须去除这些物质。此外，为了取得良好的再现性结果，使用能保持稳定水质的纯水是必要的。随着实验用的分析系统灵敏度的提高，对水的纯度有了更高的要求。 1ppm=1mg/L1ppb=1μg/L1ppt=1ng/L=1μg/ml在水中，将距离1cm的两片表面积为1cm2大小的电极加以通电，来监测两极间的导电率，通过所加电压和测得的电流能够获知两极间的电阻值，这个数值在水质分析中通常被称为电阻率或比电阻，其单位用MΩ.cm(megaohm-centimeter)来表示。电阻率的倒数称为导电率或电导率，用μs/cm(microSiemenspercentimeter)来表示。这两个参数是表示水的纯度的最-常用参数。将自来水中的离子去除，会使得电阻率值升高(导电率降低)，单并非无限制的增加，这是因为部分水分子会电离为氢离子和氢氧根离子，其电阻率值极限值18.248MΩ.cm(25℃)。此外，电阻率值会随着水的电离常数而改变，因而会受到水温的影响。例如，25℃的超纯水，其电阻值为18.2MΩ.cm,但在0℃则为84.2MΩ.cm,100℃则为1.3MΩ.cm。在25℃附近，当温度上升1℃，其电阻值将下降0.84MΩ.cm。因此，多使用补偿至25℃的电阻率值来做衡量标准。此外像总有机碳含量(TOC)，热源内毒素含量，细菌含量，颗粒含量，微生物含量，总溶解固体含量(TDS)等也常常被用作补充说明水质的重要参数。因此，水的纯度标准通常由以上这些参数的一项或几项来综合说明、分级。纯水的分级标准实验室纯水可分为4个常规等级：纯水、去离子水、实验室Ⅱ级纯水和超纯水。纯水：纯化水平最-低，通常电导率在1-50μs/cm之间。它可经由单一弱碱性阴离子交换树脂、反渗透或单次蒸馏制成。典型的应用包括玻璃器皿的清洗、高压灭菌器、恒温恒湿实验箱和清洗机用水。去离子水：电导率通常在1.0-0.1μs/cm之间。通过采用含强阴离子交换树脂的混床离子交换制成，但它有相对较高的有机物和细菌污染水平，能满足多种需求，如清洗、制备分析标准样、制备试剂和稀释样品等。实验室Ⅱ级纯水：电导率超纯水：这种级别的纯水在电阻率、有机物含量、颗粒和细菌含量方面接近理论上的纯度极限，通过离子交换、RO膜或蒸馏手段预纯化，再经过核子级离子交换精纯化得到超纯水。通常超纯水的电阻率可达18.2MΩ-cm，TOC目前世界上比较通用的纯水标准主要有以下几个：国际标准化组织(ISO)，美国临床病理学会(CAP)试药级用水标准，美国测试和材料实验社团组织(ASTM)，临床试验标准国际委员会(NCCLS)，美国药学会(USP)等。同时，我国也有相应的纯水标准：中国国家电子级超纯水规格GB/T 11446.4-2013和中国国家实验室用水规格GB/T 6682-2008等。因此市面上绝大多数的纯水系统，无论是进口的还是国产的，都是依据这些标准来设计流程的。

2021年元旦放假安排通知如下：2021年1月1日（星期五）至1月3日（星期日）放假，共3天。节假日期间，要切实提高防范意识，加强自我防护。出行期间要佩戴口罩、勤洗手，非必要不到疫-情中高风险地区旅游、探亲，尽量减少外出逗留时间，少去人员密集场所，并准备好健康码，积极配合查验和体温检测等工作。远慕生物特此通知

一、菌种的退化现象随着菌种保藏时间的延长或菌种的多次转接传代，菌种本身所具有的优良的遗传性状可能得到延续，也可能发生变异。变异有正变(自发突变)和负变两种，其中负变即菌株生产性状的劣化或有些遗传标记的丢失均称为菌种的退化。但是在生产实践中，必须将由于培养条件的改变导致菌种形态和生-理上的变异与菌种退化区别开来。因为优良菌株的生产性能是和发酵工艺条件紧密相关的。如果培养条件发生变化，如培养基中缺乏某些元素，会导致产孢子数量减少，也会引起孢子颜色的改变；温度、pH值的变化也会使发酵产量发生波动等。所有这些，只要条件恢复正常，菌种原有性能就能恢复正常，因此这些原因引起的菌种变化不能称为菌种退化。常见的菌种退化现象中，最易觉察到的是菌落形态、细胞形态和生-理等多方面的改变，如菌落颜色的改变，畸形细胞的出现等；菌株生长变得缓慢，产孢子越来越少直至产孢子能力丧失，例如放线菌、霉菌在斜面上多次传代后产生“光秃”现象等，从而造成生产上用孢子接种的困难；还有菌种的代谢活动，代谢产物的生产能力或其对寄主的寄生能力明显下降，例如黑曲霉糖化能力的下降，抗菌素发酵单位的减少，枯草杆菌产淀粉酶能力的衰退等。所有这些都对发酵生产均不利。因此，为了使菌种的优良性状持久延续下去，必须做好菌种的复壮工作。即在各菌种的优良性状没有退化之前，定期进行纯种分离和性能测定。二、菌种退化的原因菌种退化的主要原因是有关基因的负突变。当控制产量的基因发生负突变，就会引起产量下降；当控制孢子生成的基因发生负突变，则使菌种产孢子性能下降。一般而言，菌种的退化是一个从量变到质变的逐步演变过程。开始时，在群体中只有个别细胞发生负突变，这时如不及时发现并采用有效措施而一味移种传代，就会造成群体中负突变个体的比例逐渐增高，最后占优势，从而使整个群体表现出严重的退化现象。因此，突变在数量上的表现依赖于传代，即菌株处于一定条件下，群体多次繁殖，可使退化细胞在数量上逐渐占优势，于是退化性状的表现就更加明显，逐渐成为一株退化了的菌体。同时，对某一菌株的特定基因来讲，突变频率比较低，因此群体中个体发生生产性能的突变不是很容易的，但就一个经常处于旺盛生长状态的细胞而言，发生突变的机率比处于休眠状态的细胞大得多，因此，细胞的代谢水平与基因突变关系密切，应设法控制细胞保藏的环境，使细胞处于休眠状态，从而减少菌种的退化。

一、菌株的采集实验室用菌种一是到国家法定机构采购，二是购买商业派生菌种，三是科研中菌种交流。不管是哪种来源，均统一采集。采集中严格按照规范执行。要求包装可靠，采集迅速，不泄漏不污染。保证菌种合格和环境安全。采集中要有菌种传代标识。选择有资质的标准菌株的合格供应商，每批标准菌株必须附带有供应商的合格证或检测报告或说明书，来证明所采购的标准菌株是合格的。二、标准菌株和验收 实验室收到标准菌株，首先应进行符合性感官检查，记录菌株号和标准菌株来源途径信息，确保溯源性清楚。同时还应记录标准菌株名称和数量、生产日期、接收日期和有无破损等情况。三、冻干标准菌株的复活1.开启产品包装：先用70%酒精棉擦拭外包装，再打开使用。2.复活：选择合适的培养基和培养条件进行复活。菌种的首次活化zui好是在非选择性琼脂培养基上，除非特殊情况或特别推荐，一般不用液体培养基。冻干菌株的传代次数不得超过5代，从标准菌株保藏中心购买的冻干标准菌株为第F0代。四、工作菌株确认方法及依据用无菌接种环取上述培养物，在相应的培养基平板（营养琼脂、大豆胰蛋白胨琼脂）上或相应的细菌鉴别平板（如伊红美蓝、麦康凯、BP等上划线分离单个菌落，置适宜条件下培养（若该类微生物为厌氧菌，则培养条件应为厌氧条件）。以同样方法取真菌和酵母菌至SDA（萨布罗培养基）平板上或玫瑰红钠培养基平板上，23～28℃下培养7d；培养后观察是否具有典型的菌落状态，然后挑取单一纯菌落，进行革兰染色、镜检，观察其染色特征及菌体形态以确定菌种。五、 污染处理假如在该平板上发现有其他菌落生长，则说明操作有污染或菌种不纯。要将该污染培养物做灭菌处理，寻找原因，重新分离挑选纯菌落。六、菌种保存所有菌种均由实验室专人(双人双锁)保存于专用冰箱或其它保存方式。要建立菌种登记台帐，详细记录菌种采集、保管、制备、使用、处置情况；每一种菌种一定要有检测鉴定报告（具体的的鉴定方法见菌种质量报告鉴定证书上的方法）；具体菌种保存方法一般为：将复苏后肉汤与灭菌甘油按15%甘油比例（肉汤8.5mL+甘油1.5mL）混合，-30 ℃冻存，（可用2mL冻存管冻存多管），作为保藏储备菌株F1代，也可使用商品化的菌种保存管。七、菌种的传代1.标准菌株的复苏① 菌种操作应在无菌条件下进行，防止杂菌污染。② 每次使用和复苏时只需将小珠在平板上滚动或置肉汤中培养。2.标准储备菌株每转接一次须进行确认。（确认方法一般为他们各自独有的形态，在鉴别培养基上的形态）3.工作菌株转接的方法①配制营养琼脂培养基（溶血性弧菌加3%氯化钠 ），121℃高压灭菌15分钟后分装在试管内，冷却后备用。②在无菌条件下，用接种环挑取菌苔至新鲜试管上作“米”字形划线接种，放置在36℃的培养箱内培养24小时。4.工作菌株的使用①内部质量控制：一个月一次阳性对照、培养基每批验收；②外部质量控制：能力验证、实验室比对；③工作菌株的期间核查期间核查的频率：每半年对使用标准菌株进行一次期间核查。工作菌株期间核查的方法及依据：同工作菌株的确认一样。建立标准菌株期间核查记录。八、菌种的标识菌种代数的计算为干粉菌种为第0代，转接一次加一代。具体标识为：例单增李斯特氏菌第0代，标识为DZ-0，第1代标识为DZ-01第1代有12支，则DZ-01-01、……、DZ-01-12；并标明日期：如2016.02.13这样填写。九、菌种的保藏①将试管内菌种放入冰箱中2～8℃冷藏保存。②将传代并经过培养后的菌种放入冰箱中2～8℃保存。每支保存菌种需标明菌名、标准编号、传次、传代日期。十、菌种的销毁①菌种使用后或超过贮存期的应进行销毁。②需销毁的菌种，应用高压蒸汽（121℃）灭菌30分钟。③灭菌后，再进行清洗和处理。④销毁的菌种应做好记录。销毁时由化验负责人监督销毁，保管人员负责销毁。

 能够还原斐林(H.von Fehling)试剂(本尼迪特试剂）或托伦斯(B.Tollens)试剂的糖称为还原糖，所有的单糖（除二羟丙酮），不论醛糖、酮糖都是还原糖。大部分双糖也是还原糖，蔗糖例外。斐林试剂是含Cu2+络合物的溶液，被还原后得到砖红色Cu2O的沉淀。托伦斯试剂被还原后能生成单质银，发生“银镜反应”。分子结构中含有还原性基团（如游离醛基或游离酮基）的糖，叫还原糖。如葡萄糖。果糖含有游离的酮基，所以果糖也属于还原糖。还原性质一般情况下，单糖的还原能力主要来自它的醛基，如葡萄糖，而多糖则大多因为半缩醛羟基的存在。还原后，自己会变成糖酸。如葡萄糖就会变成葡萄糖酸。如该糖是酮糖，羰基就会断裂，分解成两个较小的分子，如果糖。所有单糖（除二羟丙酮）及大部分二糖（除蔗糖等）在本尼迪克特试验中呈阳性反应，所以大部分单糖及二糖都具有还原性。还原糖直接滴定法原理试样经除去蛋白质后,以亚甲蓝作指示剂,在加热条件下滴定标定过的碱性酒石酸铜溶液(已用还原糖标准溶液标定),根据样品液消耗体积计算还原糖含量。还原糖滴定注意事项一、碱性酒石酸甲、乙液与还原糖反应是定量关系，它们的多少直接影响测定结果的多少，从而影响检测数据，所以碱性酒石酸甲、乙液必须精-确吸取，保证每次取样量一致。影响碱性酒石酸铜甲、乙液吸取误差的因素：１、碱性酒石酸铜甲、乙液在吸管中刻度液面的位置要保持一致。２、吸管外壁残留的液体多少会造成碱性酒石酸甲、乙液取样量的误差，所以要习惯性的对吸管外壁的碱性酒石酸甲、乙液进行相同处理，保证每次外壁残留液相对一致，从而减少液体取样量的误差。３、碱性酒石酸铜甲、乙液放入三角瓶的速度保持一致（不可吹），放完后要观察其残留在吸管中有多少，要保证每次残留一致。４、碱性酒石酸铜甲、乙液的不是很明显的沉淀（或浓度变化）也会对测定造成波动，取碱性酒石酸铜甲液的器具切记不要与碱性物质接触（同时也要注意防止带入碱性物质于甲液中），以避免甲液产生沉淀，盛甲液的容器时间长了，内壁上也会残留固体（硫酸铜），这些固体颗粒也会造成检测误差。二、滴定速度要保持均衡一致，趁热以每2秒一滴的速度滴定为好（速度不要受滴定时间的长短而改变）。三、试样溶液滴定时要进行预测，正式测定时从滴定管滴加比预测体积少1ml的试样溶液至锥形瓶中，控制在2min中内加热至沸，保持沸腾以1滴/2s的速度滴定至终点。四、电炉的温度对检测结果也有影响，所以要保证电炉充分预热，同时三角瓶在电炉上的放置位置要保持一致。五、测定时液体沸腾后的开始滴定的时间也要保持一致2min内，一般等液体充分沸腾后开始滴定。六、滴定终点的判断也要保持一致。等液体蓝色刚好褪去为为滴定终点。七、糖液稀释及取样也要注意精-确，注意吸管正确使用方法。八、滴定过程中zui-好佩戴面罩和口罩以防沸腾液体喷溅或是发生三角爆裂等。九、注意滴定管漏液、变形，滴定管尖-端气泡等对检测数值的影响。十、三角瓶使用后清洗干净。十一、滴定开始前可以在空白三角瓶和样品三角瓶内加入几粒小颗粒玻璃珠，促进样品受热均匀以及防爆裂。十二、如果溶液中还原糖含量较低，产生的氧化亚铜便会较少，试验后只会有绿色、混浊的黄色或橙色等。十三、在酸性环境中，Cu2 会变得较为稳定，不容易发生反应，所以不能进行试验。十四、醇和醛在这测试亦会产生砖红色沉淀物，因为两者都具有在这试验中产生作用的官能团。

一、误差的来源一个客观存在的具有一定数值的被测成分的物理量，称为真实值，测定值与真实值之差称为误差。根据产生误差的原因，通常分为两类，即系统误差和偶然误差。系统误差是由固定原因造成的误差，在测定的过程中按一定规律重复出现，有一定的方同性，即测定值总是偏高或总是偏低，这种误差的大小是可测的，所以又称“可测误差”。它来源于分析方法误差、仪器误差、试剂误差和主观误差，如分析人员掌握操作规程与操作条件等因素。偶然误差是由于一些偶然的外因所引起的误差，产生的原因往往是不固定的、未知的，且大小不一、或正或负，其大小是不可测的，这类误差的来源往往一时难于觉察，可能是由于环境(气压、温度、湿度)等的偶然波动或仪器的性能、分析人员对各份试样处理时不一致所产生的。二、控制和消除误差的方法误差的大小，直接关系到分析结果的精密度和准确度。减少误差的措施有如下几种：1.正确选取样品量样品量的多少与分析结果的准确度关系很大。在常量分析中，滴定量或重量过多或过少都直接影响准确度。在比色分析中，含量与吸光度之间往往只在一定范围内呈线性关系。这就要求测定时读数在此范围内，以提高准确度。通过增减取样量或改变稀释倍数可以达到此目的。2.增加平行测定次数减少偶然误差测定次数越多，则平均值就越接近真实值，偶然误差亦可抵消，所以分析结果就越可靠。一般要求每个样品的测定次数不应少于两次，如要更精-确的测定，分析次数应更多些。3.对照试验对照试验是检查系统误差的有效方法。在进行对照试验时，常常用已知结果的试样与被测试样一起按完全相同的步骤操作，或由不同单位、不同人员进行测定，最后将结果进行比较。这样可以抵消许多不明了因素引起的误差。4.空白试验在进行样品测定过程的同时，采用完全相同的操作方法和试剂，惟独不加被测定的物质，进行空白试验。在测定值中扣除空白值，就可以抵消由于试剂中的杂质干扰等因素造成的系统误差。5.校正仪器和标定溶液各种计量测试仪器，如实验室电子天平、旋光仪、分光光度计，以及移液管、滴定管、容量瓶等，在精-确的分析中必须进行校准，并在计算时采用较正值。各种标准溶液(尤其是容易变化的试剂)应按规定定期标定，以保证标准溶液的浓度和质量。6.严格遵守操作规程分析方法所规定的技术条件要严格遵守。经国家或主管部门规定的分析方法，在未经有关部门同意下，不应随意改动。三、分析数据的处理通常，测定工作获得一系列有关数据以后，需按以下原则记录、运算和处理。1.记录运算规则主要说明食品分析中数据记录与计算，其均按有效数字计算法则进行，即：①除特殊规定外，一般可疑数为最后一位，有±1个单位的误差；②复杂运算时，其中间过程可多保留一位，最后结果需取应有的位数；③加减法计算的结果，其小数点以后保留的位数，应与参加运算各数中小数点后位数最小的相同；④乘除法计算的结果，其有效数字保留的位数应与参加运算各数中有效数字位数最少者相同；2.可疑值的取舍同一样品进行多次测定，常发现个别数据与其他数据相差较大，对这些不如意的数据不能任意弃去。除非分析者有足够的理由确证这些数值是由于某种偶然过失或外来干扰而剔除外，否则都应当依据误差理论来确定这些数据的取舍。3.标准曲线的绘制用吸光光度法、荧光光度法、原子吸收光度法、色谱分析法对某些成分进行测定时，常常需要制备一套具有一定梯度的系列标准溶液，测定其系数（吸光度、荧光强度、峰高），绘制标准曲线。在正常情况下，此标准曲线应该是一条通过原点的直线，但在实际测定时，常出现某一、二点偏离直线的情况，这时，用最小二乘方回归法绘制标准曲线，就能得到最-合理的图形。最小二乘法计算，然后按回归方程式计算结果，绘制标准曲线。4.测定结果的校正在食品分析中，常常因为系统误差，使测定结果高于或低于检测对象的实际含量，即回收率不是100/%，所以需要在样品测定的同时用加入回收法测定回收率，再利用回收率按下式对样品的测定结果加以校正。

目前，国内实验室资源不能合理调配、实验室运营管理效率低、运营成本偏高等现象普遍存在，造成了实验室成本浪费严重，如何在保证高效的同时，节约实验室分析成本是个值得探讨的论题，我们值得花更多时间来研究，小编先给大家提供一个思路，希望大家共同探讨。被你忽略的实验室运行成本（一）员工工资和福利，实验室必须拥有为保证管理体系的运行、检测/校准数据和结果的出具所需的专业技术人员和管理人员，他们资历和职称不同，工资福利明显也不同，所以员工工资福利是实验室开支的一个重要组成部分。（二）仪器设备折旧费，随着社会经济的发展，对环境监测数据要求越来越高。除了监测技术高，还需要好的仪器设备和监测环境，对于资金充足的实验室，往往采用进口监测仪器设备，价格昂贵，但这些都有使用寿命，就产生了仪器设备（包括房屋和环境设施）的折旧费，也是实验室运行成本的一种。（三）仪器设备维修费，（包括更换配件）在仪器设备的使用过程中，使用时间长了也难免会出现故障或性能下降，仪器保管人就应提出维修申请，一旦维修就必然产生费用，有时更换配件也不了的。（四）仪器设备、玻璃器皿周期检定费，根据国家现行法律的规定，属于国家强制检定目录内的工作计量器具，应依法送检，检定费用由实验室来承担。（五）药品试剂、标准物质、玻璃器皿的费用，环境监测实验室每年都需要消耗大量的药品试剂和损耗一定量的玻璃器皿，作为有个有资质的实验室，对药品试剂、标准物质和玻璃器皿的要求相当高，这笔费用也是实验室每年必不可少的开支。如何最大限度的降低实验室运行成本1.做好实验室招聘工作。人员素质和水平对实验室是至关重要的，提高进入实验室工作的门槛，招聘综合素质高的人员，素质高的人不但完成工作量多而且好，大大节省了实验室的人力。2.做好仪器设备（包括环境设施）日常维护工作。仪器设备日常维护好，不仅仅是使用寿命延长，在平时的使用中出现故障的概率也小。3.做好仪器设备、玻璃器皿检定计划工作。检定计划有助于保证仪器设备、玻璃器皿的有效使用，同时有助于避免仪器设备、玻璃器皿的重复检定，实验室应当按照检定计划认真落实。4.做好药品试剂、标准物质、玻璃器皿的购买及使用工作。实验室应该对药品试剂、标准物质、玻璃器皿的供应商进行评价，评价的内容包括供应商的信用、产品质量和价格等，并对这些消耗品做好使用登记。5.做好内部培训工作。内部培训和交流相对成本较低，也是一种提高能力的途径，加强内部培训和交流，提高实验室人整体素质。小结总之，实践见真理，不管是食品实验室、环境实验室、药品实验室，运行成本的构成都各有自己的特点，本文的方法只是提供一种解决方案的思路，至于最适合您本身实验室的有效方法，还得全面的考虑实验室成本的构成，更精准的衡量实验室运行成本，也更有利于实验室的规范管理，使得实验室管理体系运行持续有效。

有机实验：十大原则一、拿到一个目标化合物，一定要好好做文献检索并调阅原文，如果是已知化合物，选择一般、不是很苛刻的条件（如需要特殊催化剂、严格无水无氧等）、易于工业化的工艺来做小试；如果没有相同的化合物，选择那些相似度高的工艺。二、对于第一次做的反应，应该了解所有用到的原料的物理、化学性质，对于反应中发生的现象也有了解（如剧烈放热、有气体放出、有固体生成等），做到心中有数，根据具体要求搭建适合的反应装置；对于所用溶剂的关键指标也要做到心中有数。三、任何时候不要把反应装置搞成密闭体系，这是做反应的大忌，小反应可以用三通/气球，比较大的反应可以用双排管/氮气保护；所有的反应应该有二次保护，在反应瓶下面垫一个塑料盆，防止一旦反应瓶破裂，物料可以回收回来，要不然，尤其是重要的反应，你只能欲哭无泪。四、好好计算投料表，注意原料纯度及水分，计算完毕一定要最少验算一遍，从源头上杜绝出错。五、一定不要在精神状态不好的时候做实验，精神状态不好的时候最容易出问题，如加错原料或加错原料顺序、失误引发冲料等。六、对于新反应，如果不确定，建议氮气保护下反应。七、有机实验，安全第一，心中要时刻有安全意识。八、对于小试反应，一定要认真观察反应，仔细记录反应现象，为放大积累控制参数。九、对于需要过夜的反应，一定要等到反应平稳后再离开，注意搅拌速度，防止搅拌子突然跳起打碎反应瓶，确认冷凝管及冷凝水，防止半夜实验室水漫金山。十、处理反应前取样监控，监控结果出来之前不要贸然处理；对于多步反应，注意每一步的中间体产物留样。有机实验：安全知识有机溶剂大都易燃，如乙醇、丙酮、苯等，特别是乙-醚。常用气体如氢气、乙炔等也易燃易爆。常用药品如浓硫酸、浓硝酸、浓盐酸、烧碱及溴等有腐蚀性。有毒药品也不少，如氰化钠、硝基苯和某些有机磷化合物等。因此应十分注意安全操作。引起火灾有两个条件：（1）爆炸混合物 空气中混有易燃有机物蒸汽达到某一极限时，遇有明火即发生燃烧爆炸，称为爆炸极限，如乙-醚及苯爆炸极限均很低，约为1～2％，闪点也很低，低于0℃。（2）火种 由于敲击、鞋钉磨擦、马达炭刷或电器开关等产生的火花。若遇着火，应沉着，立即关闭煤气，切断电源，熄灭火种。小火用湿布或石棉布扑灭；少量溶剂（如几ml）可任其烧完，转移附近易燃物质；大火须用灭火器。四氯化碳灭火器高温时生成剧毒的光气，我国已禁止生产和使用。二氧化碳灭火器可用以扑灭有机物及电器设备的着火。炮沫灭火器为含发泡剂的碳酸氢钠溶液和硫酸铝溶液，使用时将筒身倾倒，二者混合反应生成大量的二氧化碳成泡沫喷出，后处理较麻烦。注意油浴和有机溶剂不能用水浇，衣服着火不能跑，应当就地打滚或用厚外衣包裹使之熄灭。在做有机实验时，应注意以下三点：①不能用明火加热有机溶剂；②蒸馏乙-醚要远离火源；③金属钠应浸在煤油中，反应后剩下的钠用乙醇处理，磷放在煤油中。乙-醚易生成过氧化物，蒸馏时应注意。可用KI淀粉检验，用FeSO4防止过氧化物产生。试剂烧伤可作如下处理：①酸 用大量水洗，3～1％碳酸氢钠溶液洗，再水洗、消毒、擦干、涂烫伤油膏。②碱 用大量水洗，2％醋酸液洗，再水洗，其余同上。③溴 水洗，酒精擦至无溴液存在为止，其余同上。④钠 碱同。试剂溅入眼内作如下处理：①酸 用大量水洗，再用1％碳酸氢钠溶液洗。②碱 用大量水洗，再用1％硼酸溶液洗。③溴 同酸。④玻璃用镊子移去玻璃，或在盆中用水洗，切勿用手揉动。有机实验：常用溶剂处理（1）乙-醚→无水乙-醚加硫酸亚铁或亚硫酸氢钠溶液除去。（2）乙醇→无水乙醇或绝对乙醇（3）苯→无水无噻吩苯用浓硫酸除噻吩，用无水CaCl2干燥。噻吩的检验用靛红浓硫酸溶液振荡片刻，显浅蓝绿色。有机实验：基本操作（1）蒸馏 蒸馏装置包括以下几项：①温度计比沸点高20℃左右，安装时使其汞球上端与蒸馏瓶支管中心成一直线。低于-38℃不能用水-银温度计，可装入有机液体如甲苯（-90℃）、正戊烷（-130℃）等。②等液体冷却后再加入，否则将引起暴沸。③冷凝管 直型冷凝管：140℃以下用水冷却；空气冷凝管：用于140℃以上。④接受器 三角瓶、三角吸滤瓶或蒸馏烧瓶。对易挥发、易着火、蒸汽有剧毒物质支管上应接橡皮管通入水槽，蒸馏时不断放水。蒸有毒物质应在通风橱内进行。⑤加热浴 80℃以下用水浴；100℃用沸水浴或水蒸汽浴；高于100℃用空气浴，100～250℃用油浴、石蜡可达220℃，甘油达140～150℃；高于200℃用硅油或真空泵油。热浴温度一般比沸点高20～30℃左右，控制馏出速度为1～2滴／秒，热浴液面应和蒸馏瓶内液面相当。⑥熔盐 硝酸钠和硝酸钾混合物在218℃熔化，使用到700℃。40％亚硝酸钠、7％硝酸钾在142℃熔化，使用范围为150～500℃。⑦冷却 水可冷却到室温，室温以下用冰或冰水混合物。食盐和碎冰（1∶3）使用于-5～-18℃，最低-21℃；冰和CaCl2·6H2O（7～8∶10）使用于-20～-40℃；干冰（固态CO2）与乙醇混合使用到-72℃；干冰与乙-醚、丙酮或氯仿混合可达-77℃。⑧水蒸汽蒸馏 特别适用于有大量树脂状杂质时。提纯物必须：不溶或几乎不溶于水；在沸腾状态与水长期共存不起化学变化；在100℃时有一定的蒸汽压（不少于 1.3×103Pa）。过热水蒸汽可用于130～660Pa蒸汽压。停止操作时应先打开螺旋夹使水蒸汽通大气。然后移去热源。⑨减压蒸馏 采用克氏蒸馏瓶，一颈插入毛细管作为液体沸腾的汽。⑩减压范围 水泵为105Pa～103Pa，水温越低蒸汽压越低；油泵为103～13Pa；扩散泵为0.13～0.001Pa。停泵操作次序：移去热源，通大气，关闭油泵。（2）重结晶与过滤 纯化固体有机物常用合适的溶剂进行重结晶。①溶剂的选择 若杂质溶解度很大可留于溶液中；若杂质溶解度很小可留于残渣中。要求溶剂对纯化物质的溶解度随温度变化大，沸点不宜太高或太低，如无合适的单一溶剂时，可选用混合溶剂。②混合溶剂 一般由两种能以任何比例互溶的溶剂组成，其中一种易溶解纯化物质，另一种难溶解。活性炭脱色：适用于溶液中存在着少量树脂状物质或极细的不溶性杂质。操作应注意：先将溶质溶解在热溶液中；待溶液稍冷后加入活性炭摇匀；煮沸5～10min，趁热过滤；不能在近沸的溶液中加入活性炭，否则易引起暴沸；在非极性溶剂（如苯、石油醚）中，活性炭脱色效果不好时，可用其它办法，如氧化铝吸附等。③过滤 应趁热进行。折叠滤纸、常压过滤（可用保温漏斗）；吸滤应避免吸滤过程中结晶析出，但有时杂质也会通过滤孔或结晶堵塞滤孔。漏斗均应预热，并用热溶剂润湿滤纸。④结晶 迅速冷却晶体小，晶体中杂质少，但表面母液较多；慢慢冷却，晶体较大，但往往有母液留在晶体之间，也有杂质。第二次结晶时应慢慢冷却，得到的晶体均匀，性能较好。（3）干燥剂一类与水可逆地结合生成水合物，如H2SO4，无水CaCl2、Na2SO4、MgSO4、CuSO4、K2CO3和固体KOH等，均不能完全去水。另一类能与水发生不可逆反应生成新的化合物，如P2O5、CaO和Na等，蒸馏时不必滤除。但制备无水乙醇时单用钠不行，因生成乙醇钠与水反应是可逆的。应加入邻苯二甲酸乙酯或琥珀酸乙酯。消除了NaOH逆反应，使乙醇含水量低于0.01％。选择干燥剂应注意：①碱性物质不能用酸性干燥剂干燥；②CaCl2不能干燥醇、酚、胺、脂、酸、酰胺、酮、醛等，因形成分子络合物，且由于其中含有Ca（OH）2等碱性物质，不适于干燥酸性化合物。MgSO4是一很好的中性干燥剂，可干燥许多CaCl2不能干燥的化合物。固体KOH（NaOH）可干燥氨气、胺等物质；五氧化二磷可干燥醇类、酮类；浓硫酸只能干燥溴、烷、卤代烷。（4）色谱分离①吸附色谱以氧化铝、硅胶为吸附剂，将物质自溶液中吸附到它的表面上，然后用溶剂洗脱或展开。有柱色谱和薄层色谱二种方式。②分配色谱以纤维素为载体，固体溶剂叫固定相，样品溶液加入后，用于洗脱的液体叫移动相。由于样品组分在二相之间分配不同、移动速度不同而得到分离。有柱色谱、薄层色谱、纸色谱三种。

实验室常用的热源有煤气、酒精和电能。为了加速有机反应，往往需要加热，从加热方式来看有直接加热和间接加热。在有机实验室里一般不用直接加热，例如用电热板加热圆底烧瓶，会因受热不均匀，导致局部过热，甚至导致破裂，所以，在实验室安全规则中规定禁止用明火直接加热易燃的溶剂。为了保证加热均匀，一般使用热浴间接加热，作为传热的介质有空气、水、有机液体、熔融的盐和金属。根据加热温度、升温速度等的需要，常采用下列手段。1、空气浴这是利用热空气间接加热，对于沸点在80℃以上的液体均可采用。把容器放在石棉网上加热，这就是最-简单的空气浴。但是，受热仍不均匀，故不能用于回流低沸点易燃的液体或者减压蒸馏。半球形的电热套是属于比较好的空气浴，因为电热套中的电热丝是玻璃纤维包裹着的，较安全，一般可加热至400℃，电热套主要用于回流加热。蒸馏或减压蒸馏以不用为宜，因为在蒸馏过程中随着容器内物质逐渐减少，会使容器壁过热。电热套有各种规格，取用时要与容器的大小相适应。为了便于控制温度，要连调压变压器。2、水浴当加热的温度不超过100℃时，最-好使用水浴加热，水浴为较常用的热浴。但是，必须强调指出，当用于钾和钠的操作时，决不能在水浴上进行。使用水浴时，勿使容器触及水浴器壁或其底部。如果加热温度稍高于100℃，则可选用适当无机盐类的饱和水溶液作为热溶液。例如：盐类 饱和水  溶液的沸点（℃）NaCl              109MgSO4           108KNO3            116CaCl2             180由于水浴中的水不断蒸发，适当时添加热水，使水浴中水面经常保持稍高于容器内的液面。总之，使用液体热浴时，热浴的液面应略高于容器中的液面。3、油浴适用100-250℃，优点是使反应物受热均匀，反应物的温度一般低于油浴液20℃左右。常用的油浴液有：①甘油：可以加热到140-150℃，温度过高时则会分解。②植物油：如菜油、蓖麻油和花生油等，可以加热到220℃，常加入1%对苯二酚等抗氧化剂，便于久用，温度过高时则会分解达到闪点时可能燃烧起来，所以，使用时要小心。③石蜡：能加热到200℃左右，冷到室温时凝成固体，保存方便。④有机硅油：可以加热到200℃左右，温度稍高并不分解，但较易燃烧。用油浴加热时，要特别小心，防止着火，当油受热冒烟时，应立即停止加热。油浴中应挂一支温度计，可以观察油浴的温度和有无过热现象，便于调节火焰控制温度。油量不能过多。否则受热后有溢出而引起火灾的危险。使用油浴时要极力防止产生可能引起油浴燃烧的因素。加热完毕取出反应容器时，仍用铁夹夹住反应容器使其离开液面悬置片刻，待容器壁上附着的油滴完后，用纸和干布揩干之。4、砂浴砂浴一般是用铁盆装干燥的细海砂（或河沙），把反应容器半埋砂中加热。加热沸点在80℃以上的液体时可以采用，特别适用于加热温度在220℃以上者，但砂浴的缺点是传热慢，温度上升慢，且不易控制，因此，砂层要薄一些。砂浴中应插入温度计。温度计水银球要靠近反应器。5、金属浴选用适当的低熔合金，可加热至350℃左右，一般都不超过350℃。否则，合金将会迅速氧化。冷却与冷却剂在有机实验中，有时须采用一定的冷却剂进行冷却操作，在一定的低温条件下进行反应，分离提纯等。例如：（1）某些反应要在特定的低温条件下进行的，才利于有机物的生成，如重氮化反应一般在0℃-5℃进行；（2）沸点很低的有机物，冷却时可减少损失；（3）要加速结晶的析出；（4）高度真空蒸馏装置（一般有机实验很少运用）。根据不同的要求，选用适当的冷却剂冷却，最-简单的是用水和碎冰的混合物，可冷却至0℃-5℃，它比单纯用冰块有较大的冷却效能。因为冰水混合物与容器的器壁充分接触。若在碎冰中酌加适量的盐类，则得冰盐混合冷却剂的温度可在0℃以下，例如：普通常用的食盐与碎冰的混合物（33：100），其温度可由始温-1℃降至-21.3℃。但在实际操作中温度约-5℃~-18℃。冰盐浴不宜用大块的冰，而且要按上述比例将食盐均匀撤布在碎冰上，这样冰冷效果才好。溶剂类干燥与干燥剂有机物干燥的方法大致有物理方法（不加干燥剂）和化学方法（加入干燥剂）两种。物理方法如吸收、分馏等，近年来应用分子筛来脱水，在实验室中常用化学干燥法，其特点是在有机液体中加入干燥剂，干燥剂与水起化学反应(例如Na＋H2O→NaOH+H2↑)或同水结合生成水化物，从而除去有机液体所含的水分，达到干燥的目的。用这种方法干燥时，有机液体中所含的水分不能太多（一般在百分之几以下）。否则，必须使用大量的干燥剂，同时有机液体因被干燥剂带走而造成的损失也较大。一、液体干燥常用干燥剂常用干燥剂的种类很多，选用时必须注意下列几点：①干燥剂与有机物应不发生任何化学变化，对有机物亦无催化作用；②干燥剂应不溶于有机液体中；③干燥剂的干燥速度快，吸水量大，价格便宜。常用干燥剂有下列几种：（1）无水氯化钙价廉、吸水能力大，是最-常用的干燥剂之一，与水化合可生成一、二、四或六水化合物（在30℃以下）。它只适于烃类、卤代烃、醚类等有机物的干燥，不适于醇、胺和某些醛、酮、酯等有机物的干燥，因为能与它们形成络合物。也不宜用作酸（或酸性液体）的干燥剂。（2）无水硫酸镁它是中性盐，不与有机物和酸性物质起作用。可作为各类有机物的干燥剂，它与水生成MgSO4·7H2O（48℃以下）。价较廉，吸水量大，故可用于不能用无水氯化钙来干燥的许多化合物。（3）无水硫酸钠，它的用途和无水硫酸镁相似，价廉，但吸水能力和吸水速度都差一些。与水结合生成NaSO4·10H2O（37℃以下）。当有机物水分较多时，常先用本品处理后再用其它干燥剂处理。（4）无水碳酸钾、吸水能力一般，与水生成K2CO3·2H2O，作用慢，可用干燥醇、酯、酮、腈类等中性有机物和生物碱等一般的有机碱性物质。但不适用于干燥酸、酚、或其它酸性物质。（5）金属钠、醚、烷烃等有机物用无水氯化钙或硫酸镁等处理后，若仍含有微量的水分时，可加入金属钠（切成薄片或压成丝）除去。不宜用作醇、酯、酸、卤烃、醛、酮及某些胺等能与碱起反应或易被还原的有机物的干燥剂。液态有机化合物干燥的操作液态有机化合物的干燥操作一般在干燥的三角烧瓶内进行。把按照条件选定的干燥剂投入液体里，塞紧（用金属钠作干燥剂时则例外，此时塞中应插入一个无水氯化钙管，使氢气放空而水气不致进入），振荡片刻，静置，使所有的水分全被吸去。如果水分太多，或干燥剂用量太少，致使部分干燥剂溶解于水时，可将干燥剂滤出，用吸管吸出水层，再加入新的干燥剂，放置一定时间，将液体与干燥剂分离，进行蒸馏精制。二、固体的干燥从重结晶得到的固体常带水分或有机溶剂，应根据化合物的性质选择适当的方法进行干燥。（1）自然晾干这是最-简便，最-经济的干燥方法。把要干燥的化合物先在滤纸上面压平，然后在一张滤纸上面薄薄地摊开，用另一张滤纸复盖起来，在空气中慢慢地凉干。（2）加热干燥对于热稳定的固体可以放在烘箱内烘干，加热的温度切忌超过该固体的熔点，以免固体变色和分解，如属需要可在真空恒温干燥箱中干燥。（3）红外线干燥特点是穿透性强，干燥快。（4）干燥器干燥对易吸湿或在较高温度干燥时，会分解或变色的可用干燥器干燥，干燥器有普通干燥器和真空干燥器两种。

细菌鉴定是指将分离培养获得的病原菌,通过纯化培养使其达到不含有其他微生物的纯培养程度,继而进行系统鉴定。而菌种保藏机构在收集一些已经冻干的菌种时,应在开启后经过两代的适应性培养方可进行复核性的系统鉴定。系统鉴定是通过细菌的形态结构、生长特性、抗原性、病原性以及目前流行的核酸测定方法等检测,并用已知标准免疫血清确定分离细菌的属、种和型(群).目前菌种保藏机构通常使用的细菌鉴定方法大致有以下几种：传统方法常规宏观菌落形态学观察,主要观察菌落在其适合的培养基上的生长状况:细菌在固体培养基上的生长形态、大小、颜色是否均匀一致,菌落个体表面及边缘的生长状况;在液体培养基上的浑浊状况、沉淀状况、液面菌膜状况;半固体上穿刺接种后,观察细菌是否沿着接种线生长以及其生长状态是呈毛刷样生长还是均匀生长,上下生长是否一致.在鉴别培养基上培养,观察结果是否跟预期结果相同。 细菌的个体形态学观察,即通过显微镜观察.观察前细菌需要着色,要根据预先确定的观察项目选择与之相对应的染色方法,目前常用的染色方法包括革兰氏染色法、美蓝染色法、Ziehl—Neelsen染色法、姬姆萨染色法、鞭毛染色法、芽胞染色法等.尽量挑选对数生长期的细菌进行染色观察,此时的细菌生长处于幼期,利于观察,因为一些陈旧细菌的染色结果会有变化,如本为革兰氏阳性菌经过长期搁置后染色结果可能为革兰氏阴性.同时细菌培养时要注意培养基的挑选,一些细菌的特殊结构如荚膜、鞭毛、菌毛、芽胞等,其表达是需要在特定的培养基上才能正常发育,有的细菌如炭疽在一般的培养基上不形成荚膜,只在动物体内形成明显的荚膜,所以需先接种实验动物后用病料进行涂片镜检.在镜检时观察细菌基本形态结构和大小及其排列状态、菌端形状、有无两极染色、有无形成芽胞和荚胞等。形态学鉴定辅以生化试验在细菌鉴定中具有重要的意义,生化试验是根据细菌培养过程中不同菌种所产生的新陈代谢产物各异,表现出不同的生长特性.通过生物化学的方法来检测这些物质的存在与否,从而能够得到细菌的鉴定结果.如糖(醇)类代谢试验、氨基酸和蛋白质代谢试验、有机酸盐和胺盐利用试验、呼吸酶类试验、毒性酶类试验等。血清型鉴定是根据细菌具有相对特异性的抗原结构这个特点进行微生物鉴定的特异方法.抗原的特异性程度又存在于属间细菌所共有的共同抗原,这种抗原的存在,能表明其属性。另一类特异性抗原只存在于特定的种、型,是确定细菌种、型的重要依据，通过专门的分型血清即可对这些细菌的血清型进行鉴定。细菌毒力的测定,病原菌侵入机体能否引起疾病与其本身的毒力、侵入机体的数量和侵入部位有关.不同的病原菌或同种细菌不同的型或株,毒力常不一致.常用LD50或ID50表示毒力,即在一定时间内,能使一定条件的某种动物半数死亡或感染需要的最小细菌数或毒素量.毒力测定在菌种鉴定过程中可用于鉴别一些有代表性的菌株.LD50可用Reed—Muench公式进行计算。仪器自动化鉴定随着仪器分析技术的进步和计算机的广泛应用,微生物菌种鉴定逐渐由传统的形态学观察和人工生理生化实验鉴定发展进入了基于仪器自动化分析的鉴定系统阶段。近年来,一系列自动鉴定系统相继推出,并在应用中取得理想效果,如VITEK系统、MIDl系统、BIOLOG系统、SENSITl.TRE系统、AUTOSCEPTOR系统以及MICROSCAN系统等。以BIOLOG微生物鉴定系统为例,简述微生物自动鉴定系统的工作原理：BIOLOG微生物自动分析系统是一套微生物鉴定系统,该系统主要根据细菌对糖、醇、酸、醋、胺和大分子聚合物等95种碳源的利用情况进行鉴定.细菌利用碳源进行呼吸时,会将四哇类氧化还原染色剂(TV)从无色还原成紫色,从而在鉴定微平板(96孔板)上形成该菌株特征性的反应模式或“指纹图谱”,通过纤维光学读取设备——读数仪来读取颜色变化(分为“自动”和“人工”两种读取方式),由计算机通过概率最大模拟法将该反应模式或“指纹图谱”与数据库相比较,可以在瞬间得到鉴定结果,确定所分析的菌株的属名或种名.以BIOLOG系统6.01版数据库为例,包含了革兰氏阴性好氧菌524种、革兰氏阳性好气菌341种、厌氧菌361种、酵母菌267种、丝状真菌(含部分酵母菌)619种以及几种特殊的致病菌,目前这个数据库已进行更新.利用微生物快速系统进行细菌鉴定,能节省时间,但由于其在数据比对过程中记入一些非特异性的阳性反应孔,会造成偶然误差,从而引起个别鉴定结果不稳定,另外此类仪器本身及其耗材价格均较高。分子生物学鉴定分子生物学鉴定目前比较流行的主要是核酸检测技术,包括基因测序、指纹图谱技术、基因探针技术、聚合酶链反应(PCR)、GC含量测定等.PCR和核酸杂交单独或结合在仪器已经形成比较经典的核酸检测技术,目前这两者已经得到了较大范围的推广和应用。核酸检测技术原理DNA的G+C含量测定法这种方法是根据细菌的DNA中G+C含量的特异性来进行细菌鉴定,通过熔解温度(Tm)法或浮力密度法测定细菌DNA中G+C的含量,通过对比来鉴定细菌。16S rRNA鉴定细菌的核糖体RNA(rRNA)基因高度保守且进化速度缓慢,在漫长的进化过程中保留了rRNA基因结构和功能的同源性,在微生物染色体上可存在多个拷贝,以rRNA基因片段为探针可检出含有rRNA基因的DNA-片段.分析杂交后得到的rRNA指纹图,为菌种定型和近缘菌株的鉴定提供了一种新技术.针对rRNA基因的核糖体分型可成功地区分多个菌种的相关菌株,因此该技术也被广泛称作核糖体分型技术.原核生物含有23S、16S和5S三种 rRNA,其大小分别约为3000、1500和120个碱基.其中作为小亚单位核糖体RNA的16S rRNA的大小最-适合于核糖体分型.一般完成l6S rRNA序列测定后,在GenBank中与已知的序列进行BLAST分析,从而得出鉴定结果。扩增片段长度多态性(AFLP)分析这是一种测定基因组限制性片段的DNA指纹技术,通过PCR选择性地扩增整个基因组DNA的内切酶片段,在分辨率高的聚丙烯酰氨凝胶上电泳,产生一组特异的DNA限制性片段的指纹图谱.与其他DNA指纹技术相比有其独特的优点:可用于各种大小不同的基因组的指纹分析,为研究细菌属乃至株间的亲缘关系提供一个有效手段;具有一定的灵活性,可通过特异性PCR引物的设计和内切酶组合的选择,调整AFLP图谱中限制性片段的适宜数目;由于适用了严格的PCR条件和高分辨率的聚丙烯酰氨凝胶电泳,因而重复性好,分辨率高;AFLP不仅仅是简单的指纹技术,而且可作为连接遗传图谱与物理图谱间的桥梁而用于基因组的研究。限制性片段长度多态性(RFLP)分析原理是用限制性内切酶将细菌基因组DNA进行切割,之后在琼脂糖凝胶上电泳分离,以显示不同种群基因组DNA的限制性片段长度多态性.RFLP产生的指纹图谱更适用于细菌种间及种内株间的分型鉴定。随机扩增DNA多态性(RAPD)分析,又称为随意引物PCR(AP—PCR)它是一种DNA指纹多态性分析技术,其理论依据是不同的基因组中与随意引物匹配的碱基序列的位点和数目可能不同,因而用一组人为设计的核苷酸作为引物,通过PCR随机扩增可产生物种特异性的DNA带谱。

酒精消毒原理 酒精是一种有机化合物，学名乙醇，分子式为C2H5OH。酒精分子有很大的渗透能力，它能穿过细菌表面的膜，打入细菌内部，使构成细菌生命基础的蛋白质凝固即蛋白质变性，将细菌杀死。那么是不是酒精浓度越高，杀菌效果越好呢？并不是，纯酒精反而不能彻底杀死细菌。纯酒精使蛋白质凝固的本领固然很大，但是它却使细菌表面的蛋白质一下子就凝固起来，形成一层硬膜。这层硬膜阻止酒精分子进一步渗入细菌内部，反而保护细菌。人们经过反复实验，证实75%的酒精杀菌力最-强。酒精的储存、使用要求酒精宜储存于阴凉、通风的库房，远离火种、热源。库温不宜超过30℃。保持容器密封，应与氧化剂、酸类、碱金属、胺类等分开存放，切忌混储。1、领用、暂存、使用的容器必须有可靠的密封，严禁使用无盖的容器。2、使用前彻底清除使用范围地（酒精滴落地）周边20cm内的易燃及可燃物。3、使用现场必须配备灭火器，使用前要检查灭火器是否有效。4、使用场地范围内禁有火源及超过酒精引燃温度（363℃）的发热物体，使用前必须测试发热温度要在250℃以下，方可使用酒精。5、使用时每次取用后必须立即将容器上盖封闭，严禁敞开放置。6、擦拭过程中对物体上残留的酒精须擦净。7、使用过的毛巾等材料清洁工具，在使用完后应用大量清水清洗后密闭存放，或通风处晾干。8、酒精燃烧灭火处置：可使用二氧化碳、干粉灭火器进行灭火，也可使用湿毛巾、湿衣物覆盖灭火，室外还可以使用沙土覆盖。严禁使用水泼或干燥的毛巾、衣物进行扑打，否则被酒精引燃，火势将蔓延扩散，越烧越大。酒精并不是完全无菌 酒精是中效消毒剂，能杀灭结核杆菌；不能杀死细菌芽孢、部分种类的真菌、病毒等微生物。不能杀死的细菌，其菌体内的毒素，往往是蛋白质，就会随着细菌的裂解而释放，继续对人体产生有害作用。大多数种类的、由空气中落入酒精消毒剂中的细菌，在较长时间的酒精浸泡后，由于细菌的氧化酶失去活性，代谢被抑制，细菌也会死亡。同时酒精也能筛选出耐受酒精杀灭的微生物，其中耐药的致病性微生物就会对人体产生更大的伤害，难以治愈。因此，落入灰尘被污染的酒精消毒液就应该被换掉。所以尽管酒精是消毒剂，但并不是完全无菌的，必要时需对酒精进行无菌处理。

一、实验室比对的管理要求1、实验室应根据年度质量控制计划的需要制定用于内部质量控制的比对试验计划。2、实验室用于内部质量控制的比对试验计划中，应明确各项比对试验的检测项目、比对形式、参加人员、预计日期、结果评价准则、不满意结果的处置要求等内容。3、进行比对试验时，实验室应采取必要的措施杜绝弄虚作假、结果串通或结果修正。4、比对试验完成后，实验室应对比对试验的结果进行汇总、分析和评价，并形成比对试验报告。5、实验室应针对比对试验中出现的问题进行原因分析，根据其对实验室出具检测结果的影响采取纠正措施、预防措施或相应的改进措施。二、比对试验的形式内容1.人员比对人员比对试验是指在相同的环境条件下，采用相同的检测方法、相同的检测设备和设施，由不同的检测人员对同一样品进行检测的试验。当某项试验可由多人进行操作时，实验室可采用人员比对试验的方式进行内部质量控制，通过安排具体具有代表性的不同层次的两人或者多人展开，考核测试人员的能力水平，判断检测人员操作是否正确、熟练、用以评价人员对试验检测结果准确性、稳定性和可靠性的影响。 作为实验室内部质量控制的手段、人员比对优先适用于以下情况：1）依靠检测人员主观判断较多的项目、例如食品中的感官、品尝的项目；2）在培员工和新上岗的员工；3）检测过程的关键控制点或关键控制环节；4）操作难度大的项目和或者样品；5）检测结果在临界值附近；6）新安装的设备；7）新开验的检测项目。2.方法比对方法比对试验是指在环境条件相同、有相同的人员采用不同的检测方法对同一样品进行的检测。当某个检测项目可以由多种方法进行操作时，实验室可以采用方法比对进行内部质量控制，判断检测所遵循的标准或者方法是否被严格的理解和执行，用以评价检测方法对试验检测结果准确性、稳定性和可靠性的影响。作为实验室内部质量控制的手段、方法比对优先适用于以下情况：1）刚实施的新标准或者新方法；2）引进的新技术、新方法和研制的新方法；3）已有的具有多个检验标准或方法的项目。3.仪器比对仪器比对试验是指在相同的环境、相同的方法、由相同的检测人员采用不同的仪器设备对同一样品进行检测的试验。当某项试验可由多种设备进行操作时，实验室可采用设备比对试验的方式进行内部质量控制，判断对测量准确度、有效性有影响的设备是否符合测量溯源性的要求，用以评价仪器设备对实验室检测结果准确性、稳定性和可靠性的影响。作为内部质量控制手段，设备比对试验优先适用于以下情况：1）新安装的设备；2）修复后的设备；3）检测结果出现在临界值附近的设备。4.留样再测留样再测是指在尽可能相同的环境条件下，采用相同的检测方法、相同的检测设备和设施，由相同的检测人员对已完成检测的样品在其留样保存期间进行再次检测的试验。 实验室通过留存样品的再次测量，比较分析上次测试结果与本次测试结果的差异，用以发现实验室因偶然因素对实验室检测结果准确性、稳定性和可靠性的影响。作为内部质量控制手段，留样再测可在下列情况采用：1）验证检测结果的准确性；2）验证检测结果的重复性；3）对留存样品特性的监控。实验室内部比对试验还有其他的形式，实验室影响检测结果的因素有很多，不同的因素对应不同的比对形式，通常采用单因素比对实验，即一次比对实验只考察一个主要的实验因素，例如不同实验室的温湿度条件比对、不同批次或不同品牌的试剂、耗材、器具比对。三、比对实验实施方案设计的方法1.实验室比对实验方案设计参与比对实验方案设计的人员包括熟悉实验室质量管理、检测方法和统计学等方面工作的技术人员。必要时，可以成立比对实验技术小组，负责方案的设计，实施的监督以及比对过程的指导比对方案的内容一般包括：1）目的；2）开始时间和结束时间；3）比对形式、检测项目、仪器设备、检测方法、参加人员等；4）所用样品的描述，例如均匀性、稳定性、发放形式和处置要求；5）检测技术的要求，例如重复测试次数的要求；6）记录要求；7）评价方法和判断的准则；8）出现不符合处置的要求；9）其他需要特殊注意的事项。2.比对实验室对样品的要求样品要求：用于比对实验的样品需要满足以下要求：1）样品有充分的均匀性和稳定性，在适合的条件下保存；2）样品的数量应能够满足所有测试项目的要求，必要时要留出附加测试的样品；3）样品的制备应有文件化处理程序，在使用前应对样品进行确认。样品的制备和准备：比对试验的样品可分为阴性样品和阳性样品。对于阳性样品，可通过以下途径获得：1）自制样品在对样品制备方式了解的情况下，实验室可以利用自有的仪器设备进行简单样品的制备，也可以合作制备。无论采用哪种制备方式，制备的样品都应经过抽样检验评价其均匀性和稳定性，证实其可用于比对试验。2）阳性留样在日常检测过程中遇到的阳性样品，可以根据样品和目标检测项目的性质，选择是否将该样品留存并用于比对试验。运用此类样品进行比对试验时，应确认此类样品在上次检测完成后一直处于符合要求的妥善保存状态，并通过专家评估或样品评价等有效的手段确证其中被分析物的成分和含量没有发生变化。3）标准样品或质控样品有证标准物质、参加实验室间比对或能力验证活动剩余的比对样品以及实验室质控样品，通常均匀性比较好，且具有指-定的参考值和测量不确定度。因此，这类样品只要确认其一直处于符合要求的妥善保存状态，均可用作比对试验样品。4）加标样同时在一系列称取好的样品中分别添加适当浓度的标准物质。添加的过程应独-立于检测过程，添加的人员应为有经验的技术人员，添加的浓度应适合比对试验的目的，添加的体积应准确、少量，添加后的样品应在适当的条件下进行一定时间的放置。3.样品的处置1）样品制备或准备完毕后，应使用不会对检测结果造成影响的方式分装样品，按比对试验方案规定的方式或实验室相关质量控制程序文件的要求分发样品。2）如果对样品的处置会影响试验结果，则应在比对试验计划实施方案中清楚说明，或用特殊说明的方式让检测人员加以注意。检测人员接到样品后，应按要求妥善保管。3）样品的唯1性标识和检验状态标识，实验室体系的要求。4.比对试验的开展1）实验室开展比对试验进行内部质量控制时，应确认其环境条件不会对所要求的检测质量产生不良影响。2）实验室开展比对试验进行内部质量控制时，应确认用于检测的对结果准确性或有效性有显著影响的所有设备，包括辅助测量设备(例如，用于测量环境条件的设备)，经过校准并通过有效的期间核查保持其校准状态的置信度。3）参与比对试验的人员，应按检测方法的要求进行测试，如实记录试验结果及相关信息，提交检测报告和原始记录。4）当试验过程中出现可能影响比对试验结果统计分析的意外情况时，比对试验负责人应及时分析各种因素，与检测人员进行充分协调，并做出继续按原试验方案进行或修改原试验方案、执行新方案的决定。四、小结比对实验室的设计很重要，后面对比对结果的应用和比对结果的评价，都有赖于于比对实验室的设计，另外实验的设计一定要冲着比对的目的而去。

样品管理是实验室管理的一项重要内容，选择科学、有效的样品标识表示形式可以提升样品管理水平，提高检测工作效率，确保样品管理的可靠性和准确性。样品标识为每个样品赋予识别和记录的唯1标记，也就是样品的身份-证明。有了科学的标识管理，再也不用为弄混样品而烦恼了。样品标识的重要性样品的代表性、有效性和完整性将直接影响检测结果的准确度，因此必须对样品的取样、贮存、识别以及样品的处置等各个环节实施有效的控制，确保检验结果准确、可靠。并做好样品的保密与安全工作。标识是信息传递的一种重要的手段，例如：对于有追溯性要求的要素，须有唯1性的标识以便于追溯；对受控对象加以标识可使受控的状态明确；为使环境物品整洁有序，提高工作效率，减少差错，可进行定置标识；危险标识、操作禁示等使员工能正规操作，避免危险等。规范、科学的标识是质量体系安全、高效、经济运转的前提条件。标识的功能标识是以文字、数字、符号、图案及颜色等形式体现的，能够清楚鲜明地表明对象或过程的质量、数量、特性、要求和状态等的一种信息载体，标识常用的方法有记录、卡、标签、标牌、图标、印章等。标识具有识别、定位、导向、提示、警示、说明的功能，它的特点是及时、简明、直观、易于目视。标识管理的优点1、标识管理是以人为本的管理方法，可使工作人员在短时间内知道程序的要求。2、标识形象直观，容易认读和识别，简化管理，使工作有序，减少差错，有利于降低管理成本，提高工作效率。3、标识可作为证据或依据，标识管理是源头管理，完整规范的标识是实现追溯的手段。4、标识管理透明度高，为目视管理、自主管理创造了条件，便于现场人员默契配合、互相监督，发挥激励作用。5、标识具有安全保障作用。样品的标识1、样品的识别包括不同样品的区分识别和样品不同检测状态的识别。2、样品区分识别号可贴在样品上或贴（写）在样品包装物上。识别号由收样部门统一编排。3、样品所处的检测状态，用“待检”、“在检” “检毕” 和“留样”标签加以识别。4、样品在不同的检测状态，或样品的接收、制备、流转、贮存和处置等阶段，应根据样品的不同特点和不同要求，如样品的物理状态、样品的备样要求（如分样或混样）、复检样要求、样品形状的大小、样品制备、加工及分解要求、样品的包装状态和其他有特殊要求的样品，根据检测活动的具体情况，做好样品标识的转移工作，以保持清晰的样品识别号，保证各检测室内样品编号方式的唯1性和必要时的可追溯性。标签标识也有问题？根据ISO/IEC17025中5.8.2的要求，实验室应具有检测和/校准物品的标识系统。实验室通常都会设计样品标签来标识样品，有条件的实验室甚至采用条形码的方法来标识。不过在使用标签或条形码标识样品时会遇到如下的问题：1、使用标签或条形码标识系统不仅仅是给样品分配一个唯1性编号，样品有了唯1性编号可以避免在文件中出现混淆，但为避免实物出现混淆，还需要清楚地标识出样品的目前状态，比如：待检、检测中、检测完成等，对于要顺序开展多个试验的样品，甚至还需要清晰地标识哪些试验项目已经完成等信息。2、如果试验样品体积较小或试验环境十分恶劣，会导致样品标签或条形码无法粘贴到样品上或在试验过程中发生标签脱落丢失的情况，但这些样品无法有效地标识会导致产生混淆。解决方法针对如上的两个问题，推荐的解决方法如下：1、如果实验室的样品体积足够大，建议设计能够容纳较多信息的样品标签，标签上除了标注样品的编号和基本信息外，还可以留出空间让实验室检测操作人员能够在检测过程中实时地标注样品的状态，比如标注哪些检测项目已经完成。如果无法做到上述要求，建议建立每个样品的检测历史记录表，通过记录表的内容可以清楚地了解样品的状态，也就是将标签和记录表结合在一起做为样品的标识系统。2、如果样品体积太小或试验环境恶劣，无法有效进行标识时，建议建立样品分配表和样品的检测历史记录表来做为样品的标识系统，样品分配表是为了将样品的编号与样品对应而建立的记录表格，通常即使体积再小的样品在其生产时也会有相应的且唯1产品编号，将该产品编号与试验过程中的编号对应起来而建立的表格就是样品分配表，如果样品没有产品编号又体积特别小，那么可以有实验室人员在可能的空间上对样品进行灵活的唯1性标识，然后同样地将该标识和实验室检测过程的编号相对应建立分配表，同时结合上述介绍的样品的检测历史记录表来建立样品的标识系统，从而避免实物的混淆。为了使样品在接收、处理、保管、检测等各环节汇总，保持其完整性，防止不同样品和不同检测状态样品不发生混淆的现象，并保护实验室利益，检测实验室需加强对样品标识的管理。

培养细菌，势必会使用到培养基来让其滋长。因此，培养基的效能好坏，通常是利用细菌在培养基上生长的能力与状况来判定那是不是只要培养基上面能让细菌生长并被观察到，就代表此批培养基的效能是没有问题的呢？当然没有这么简单！在制药产业中，一般会依循药典的内容规范来进行检查。我们以「非无菌产品微生物限度检查」为例，当要检验样品中的总细菌数或霉菌数有多少时，自然需要使用到培养基。目前会用来检查的培养基则以细菌：胰酪大豆胨琼脂培养基(TSA)；霉菌：沙氏葡萄糖琼脂培养基(SDA)为主。顾名思义，当我们要确认TSA或SDA的效能时，就会以细菌或是霉菌来测试，让其生长在培养基上，确认可以生长且生长的量是符合标准的，就能达成培养基适用性检查。  但是，到底要用哪一种细菌或霉菌让其生长呢？以及到底要长出多少的菌量才算是符合标准呢？这些问题的答案，就让我们娓娓道来、一一解惑。首先，针对细菌生长的TSA，若要来看其效能是否达标，药典中规范使用的菌种为：金黄色葡萄球菌CMCC(B)26 003、铜绿假单胞菌CMCC(B)10 104以及枯草芽孢杆菌(CMCC(B)63 501；针对霉菌生长的SDA，使用菌种则为：白色念珠菌CMCC(F)98 001和黑曲霉CMCC(F)98 003。那准备好这些菌种后，究竟要使用多少的菌量让其在培养基上生长呢？药典中也有详细的说明，接种量必须不大于100 CFU。简单地来说，我们需要准备这五支菌种，而菌种的菌数亦须确认其不大于100 CFU。菌数部分，可以购买商品化的定量菌株，亦可以自行使用分光亮度计来调配菌液浓度，以获得不大于100 CFU的菌株。准备好试验菌株后，紧接着将菌株在培养基上接种，在适当的温度(30-35°C/20-25°C)和适当的天数(不超过3天/不超过5天)下，来看生长的菌数。而菌的数量必须与先前合格培养基的菌数相比，菌落数量需落在50-200%范围中，如此即可符合标准。简单举例来说，当我们欲测试的新一批培养基时，需知道前一批合格的培养基菌数表现，若前一批为40颗菌落，则代表此批测试的培养基，再接种菌液后，生长出来的菌落必须落在20至80颗的范围内，当落于此范围中，就能确立此批培养基的效能合格。培养基适用性的检查，看似容易，但其中需要注意的细节相当多。当能够完成培养基适用性的检查，代表在检验的环节中，通过了第一道关卡。正所谓万丈高楼平地起，再接下来面对的其他试验中，如计数方法适用性、培养基抑菌能力检查、培养基指示能力检查…等，必能够扎稳马步，一一克服且完成。

1.使用”保护柱”，能够延长色谱柱的使用寿命。简单的说，”保护柱”即是很短的色谱柱，填装和所使用液相色谱柱相同的填料。正确使用装在液相色谱柱前面的”保护柱”，可以阻拦一些容易损坏液相色谱柱的物质。而达到延长柱子寿命的效果。如果使用”保护柱”不当。会造成反效果。因为在保护柱使用过程中。如污染达到一定程度而没有及时更换，累积的杂物很可能会冲入色谱柱中，反而会造成色谱柱损坏。因此。使用”保护柱”时，最重要的是要知道什幺时候该换保护柱。该换的时候就必须要立即更换。     2.选择高品质的柱子，并注意使用方法；可以延长柱子的使用寿命。一般认为同一厂牌、同一型号的柱子之间的品质都相同，对品质管理很严格的厂家而言，这说法是成立的。但如果厂家品质管理不够严格，即使是同一批号的新柱子之间的品质也有差异。所以，选用柱子时必须选择管理严格的高品质柱子，我们知道，任何柱子使用过后都会产生变化。尤其如在强酸或强碱条件下使用，柱子更易产生变化。因此，应尽量选用pH适用范围大的柱子。在开发新分析方法时，许多专家建议不要使用旧柱子。因柱子一经使用。柱性会改变；如此一来，使用旧柱子开发出来的新分析方法，很可能在再使用同厂牌的新柱子分析时。发生无法达到预定效果的情况。总的说。开发新分析方法时要使用品质好的新柱子；并且一支柱子最-好使用在一种分析方法上；则柱子寿命可以延长。    3.定期冲洗柱子可以延长柱子使用寿命。我们知道柱子使用一段时间后总会有一些杂质累积在柱内。这些杂质不会随着流动相出来，自然会逐渐影响柱子的品质。这些杂质在后来的分析谱图上出现。而造成出现怪峰、基线不平等现象。简单的解决方法是用较强的流动相冲洗。最-好是在每次分析某一产品完成后冲洗。如果分析时使用缓冲剂时﹐最-好用水来取代缓冲剂。先使用有机和水的混合溶液为流动相冲洗缓冲剂。接着再用100%有机溶剂冲洗。如果不先用有机和水的混合溶液冲洗，而直接用100%有机溶剂冲洗的话，缓冲剂很可能会沉淀出来，而损坏柱子的品质。使用10-20倍柱体积的量来冲洗基本就足够了。专家建议最-好将100%有机溶剂冲洗的条件加在分析实验程序完毕地最后，如此一来每天在开机前都会用100%机溶剂冲洗。一般硅胶柱可以反冲洗处理﹐即是在将冲洗前将柱子倒反接后再冲洗。打算使用反冲洗处理前，最-好先参考柱子的保养说明书。所以要真正保护柱子，使柱子的寿命延长，最-好是使用”保护柱”和定期冲洗柱子

标准物质监控1.1 质控过程通常的做法是实验室直接用合适的有证标准物质或内部标准样品作为监控样品，定期或不定期将监控样品以比对样或密码样的形式，与样品检测以相同的流程和方法同时进行，检测室完成后上报检测结果给相关质量控制人员，也可由检测人员自行安排在样品检测时同时插入标准物质，验证检测结果的准确性。1.2 适用范围一般可用于：仪器状态的控制、样品检测过程的控制、实验室内部的仪器比对、人员比对、方法比对以及实验室间比对等。这种方法的特点是可靠性高，但成本高。人员比对2.1 质控过程由实验室内部的检测人员在合理的时间段内，对同一样品，使用同一方法，在相同的检测仪器上完成检测任务，比较检测结果的符合程度，判定检测人员操作能力的可比性和稳定性。实验室进行人员比对，比对项目尽可能检测环节复杂一些，尤其是手动操作步骤多一些。检测人员之间的操作要相互独立，避免相互之间存在干扰。通常情况下，实验室在监督频次上对新上岗人员的监督高于正常在岗人员，且在组织人员比对时最好始终以本实验室经验丰富和能力稳定的检测人员所报结果为参考值。2.2 适用范围实验室内部组织的人员比对，主要目的是评价检测人员是否具备上岗或换岗的能力和资格，因此，主要用于考核新进人员、新培训人员的检测技术能力和监督在岗人员的检测技术能力两个方面。方法比对3.1 质控过程方法比对是不同分析方法之间的比对试验，指同一检测人员对同一样品采用不同的检测方法，检测同一项目，比较测定结果的符合程度，判定其可比性，以验证方法的可靠性。方法比对的考核对象为检测方法，主要目的是评价不同检测方法的检测结果是否存在显着性差异。比对时，通常以标准方法所得检测结果作为参考值，用其他检测方法的检测结果与之进行对比，方法之间的检测结果差异应该符合评价要求，否则，即证明非标方法是不适用的，或者需要进一步修改、优化。3.2 适用范围方法比对主要用于考察不同的检测方法之间存在的系统误差，监控检测结果的有效性，其次也用于对实验室涉及的非标方法的确认。整体的检测方法一般包括样品前处理方法和仪器方法，只要前处理方法不同，不管仪器方法是否相同，都归类为方法比对。但是，如果不同的检测方法中样品的前处理方法相同，仅是检测仪器设备不同，一般将其归类为仪器比对。仪器比对4.1 质控过程仪器比对是指同一检测人员运用不同仪器设备（包括仪器种类相同或不同等），对相同的样品使用相同检测方法进行检测，比较测定结果的符合程度，判定仪器性能的可比性。仪器比对的考核对象为检测仪器，主要目的是评价不同检测仪器的性能差异（如灵敏度、精密度、抗干扰能力等）、测定结果的符合程度和存在的问题。所选择的检测项目和检测方法应该能够适合和充分体现参加比对的仪器的性能。4.2 适用范围仪器比对通常用于实验室对新增或维修后仪器设备的性能情况进行的核查控制，也可用于评估仪器设备之间的检测结果的差异程度。进行仪器比对，尤其要注意保持比对过程中除仪器之外其他所有环节条件的一致性，以确保结果差异对仪器性能的充分响应。留样复测5.1 质控过程留样复测是指在不同的时间（或合理的时间间隔内），再次对同一样品进行检测，通过比较前后两次测定结果的一致性来判断检测过程是否存在问题，验证检测数据的可靠性和稳定性。若2次检测结果符合评价要求，则说明实验室该项目的检测能力持续有效；若不符合，应分析原因，采取纠正措施，必要时追溯前期的检测结果。事实上，留样复测可以认为是一种特殊的实验室内部比对，即不同时间的比对。留样复测应注意所用样品的性能指标的稳定性，即应有充分的数据显示或经专家评估，表明留存的样品赋值稳定。5.2 适用范围留样复测作为内部质量控制手段，主要适用于：有一定水平检测数据的样品或阳性样品、待检测项目相对比较稳定的样品以及当需要对留存样品特性的监控、检测结果的再现性进行验证等。采取留样复测有利于监控该项目检测结果的持续稳定性及观察其发展趋势；也可促使检验人员认真对待每一次检验工作，从而提高自身素质和技术水平。但要注意到留样复测只能对检测结果的重复性进行控制，不能判断检测结果是否存在系统误差。空白测试6.1 质控过程空白测试又称空白试验，是在不加待测样品（特殊情况下可采用不含待测组分，但有与样品基本一致基体的空白样品代替）的情况下，用与测定待测样品相同的方法、步骤进行定量分析，获得分析结果的过程。空白试验测得的结果称为空白试验值，简称空白值。空白值一般反映测试系统的本底，包括测试仪器的噪声、试剂中的杂质、环境及操作过程中的沾污等因素对样品产生的综合影响，它直接关系到最终检测结果的准确性，可从样品的分析结果中扣除。通过这种扣除可以有效降低由于试剂不纯或试剂干扰等所造成的系统误差。6.2 适用范围实验室通过做空白测试，一方面可以有效评价并校正由试剂、实验用水、器皿以及环境因素带人的杂质所引起的误差；另一方面在保证对空白值进行有效监控的同时，也能够掌握不同分析方法和检测人员之间的差异情况。此外，做空白测试，还能够准确评估该检测方法的检出限和定量限等技术指标。重复测试7.1 质控过程重复测试即重复性试验，也称为平行样测试，指的是在重复性条件下进行的两次或多次测试。重复性条件指的是在同一实验室，由同一检测人员使用相同的设备，按相同的测试方法，在短时间内对同一被测对象相互独立进行检测的测试条件。7.2 适用范围重复测试可以广泛地用于实验室对样品制备均匀性、检测设备或仪器的稳定性、测试方法的精密度、检测人员的技术水平以及平行样间的分析间隔等进行监测评价。需要注意的是，随着待测组分含量水平的不同，检测过程中对测试精密度可能产生重要影响的因素会有很大不同。回收率试验8.1 质控过程回收率试验也称“加标回收率试验”，通常是将已知质量或浓度的被测物质添加到被测样品中作为测定对象，用给定的方法进行测定，所得的结果与已知质量或浓度进行比较，计算被测物质分析结果增量占添加的已知量的百分比等一系列操作。该计算的百分比即称该方法对该物质的“加标回收率”，简称“回收率”。通常情况下，回收率越接近100%，定量分析结果的准确度就越高，因此可以用回收率的大小来评价定量分析结果的准确度。8.2 适用范围回收率试验具有方法操作简单，成本低廉的特点，能综合反映多种因素引起的误差，在检测实验室日常质量控制中有十分重要的作用，主要适用范围包括：各类化学分析中，如各类产品和材料中低含量重金属、有机化合物等项目检测结果控制、化学检测方法的准确度、可靠性的验证、化学检测样品前处理或仪器测定的有效性等。校准曲线的核查9.1、过程概述校准曲线是用于描述待测物质浓度或量与检测仪器相应值或指示值之间的定量关系。通过使用标准溶液按照正常样品检测程序作简化或完全相同的分析处理，而绘制得到的校准曲线则相应称为标准曲线和工作曲线。为确保校准曲线始终具有良好的精密度和准确度，就需要采取相应的方法进行核查。对精密度的核查，通常在校准曲线上取低、中、高3个浓度点进行验证。对准确度的核查，通常采用加标回收率试验的方法进行控制。9.2、适用范围校准曲线法是实验室仪器分析中经常采用的方法，通常待测样品组分浓度波动较大，且样品批量较大。而在检测过程中采用的校准曲线的精密度和准确度会受到实验室的检测条件、检测仪器的响应性能、检测人员的操作水平等多种因素的影响。定期的核查一方面可以验证仪器的响应性能、检测人员的操作规范稳定程度等，另一方面也可以同时得到绘制曲线时所用标准溶液的稳定性核查信息。质量控制图10.1 质控过程为控制检测结果的精密度和准确度，通常需要在检测过程中，持续地使用监控样品进行检测控制。对积累的监控数据进行统计分析，通过计算平均值，极差，标准差等统计量，按照质量控制图的制作程序，确定中心线，上、下控制限，以及上、下辅助线和上、下警戒线，从而绘制出分析用控制图。通过分析用控制图，判断测量过程处于稳定或控制状态后，就可以将分析用控制图转换为控制用控制图，并将日常测定的控制数据描点上去，判断是否存在系统变异或趋势。10.2 适用范围质量控制图适用于如下范围：①当希望对过程输出的变化范围进行预测时；②当判断一个过程是否处于统计受控状态时；③当分析过程变异来源是随机性还是非随机性时；④当决定怎样完成一个质量改进项目时要防止特殊问题的出现，或对过程进行基础性的改变；⑤当希望控制当前过程，问题出现时能察觉并对其采取补救措施时。质量控制图无疑是质量控制活动中的一种重要的评价方法，但需要注意的是，这个方法的结论评价是依托于其他质控样品的检测数据而存在的，是通过对质控数据的统计分析而实现质量控制的目的。因此，相比其他质量控制方法而言，它更倾向于作为一种评价质量控制数据的工具，在这一点上它与其余的实验室内部质量控制方法还是有所区别的。

抗血清的制备　　有了质量好的抗原，还必须选择适当的免疫途径，才能产生质量好（特异性强和效价高）的抗体。　　（一）用于免疫的动物　　作免疫用的动物有哺乳类和禽类，主要为羊、马、家兔、猴、猪、豚鼠、鸡等，实验室常用者为家兔、山羊和豚鼠等。动物种类的选择主要根据抗原的生物学特性和所要获得抗血清数量，如一般制备抗r-免疫球蛋白抗血清，多用家兔和山羊，因动物反应良好，而且能够提供足够数量的血清，用于免疫的动物应适龄，健壮，无感染性疾患，最好为///雄性，此外还需十分注意动物的饲养，以消除动物的个体差异以及在免疫过程中死亡的影响。若用兔，最好用纯种新西兰兔，一组三只，兔的体重以2～3kg为宜。　　（二）免疫途径　　免疫途径有多种多样，如静脉内、腹腔内、肌肉内、皮内、皮下、淋巴结内注射等，一般常用皮下或背部多点皮内注射，每点注射0.1ml左右。途径的选择决定于抗原的生物学特性和理化特性，如激素、酶、毒素等生物学活性抗原，一般不宜采用静脉注射。　　（三）佐剂　　由于不同个体对同一抗原的反应性不同，而且不同抗原产生免疫反应的能力也有强有弱，因此常常在注射抗原的同时，加入能增强抗原的抗原性物质，以刺激机体产生较强的免疫反应，这种物质称为免疫佐剂。　　佐剂除了延长抗原在体内的存留时间，增加抗原刺激作用外，更主要的是，它能刺激网状内皮系统，使参与免疫反应的免疫活性细胞增多，促进T细胞与B细胞的相互作用，从而增强机体对抗原的细胞免疫和抗体的产生。　　常用的佐剂是福氏佐剂（Freund adjuvant）,其成分通常是羊毛脂1份、石腊油5份，羊毛脂与石腊油的比例，视需要可调整为1：2～9（V/V），这是不完全福氏佐剂，在每毫升不完全佐剂加入1～20mg卡介苗就成为完全佐剂。　　配制方法：按比例将羊毛脂与石蜡油置容器内，用超声波使之混匀，高压灭菌，置4℃下保存备用。免疫前取等容积完全或不完全佐剂与免疫原溶液混合，用振荡器混匀成乳状，也可以在免疫前取需要量佐剂置乳钵中研磨，均匀后再边磨边滴加入等容积抗原液（其中加卡介苗3～4mg/ml或不加），加完后再继续研磨成乳剂，滴于冰水上5～10min内完全不扩散为止。为避免损失抗原，亦可用一注射器装抗原液，另一注射器装佐剂，二者以聚乙烯塑料管连接，然后二者来回反复抽吸，约数十分钟后即能完全乳化。检查合格后即以其中一注射器作注射用。　　（四）免疫方法　　抗原剂量，首次剂量为300～500μg，加强免疫的剂量约为首次剂量为1/4左右。每2～3周加强免疫一次。加强免疫时用不完全佐剂，首次免疫时皮下注射百日咳疫苗0.5ml，加强免疫时不必注射百日咳疫苗。　　在第2次加强免疫后2周，从耳缘静脉取2～3ml血，制备血清，检测抗体效价（见后）。如未达到预期效价，需再进行加强免疫，直到满意时为止（图2-3）。当抗体效价达到预期水平时，即可放血制备抗血清。

英文名称microbial breeding ， 就是指培育优良微生物的生物学技术。其方法通常为自然选育和人工选育两类，可单独使用，也可交叉进行。1、DNA Shuffling技术随着PCR技术的发展和应用，1994年美国的stemmer提出了一个全新的人工分子进化技术——DNA Shuffling（又称洗牌技术），该技术能模拟生物在数百年间发生的分子进化过程，并可在短的实验循环中定向筛选出特定基因编码的酶蛋白活性提高几百倍甚至上万倍的功能性突变基因。其基本原理是将来源不同但功能相同的一组同源基因，用DNA核酸酶I进行消化 产生随机小片段，由这些小片段组成一个文库，使之互为引物和模板，进行PCR扩增，当一个基因拷贝片段作为另一个基因拷贝的引物时，引起模板转换，重组因而发生，导入体内后，选择正突变体作新一轮的体外重组。一般通过2-3次循环，课获得产物大幅度提高的重组突变体。2、自然选育编辑对自然界中的微生物，在未经人工诱变或杂交处理的情况下进行分离和纯化（见微生物的分离和纯化），然后进行纯培养和测定（见微生物测定法），择优选取微生物的菌种。这种方法简单易行，但获得优良菌种的几率小，一般难以满足生产的需要。3、人工选育编辑分诱变育种和杂交育种两种。3.1 诱变育种以诱发基因突变为手段的微生物育种技术。1927年，H.J. 马勒发现X射线有增加突变率的效果；1944年，C.奥尔巴克首次发现氮-芥-子气的诱变效应；随后，人们陆续发现许多物理的（如紫外线、γ射线、快中子等）和化学的诱变因素。化学诱变因素分为3种：①诱变剂与一个或多个核酸碱基发生化学变化，使DNA复制时碱基置换而引起变异，如羟胺亚硝酸、硫酸2乙酯、甲基-磺酸乙酯、硝基-胍、亚硝基甲基脲等；②诱变剂是天然碱基的结构类似物，在复制时参入DNA分子中引起变异，如5-溴尿嘧啶、5-氨基尿嘧啶、8-氮鸟嘌呤和2-氨基嘌呤等；③诱变剂在DNA分子上减少或增加1～2个碱基，使碱基突变点以下全部遗传密码的转录和翻译发生错误，从而导致码组移动突变体的出现，如吖啶类物质和一些氮-芥衍生物（ICR）等。诱变育种操作简便，突变率高，突变谱广，它不仅能提高产量，改进质量，还可扩大产品品种和简化工艺条件。如1943年从自然界分离到的青霉素产生菌的效价只有20单位/毫升，经过一系列的诱变育种后，效价已达40000单位/毫升；金霉素产生菌经诱变后，发酵液中又积累了去甲基金霉素；谷氨酸棒杆菌1299经紫外线诱变后，有的能产赖氨酸，有的能产缬氨酸，增加了产品的种类；土霉素产生菌经诱变后，选到了能减少泡沫的突变菌株，从而提高了发酵罐的利用率。诱变育种的不足是缺乏定向性。3.2 杂交育种不同基因型的品系或种属间，通过交配或体细胞融合等手段形成杂-种，或者是通过转化和转导形成重组体，再从这些杂-种或重组体或是它们的后代中筛选优良菌种。通过这种方法可以分离到具有新的基因组合的重组体，也可以选出由于具有杂-种优势而生长旺盛、生物量多、适应性强以及某些酶活性提高的新品系。杂交育种的方式因实验菌株的生殖方式不同而异，如有性杂交、准性重组、原生质体融合、转化、转导、杂-种质粒的转化等；但是，选择亲株、分离群体后代的培养、择优去劣和杂-种遗传分析的过程基本是相同的。杂交法一般指有交配反应的菌株进行交配或接合而形成杂-种。这种方法适用范围很广，在酒类、面包、药用和饲料酵母的育种，链霉菌和青霉菌抗生素产量的提高，曲霉的酶活性增强等方面均已获得成功。体细胞融合是在不具性反应的品系或种属间细胞融合和染色体重组，先用酶溶解细胞壁，再用氯化钙-聚乙二醇处理原生质体，促使融合，获得杂-种。此法在工业微生物的菌种改良中有积极作用。转化和转导首先应用于细菌，现已广泛用于链霉菌和酵母菌等。随着重组DNA技术的发展，重组质粒的构建和转化系统的确立，已可将目的基因转移到受体细胞内，得到能产生具有重要经济价值的生物活性物质（如疫苗、酶等）的株系。微生物与酿造工业、食品工业、生物制品工业等的关系非常密切，其菌株的优良与否直接关系到多种工业产品的好坏，甚至影响人们的日常生活质量，所以培育优质、高产的微生物菌株十分必要。微生物育种的目的就是要把生物合成的代谢途径朝人们所希望的方向加以引导，或者促使细胞内发生基因的重新组合优化遗传性状，人为地使某些代谢产物过量积累，获得所需要的高产、优质和低耗的菌种。作为途径之一的诱变育种一直被广泛应用。目前，国内微生物育种界主要采用的仍是常规的物理及化学因子等诱变方法。此外，原生质体诱变技术已广泛地应用于酶制剂、抗生素、氨基酸、维生素等的菌种选育中，并且取得了许多有重大应用意义的成果。4、诱变育种4.1物理诱变4.1.1紫外照射紫外线照射是常用的物理诱变方法之一，是诱发微生物突变的一种非常有用的工具。DNA 和RNA 的嘌呤和嘧啶最大的吸收峰在260nm，因此在260nm 的紫外辐射是最-有效的致死剂。紫外辐射的作用已有多种解释，但比较确定的作用是使DNA 分子形成嘧啶二聚体[1]。二聚体的形成会阻碍碱基间正常配对，所以可能导致突变甚至死亡[2]。紫外照射诱变操作简单，经济实惠，一般实验室条件都可以达到，且出现正突变的几率较高，酵母菌株的诱变大多采用这种方法。4.1.2电离辐射γ- 射线是电离生物学上应用最-广泛的电离射线之一，具有很高的能量，能产生电离作用,可直接或间接地改变DNA 结构。其直接效应是可以氧化脱氧核糖的碱基，或者脱氧核糖的化学键和糖- 磷酸相连接的化学键。其间接效应是能使水或有机分子产生自由基，这些自由基可以与细胞中的溶质分子发生化学变化，导致DNA 分缺失和损伤。除γ- 射线外的电离辐射还有X- 射线、β- 射线和快中子等。电离辐射有一定的局限性，操作要求较高，且有一定的危险性，通常用于不能使用其他诱变剂的诱变育种过程。4.1.3离子注入离子注入是20 世纪80 年代初兴起的一项高新技术，主要用于金属材料表面的改性。1986 年以来逐渐用于农作物育种，近年来在微生物育种中逐渐引入该技术。离子注入时，生物分子吸收能量，并且引起复杂的物理和化学上的变化，这些变化的中间体是各类活性自由基。这些自由基，可以引起其它正常生物分子的损伤，可使细胞中的染色体突变，DNA 链断裂，也可使质粒DNA 造成断裂。由于离子注入射程具有可控性，随着微束技术和精-确定位技术的发展，定位诱变将成为可能。离子注入法进行微生物诱变育种，一般实验室条件难以达到，目前应用相对较少。4.1.4 激光激光是一种光量子流，又称光微粒。激光辐射可以通过产生光、热、压力和电磁场效应的综合应用，直接或间接地影响有机体，引起细胞染色体畸变效应、酶的激活或钝化，以及细胞分裂和细胞代谢活动的改变。光量子对细胞内含物中的任何物质一旦发生作用，都可能导致生物有机体在细胞学和遗传学特性上发生变异。不同种类的激光辐射生物有机体，所表现出的细胞学和遗传学变化也不同。激光作为一种育种方法，具有操作简单、使用安全等优点，近年来应用于微生物育种中取得不少进展。4.1.5 微波微波辐射属于一种低能电磁辐射，具有较强生物效应的频率范围在300MHz~300GHz，对生物体具有热效应和非热效应。其热效应是指它能引起生物体局部温度上升。从而引起生理生化反应；非热效应指在微波作用下，生物体会产生非温度关联的各种生理生化反应。在这两种效应的综合作用下，生物体会产生一系列突变效应。因而,微波也被用于多个领域的诱变育种，如农作物育种、禽-兽育种和工业微生物育种，并取得了一定成果。4.1.6 航天育种航天育种，也称空间诱变育种，是利用高空气球、返回式卫星、飞船等航天器将作物种子、组织、器官或生命个体搭载到宇宙空间，利用宇宙空间特殊的环境使生物基因产生变异，再返回地面进行选育，培育新品种、新材料的作物育种新技术。空间环境因素主要有微重力，空间辐射，以及其它诱变因素如交变磁场，超真空环境等，这些因素交互作用导致生物系统遗传物的损伤，使生物发生诸如突变、染色体畸变、细胞失活、发育异常等。航天育种较其它育种方法特殊，是航天技术与微生物育种技术的有机结合，技术含量高，成本高，个体研究者或一般研究单位都难以实现，只能与航天技术相结合，由国家来完成。4.1.7 常压室温等离子体诱变育种常压低温等离子体（Atmospheric and Room Temperature Plasma）简称为ARTP，指能够在大气压下产生温度在25-40 °C之间的、具有高活性粒子（包括处于激发态的氦原子、氧原子、氮原子、OH自由基等）浓度的等离子体射流。ARTP技术作为一种新型的物理方法，在微生物诱变育种领域有着广阔的应用前景。等离子体中适当剂量的活性粒子作用于微生物，能够使微生物细胞壁/膜的结构及通透性改变，并引起基因损伤，菌株出现遗传物质损伤后，微生物启动SOS修复机制，其诱导产生DNA聚合酶Ⅳ和V，它们不具有3ˊ核酸外切酶校正功能，于是在DNA链的损伤部位即使出现不配对碱基，复制仍能继续前进。在此情况下允许错配可增加存活的机会。ARTP对遗传物质造成的损伤，多样性较高；又SOS诱导修复本身为容错性修复，因此，ARTP多样性的损伤将可能在修复过程中包容于DNA链中，在微生物进行复制修复时，其可能带来多样性的错配可能。ARTP应用于微生物突变育种，成本低、操作方便，没有很多物理诱变设备（如离子束注入等）所需的离子或电子加速、真空和制冷等附属设备；ARTP对遗传物质的损伤机制多样，具有较高的正突变率，突变性能多样，对于真菌、细菌、藻类等都有效果；ARTP对环境无污染，保证操作者的人身安全，无论用何种气体放电，其均无有害气体产生。5、化学诱变5.1.1 烷化剂烷化剂能与一个或几个核酸碱基反应，引起DNA 复制时碱基配对的转换而发生遗传变异，常用的烷化剂有甲基-磺酸乙酯、亚硝基-胍、乙-烯亚胺、硫酸2乙酯等。甲基-磺酸乙酯（ethylmethane sulphonate,EMS) 是最-常用的烷化剂，诱变率很高。它诱导的突变株大多数是点突变，该物质具有强烈致癌性和挥发性，可用5%硫代硫酸钠作为终止剂和解毒剂。N- 甲基- N'- 硝基- N- 亚硝基-胍（NTG) 是一种超诱变剂，应用广泛，但有一定毒性，操作时应该注意。在碱性条件下，NTG 会形成重氮-甲烷（CH2N2），它是引起致死和突变的主要原因。它的效应很可能是CH2N2 对DNA 的烷化作用引起的。硫酸2乙酯（DMS) 也很常用，但由于毒性太强，目前很少使用。乙-烯亚胺，生产的较少，很难买到。使用浓度0.0001%~0.1%，高度致癌性，使用时需要使用缓冲液配置。5.1.2 碱基类似物碱基类似物分子结构类似天然碱基，可以掺入到DNA 分子中导致DNA 复制时产生错配，mRNA 转录紊乱，功能蛋白重组，表型改变。该类物质毒性相对较小，但负诱变率很高，往往不易得到好的突变体。主要有5- 氟尿嘧啶（5- FU) 、5- 溴尿嘧啶（5- BU) 、6- 氯嘌呤等。程世清等[25]用5- BU 对产色素菌（分枝杆菌T17- 2- 39） 细胞进行诱变，生物量平均提高22.5%.5.1.3 无机化合物诱变效果一般，危险性较小。常用的有氯化锂，白色结晶，使用时配成0.1%~0.5%的溶液，或者可以直接加到诱变固体培养基中，作用时间为30min～2d。亚硝酸易分解，所以现配现用。常用亚硝-酸钠和盐酸制取，将亚硝-酸钠配成0.01~0.1mol/L 的浓度，使用时加入等浓度等体积的盐酸即可。5.1.4 其他盐酸羟胺，一种还原剂，作用于C 上，使G- C 变为A- T。也较常用,使用浓度为0.1%～0.5%，作用时间60min～2h。此外，诱变时将两种或多种诱变因子复合使用，或者重复使用同一种诱变因子，效果更佳。顾正华等[7]以谷氨酸棒杆菌ATCC- 13761 为出发菌株，经DMS 和NTG 多次诱变处理，获得一株L- 组氨酸产生菌。5.2 诱变剂5.2.1 诱变剂的选择在选择诱变剂时，需要注意诱变剂的专一性，即某一诱变剂或诱变处理优先使基因组的某些部分发生突变而别的部分即使有也很少发生突变。对诱变剂专一性的分子基础不十分了解万尽管有关的修复途径必定对此有影响，但它们的关系并不那么简单，其它各种因素，包括诱变处理的环境条件也能影响突变类型。工业遗传学家很难正确地预言改良某一菌种时需要何种类型的分子水平的突变。因此，为了产生类型尽可能多的突变体，最-适当的方法是采用几种互补类型的诱变处理。远紫外无疑是所有诱变剂中最-为合适的，似乎可以诱导所有已知的损伤类型。采取有效、安全的预防方法也很容易。在化学诱变剂中，液体试剂比粉末试剂更易进行安全操作。的另一个不利因素是它有产生紧密连锁的突变丛的趋势，尽管这种效应在某些体系中能成为有利条件。最后，必须认识到可能某些特异菌系用某些诱变剂是不能被诱变的。当然这一点通过测定易检出的突变体，如抗药性突变体或原养型回复突变体的诱变动力学可以相当容易地得到验证。5.2.2 诱变剂的剂量从随机筛选的最-佳效果看，诱变剂的最适剂量就是在用于筛选的存活群体中得到最-高比例的所需要的突变体，因为这会使在测定效价的阶段更省力。因此在菌株改良以前，为了决定所用诱变剂的最适剂量，并为突变性的增强技术打下基础，聪明的做法通常是测定不同诱变剂处理不同菌种时的突变动力学。用高单位突变本身来测定最适剂量有时是不可能的，因为这种突变的检测很困难。但如使用容易检出的标记如耐药标记，只要估计到方法的局限性，还是可以提供一些有价值的资料的。6、应用6.1 在酶制剂菌种选育中的应用酶制剂是活的有机体产生的有催化活性的蛋白质，是所有新陈代谢过程必不可少的要素。应用原生质体诱变技术对酶制剂的生产菌株进行诱变，已经获得了许多高产菌株。胡杰等对沪酿（Aspergillus oryzae) 31042米曲霉的原生质体进行紫外线-氯化锂、N-甲基- N′-硝基-N - 亚硝基-胍（N - methyle - N′- nitro - N -nitrosogunidinc,NTG）复合诱变，筛选到8 株高产中性蛋白酶突变株群，其中最-高产酶活力为出发菌株的1162倍，为以后的细胞融合、基因组改组等提供了优良的候选文库。6.2 抗生素高产菌种选育中的应用抗生素是微生物细胞的次级代谢产物，目前主要采用微生物发酵法进行生物合成。由于生产菌种产量的高低受多步代谢调控的制约，高产菌株的选育也很困难。原生质体诱变作为一种诱变技术，在抗生素的高产菌种选育中已有着广泛的应用。朱林东等通过紫外线诱变始旋链霉菌（S treptom ycespristinaespiralis）的原生质体，得到了产普那霉素为1159g/L的高产突变株，比出发菌株提高10113%。6.3 在氨基酸、生产溶剂及有机酸菌种选育中的应用氨基酸是生物功能大分子蛋白质的基本组成单位，在食品、饲料、医药、化学工业、农业等行业中应用广泛，各国都在大力发展氨基酸生产。发酵法已成为氨基酸生产的主要方法。因此选育高产菌株是氨基酸工业发展的重要方向。生产溶剂和有机酸是微生物的初级代谢产物，原生质体诱变技术在生产溶剂和有机酸生产菌种选育中也取得了成效。6.4 生素菌种选育中的应用维生素是维持人和动物生命活动必需的、但不能自身合成的一类有机物质，在生长、代谢、发育过程中发挥着重要的作用。韩建荣等用激光处理青霉（Penicillium sp) PT95 的原生质体，选育到一株菌核生物量和类胡萝卜素含量均有显著提高的突变株L05。该突变株的菌核生产量提高98.6%，菌核中的类胡萝卜素含量提高28.3%，类胡萝卜素产率的增加幅度达到154.0%。6.5 虫菌种选育中的应用苏云金杆菌（B acillus thuringiensis）是从自然界中筛选出来的一大类细菌型微生物杀虫剂，多应用于农林害虫的防治中。王丽红等 对苏云金杆菌NU- 2的原生质体进行紫外线-氯化锂复合诱变，筛选到的突变株发酵周期从44h缩短到40.3h，晶体蛋白含量提高10.03%。7、展望未来编辑近年来，随着新的诱变源的出现，原生质体诱变技术的应用也会有新的进展。离子束作为一种新的诱变源，有其特有的作用机理，使得离子束诱变具有诱变谱广、变异幅度大、突变率高等优点，其应用也取得了很多重要的成果，特别是运用离子注入选育Vc菌株的成功，为中国的VC 行业增添了活力。离子束注入也存在一些先天性的缺点：首先为了获得高能量的离子束，操作必须在在真空腔中完成，而抽真空的过程对微生物有很大的破坏作用；高能离子束的温度很高，需要制冷设备进行制冷，但制冷后的离子束温度也常达到600 K以上，同样会对微生物的生存造成很大的危害；真空设备和制冷设备以及离子束发生设备等一系列设备均很庞大，不仅成本高，而且既不便于操作，也不便于运输。上述缺点，在一定程度上限制了离子束注入的实际应用。航天搭载的微生物菌种，能借助微重力、空间辐射、超真空等综合空间环境因素的转换，在较短时间里创造目前其它育种方法难以获得的罕见基因突变，以此来进行微生物育种是空间技术育种的一个重要的应用领域，利用空间技术对某些抗生素的产量提高及酶制剂研究曾有些可喜的结果。但是由于航天搭载成本高且空间有限，因此应用受到限制。常压室温等离子（ARTP）诱变技术与其他诱变育种方法相比，呈现出突变率高、突变株多样、可操作性强、方便快捷、安全性高等特点，显示出ARTP在微生物诱变育种领域中良好的应用前景。目前，ARTP已成功用于真菌、放线菌、细菌、酵母、微藻等多种微生物的诱变，取得了良好的突变效果。鉴于ARTP的优势，未来将在微生物诱变育种方面得到越来越广泛地应用。8、随着遗传学和分子生物学领域的飞速发展，许多新型复杂的技术被应用于菌种选育，如原生质体融合育种技术和基因工程育种技术等，但是诱变育种技术仍是提供菌株生产能力的重要有效手段。它获得的正突变率相对较高，可以得到多种优良突变体和新的有益基因类型。另一方面，诱变育种存在一定的盲目性和随机性,在实际应用中，研究者应根据出发菌株及实验室条件等具体情况来选择合适的诱变方法。本实验室将物理因子和化学因子结合起来对多种酵母菌株进行复合诱变，均得到了理想菌株。此外，我们正在尝试反复采用几种诱变因子进行多次诱变，以期得到更为理想的菌株。

化学试剂在贮存过程中是否会发生变质，取决于内外两个方面的因素，内因是试剂本身化学结构所决定的理化性质；外因则是试剂所处的环境条件。要做到合理保管，一要了解试剂结构与性质间关系，二要创造适应试剂贮存的外部环境。化学试剂变质的原因环境主要是指贮存的温度、光照和介质。介质一般是指空气和混有的杂质。贮存室里除空气中含有的氧、二氧化碳和水蒸气以外，还往往含有存放的各种挥发性试剂扩散到空气中的蒸气，常见的有氯化氢、硝酸、硫化氢、二氧化硫、溴、dian、乙烯、甲醛等蒸气；另外还有飘混在空气中的尘埃，其中有无机物也有有机物及各种微生物。化学试剂在一定的温度、光照、介质条件下会逐渐变化以致变质，该过程有物理变化，亦有化学变化。前者使化学试剂产生损耗，后者则能使试剂完全变质失效。引发和促使化学试剂发生变化的原因，大致可归纳如下。a. 挥发挥发是挥发性试剂造成试剂损耗、浓度改变、规格下降的最常见的原因。挥发性试剂的一般特点是：分子量较小、沸点较低。常见的无机试剂有：浓盐酸、浓硝酸、发烟硫酸等，有机试剂则有碳原子数较少的液态物质，如：甲醇、乙醇、石油醚、汽油等。b. 升华具有升华性质的一类试剂一般是升华热较少的分子晶体。实验室里一般有室温下升华的试剂(如碘萘等)和受热条件下升华的试剂(如硫与氯化汞)两种。这类试剂的升华主要造成损耗和污染空气。c. 潮解和稀释能发生潮解的化学试剂为数不多，它们大部分是易溶性化合物，一般阴离子半径远小于阳离子半径，也有阴阳离子半径相近而阳离子所带电荷较多。此类试剂吸收水分在表面形成饱和溶液后，若产生的水蒸气气压小于空气中的水蒸气分压，潮解将继续进行，直至全部形成溶液。如：氢氧化钠、碱石灰等，有机物中易潮的有醋酸钠、醋酸铵等。稀释是指试剂溶液吸收空气中的水分导致浓度下降变稀的现象。发生原因与潮解一样，是外界水蒸气分压大于试剂的水蒸气分压所致。易发生稀释现象的常见试剂有浓硫酸、正磷酸、乙二醇等。d.风化风化的原因和潮解相反，是结晶水合物的水蒸气分压高于空气中水蒸气分压的缘故。空气越干燥，风化速度越快。实验室中常见的易风化剂 有：Na2CO3?10H2O、Na2SO4?7H2O、CuSO4?5H2O、MgSO4?7H2O、ZnSO4?7H2O等。发生风化虽未波及试剂的化学性质，但使试剂外观改变，质量减少。e. 浓缩和析晶浓缩和析晶产生的原因是在环境干燥的条件下，试剂溶液的水蒸气压高于外界空气中水蒸气压，造成溶液水分的蒸发而浓缩、析晶，各种固体溶质的试剂一般均有此类现象，特别是一些浓度较大的溶液，浓缩和析晶虽对瓶中试剂性质影响不大，但也会改变其浓度、规格和外观。对某些溶点较低的有机物，在外界温度下降较大的情况下，也会发生析晶现象，比较明显的例子是冰醋酸。f. 水解容易水解的盐类试剂大都具有共价键，凡是强酸和弱碱和弱酸和弱碱所生成的盐，遇水都会发生不同程度的水解。实验室中一些金属元素的卤化物很容易水解，如：TiCl4、AlCl3、FeCl3、SnCl2, 等，它们是带电荷高、半径小的阳离子化合物或是非惰气型的阳离子化合物。此类试剂可因易吸水水解而变质，易水解的有机物是含有酰基的化合物，如：酯、酰卤等物质。g. 分解分解反应也是引发和促进试剂损耗和变质的原因。试剂的分解速度通常和环境温度密切相关。温度高分解速度加快，通常易分解的二元化合物其化学键键能较低。键能越低，越易分解，例如：碘化合物就比溴化物更易分解。有的分解反应还和试剂的含水量有关，如：硫酸氢铵，含水量越大，温度越高分解速度也越快。而含氧酸盐，如：硝酸盐、高锰酸盐则要在受热时才发生分解。h. 氧化和还原通常易被氧化的是标准电极电位低，具有还原性的试剂，它的名称中常常带有“低”或“亚”字。还有部分活泼金属和非金属单质，过氧化物及某些有机试剂，常见的有硫酸亚铁、硫酸亚铁铵、亚硫酸、无水亚硫酸钠、钠、钾、钙、锌粉、还原铁粉、乙醛等。还原性越强的试剂越易因氧化而变质。使其氧化的原因是空气中的氧和具有氧化性的杂质所为。标准电极电位较高的试剂，在以固态形式存在时，通常在空气中比较稳定，如：高锰酸钾、重铬酸钾等。但以溶液存在时就易和空气中的一些还原性杂质，如H2S，SO2等作用而变质，如：KMnO4，Na2S2SO4，K3Fe(CN)6等溶液。i. 非氧化——还原反应有些试剂的变质并非一定要引起元素价态的变化，即发生非氧化——还原反应也能使其失效。实验室中最常见的实例，如：生石灰因吸收水分变成熟石灰，进一步吸收二氧化碳而失效；氢氧化钠和氢氧化钾固体也因吸收二氧化碳而带有杂质，若长期暴露在空气中则完全转化成碳酸盐；此外氧化镁、氧化钡、氢氧化钡也应防止它们和空气中二氧化碳反应。J. 聚合和缩合分子结构中含有不饱和双键或叁键的有机物质容易发生聚合，如：甲醛溶液常会聚合生成白色的三聚甲醛，氰化钾试剂也易聚合。有电荷高、半径小的中心离子形成的含氧酸盐溶液则能因缩合而析出多酸盐沉淀，如：钼酸铵溶液  能缩合析出四钼酸铵沉淀，三聚甲醛经加热处理  尚可重新释放出甲醛气体，但有些试剂，一旦发生聚合或缩合反应，往往是不可逆的，从而造成变质失效。k. 光化学反应光作为一种能量也能使某些试剂反应而变质。光能引发分解反应导致银盐分解就是实例。光也能引发氧化反应，如：苯甲醛在光照下，易被空气氧化成苯甲酸，苯胺则能从无色变成棕色。此外，碘化汞、邻苯三酚、氯仿，硫酸汞、亚铁氰化钾等也易发生光化学反应。l. 霉变所谓霉变则指在化学试剂中霉菌滋生繁殖的现象。在空气中尘埃里含有无数菌类微生物，在一定温度条件下就能繁衍。实验室中的碳水化合物，酯类、蛋白质类试剂，含有氮、硫、磷的有机试剂正是菌类繁衍的良好营养物质和温床。上述试剂只要密闭不严与空气有所接触皆可发生霉变。化学试剂因上述原因发生各种变化，通常借助颜色、形态、气味、数量增减均可察觉，而有的变化则需用实验方法方可判别，如：无水酒精是否已含有水分，只能用专门的试剂标准和检验方法加以测定才能确定。因此，科学贮存各类试剂乃是一种用心细致的工作，其中大有学问和文章可作。如何预防、缓解化学试剂变质？为了保证化学教学、科研和化工生产的正常开展，降低试剂损耗，缓解试剂的变质，通常可采取以下方法与措施：a. 密封这是最普遍通用的方法。试剂瓶的材料和密封程度应根据试剂性质而定。如：强腐蚀的“三酸”和液溴，可用带磨口玻璃的试剂瓶，或是有塑料衬垫的螺旋盖的玻璃瓶，氢氟酸则应密封贮藏在银制或塑料制容器内，等等。密封适用于易挥发、升华、潮解、稀释、风化、水解和氧化还原、霉变的所有化学试剂对于极易  分解产生气体的试剂，一般不完全密封，要适当留有余地，否则可能使容器破裂。除了一般密封外，可再加蜡封，或用自制硝罗酊封口，如：三氯化铝、五氧化二磷等。b.隔离能和空气、水作用的试剂，如：很活泼的金属和非金属应隔离存放在对试剂相对而言稳定的液体或惰气之中，钾、钠、钙浸没在机油中，黄磷则浸没在水中贮放。这种隔离方法也称液封法，前者叫油封，后者叫水封。水封存也可使某些容易挥发的试剂减少损耗。如：在装有液态溴、二硫化碳的试剂中加一薄层水，就能大大减少挥发损失和空气污染。实验室中无机、有机试剂种类繁多，性质各异，应注意合理分类存放。有机物、无机物分开，普通药品和危险的分开，氧化剂和易燃物、还原剂分解、易挥发性酸和碱分开。做到这几个分开，一可避免药品间的不良影响，二则即使有意外事故发生，也能免除药品的相互作用，而产生更大的隐患。c. 避光通常采用遮光性能较好的深棕色试剂瓶。将试剂放在暗处或遮光的专用试剂柜中。也可用照相纸的黑色厚纸包裹试剂瓶，如：浓硝酸、碘化钾、碘化钠、氯化汞的贮存就是如此d. 低温普通挥发性试剂常放置在阴冷处，如：浓硝酸、浓盐酸、氨-水等。某些特殊的生化试剂则要贮放在水箱或冰箱之中，如：酶试剂等。e. 通风尽管装化学试剂的容器一般都处于密封状态，但也难免有跑、冒、漏、泄发生，在夏季高温天气，更易形成爆炸性混合气体，因此，贮藏室必须通风良好，应安装专用排风扇，并经常开启，使空气流通。f. 适时这是根据某些试剂的特性，特别是一些极易变质失效的试剂应采取适当措施，应做到适时配制、适时使用和及时处理。如：极易氧化的氢硫酸溶液、氯水、溴水、碘水最好适时制备及时使用；做银镜反应的硝酸银溶液、氨水、乙醛溶液配好后，应及时使用才不致影响效果；硫酸亚铁溶液配好后应加些还原铁粉才能使其不被氧化；淀粉、蔗糖、蛋白质的溶液在使用后应及时清洗试剂瓶，以防霉变。上述诸种试剂在配制时除应注意适时外，配制数量也应根据需要而定，以免过剩造成浪费。

标准物质证书的内容其实非常多，要详细看懂标准物质证书，也不是太容易，大致来说包括下面17个方面的内容（有时候标准物质证书本身内容也不完全）。1 定值机构的名称、地质该名称（常在证书上端以显着的字体写出）应当是对证书提供的信息负责的团体或组织的名称，如定值机构。除名称之外，还包括通讯地址、电话和传真号码，如果可能的话，也包括电子邮件地址。2 文件（证书）的标题应当有清晰明显的标题，例如，分析证书或测量证书。出具临时证书的偶然行为会使得同一批次标准物质/标准样品有一个以上的证书，而可能引起混乱，因此不鼓励。3 标准物质/标准样品的名称标准物质/标准样品的名称应当尽可能详细地描述样品的类型，以便与相似的标准物质/标准样品相区分。因此岩石或矿石的名称后面加上产地名称或组成特性可以赋予地质标准物质/标准样品更多的个性特征，如“正长岩（弗拉波瓦）”或“霞石正长岩”。对于天然基体中污染物的痕量分析，阐述基体的特性是重要的，如果有类似标准物质/标准样品的话，应当给出玷污的水平，例如，“全脂奶粉中黄曲霉M1(中等水平)”。（在给运输商和海关部门的文件中不必详细描述，因为有毒污染物的名称对于从速处理可能引用不必要的麻烦。）对于冶金标准物质/标准样品，应当指出主要元素的含量，例如，6A1-4V钛合金。4 标准物质/标准样品的编号与批号每个标准物质/标准样品应当有惟一编号，以区别于由相同的或不同的生产者生产的标准物质/标准样品，例如，BCRCRM186,LGC7016,NISTSRM41。另外，应当给出标准物质/标准样品的批号，即使是某一特定标准物质/标准样品的第一批。这是为了避免实验室在同时使用不同批次的标准物质/标准样品时引起混乱。一些生产者将标准物质/标准样品的批号与编号结合在一起，例如，NISTSRM41c。5 对有证标准物质/标注样品的描述实际上，对标准物质/标准样品的一般描述相当于对其名称的详细解释。虽然在多数情况下，材料的来源与它的用途不相关，但是，对于化学成分标准物质/标准样品而言，无论它是由独立的组成制备（例如，合金）还是来自于天然资源（例如，岩石、水或动植物产品），基体成分尤其是可能对分析过程产生干扰的成分的存在与否，对选择适当的分析方法时非常重要。即使不披露来源，也应当给出标准物质/标准样品的大致组成。定值部门应当努力避免这种情况：即由于未公布材料来源信息，而导致在确认用于同批材料的分析方法时，使用了来源于该批材料的CRM。标准物质/标准样品物理性状的描述，例如，样品大小、颗粒大小、金属圆柱体或圆盘的尺寸、标准物质/标准样品的容器的性质也应当给出。也应当说明稳定剂或保护剂的存在（例如，置于乙醇水溶液中的氯化汞）。同一种标准物质/标准样品也可能有不同的形状和尺寸，也应当给出这方面的信息。6 预期用途只要定值特性不仅仅与某个特别的分析或测量程序相联系（例如，经过规定过滤程序后的矿物质中的元素分析或采用仔细规定的方法测量闪点），生产者应当尽可能清楚地阐明所发行的标准物质/标准样品的主要目的，但这种陈述并不意图限制标准物质/标准样品在其他方面的使用。证书或在定值报告中提供的或以其他方式提供的附加信息，要给使用者提供足够的信息，以便使用者可以判断的CRM预期应用是否合理。预期用途的实例如下：——用于复现国际温标固定温度点（ITS-90），因而也可用于校准温度测量装备；——用于测定矿石样品中贵金属含量的仪器的校准；——用于测定测量天然基体中污染物含量的分析方法；——作为商业交易中的仲裁样品；——用于制备实验室常规分析的“工作标准样品”。7 正确使用标准物质/标准样品的说明标准物质/标准样品必须在证书规定的条件下使用。例如：若干燥处理，应当给出准确条件，如，105℃下2个小时。容器有时也需要在规定条件下打开。例如，存储在低于环境温度的标准物质/标准样品，在容器打开前，应当加热到实验室温度，以避免水蒸气凝结引起污染；储存在惰性气体中的标准物质/标准样品，标准物质/标准样品只应当在含有相似惰性气体的手套箱中打开。在这种情况下，应当给出适当的警示。除非在证书中有规定，否则标准物质/标准样品不应再进行诸如研磨之类的粉碎处理，特别是对于痕量元素标准物质/标准样品，应当给出警告不能使用任何含有这些元素的设备。当标准物质/标准样品的使用涉及到将固体CRM制备成液体时，需给出一些特别的说明，尤其在临床化学领域。应当详细说明溶剂的性质、温度、混合程序、使用前的放置时间以及溶液的稳定性。应当给出标准物质/标准样品的存储条件（如温度，曝光等），以保证证书的有效性。当标准物质/标准样品天然不稳定时，例如，放射性标准物质/标准样品，证书中应当给出适当的数学表达式作为标准值表达的一部分，以便使用时计算特性值。8 危险情况有关CRM安全性的信息应当包含在标签和证书里。任何有关危险性质和所采取的适当预防措施的细节应当在标准物质/标准样品附带的数据单里提供。9 均匀性水平大多数标准物质/标准样品是批量供应的，从批量中抽取子样用于化学分析或一些物理特性测量。抽取子样的先决条件是提供的样品对于预期用途来说是足够均匀的。证书应当给出CRM使用者提取子样的最小量。并应当给出警示：当提取标准物质/标准样品小于最小取样量时，特性的标准值及其不确定度将无效。适用情况下，证书应当给出可能需要用指定的程序摇荡容器，以确保样品足够均匀。评定标准物质/标准样品均匀性水平的程序细节和结果以及最小取样量的依据应当提供给使用者，可以包括在证书（或定值报告）中，或按要求由研制单位提供。10 标准值及其不确定度根据测量不确定度的表述指南和（化学）测量中不确定度的定量分析，标准物质/标准样品应当清楚描述其特性和其标准值以及标准值的不确定度。标准值及其不确定度的评估方法也要描述。当处理测量结果采用纯粹的统计方法时，应当注明该处理的方法。然而，通常情况下，尤其在采用多种测量技术时，可利用定值单位的专家经验和专业知识从测量结果中导出标准值和其不确定值，也应当给出一些结果的权重大于其他结果的权重的原因。11 溯源性ISO指南30中，标准物质/标准样品的定义要求标准物质/标准样品特性值用建立了溯源性的程序确定，可溯源到准确实现的用于表示该特性值的计量单位。溯源性指的是测量结果的一种特性，借助它可使人们通过有给定的不确定度的连续的比较链与规定的标准（通常为国家或国际标准）联系起来[3]。因此，标准物质/标准样品特性值的测定，理论上应当可溯源到国际单位制（SI）或一个国际一致认可的测量标尺。对于物理特性的CRM，可以建立一个连续的仪器校准链将测量结果与在国家计量院再现的国际单位制的基本单位联系起来。化学测量的问题较大，使用的方法从原级测量方法（有最高的计量质量，操作可以完全描述，不确定度可以按照SI单位表述，例如，同位素稀释质谱法，库仑法和重量法），到能证明可以溯源到一个国际一致认可的测量标尺的严格定义的方法。每一个证书应当陈述测量程序原理和它们的有效性以及可溯源到的测量标尺。化学测量的溯源性在参考文献[5]、[6]和[7]中有比较详细的论述。12 由独立实验室或测量方法获得的值当用几种方法测定标准物质/标准样品时，每一种方法都应当加以说明。对于通用方法，则提及即可，例如，原子吸收法或X-射线荧光广谱法。但是，当使用非标准方法或经修改的标准方法时，应当给出参考文献或完整的描述。当几个独立的实验室或独立的分析者对标准物质/标准样品的测量有贡献时，其名称及其使用的方法应当一并给出。每个方法得到的特性量值以及不同实验室或分析者使用相同方法得到的特性值，在一些情况下也可以分别列出。关于这种方法的可取性，目前意见尚未统一，由于是非强制性的，所以生产者可自行处理。一方面，可以让使用者根据独立的测量结果的一致性和他们的测量技术方面的知识判断CRM的质量，但另一方面，也有可能使得使用者在没有定值单位的经验和专业知识的情况下对特性值作出个人的判断。这样，证书中信息的误用可能会导致样品作为有证标准物质/标准样品使用时无效。在任何情况下，测量结果的详细材料可以从生产者那里以定值报告或其他形式获得。一些标准物质/标准样品所定值的特性值取决于测量的方法，例如，矿物中元素的含量取决于提取矿物的方法，燃点的测量或硬度值都全部取决于测量方法。在这种情况下，证书中应当给出“标准值依赖于测量方法”明确的警示，并且给出详细的测量方法或详细描述分析方法的参考文献的出处。13 参考值在标准物质/标准样品定值过程中，生产者可能得到不能满足定值要求的标准物质/标准样品的其他特性值。这些信息对于标准物质/标准样品的使用者可能是有用的，例如复杂基体中其他元素的近似含量，也可以包括在证书中。但是该信息应当清晰地与标准值区分开。为了避免混乱，不要与标准值列在同一表中。 14 定值日期证书中应当注明它的第一次发布日期。如证书中包含同一批CRM修正值的情况下，原证书的日期和所有的修订日期均应当给出。 15 有效期证书可以含有一个定值单位不再保证标准值有效的截止日期。对业已证明不稳定或可能不稳定的标准物质/标准样品来说，这应当是一种**惯做法。当给出截止日期时，证书则包含着保证：在证书规定的有效期内，标准值将会在适当间隔的时间内进行监测，在有效期内，CRM发生的重大变化导致重新定值或将其撤销，均将告知购买者。甚至当没有给出截至日期时，标准值在适当期间内发生了非预期的变化，也应当告知购买者。当测量方法有所改进时，也可能重新进行再定值。因此，生产者和销售者应当保留购买者的名录。当到达证书的截至日期后，测量显示标准值没有改变，这时应当发布标准值不变的，但有新截止日期的新证书，新的截止日期是根据上次证书给出的有效期内证明的稳定性而定的。16 更详尽的信息证书是一个内容繁多的工作项目的总结，这些工作包括材料的选择、适宜性的评价和待定值的特性值的测量。虽然许多使用者不需要包含在证书中的更多信息，但是这些信息应当可以在定值报告中（随CRM供应或索取）得到，也可向生产者索取。 17 生产者单位负责人的姓名和签字不可忽视的是证书中应当包括代表生产者单位的负责人的姓名，表明这个人对证书的内容负责。

传统的菌种保存方式简介斜面保存法：微生物保存最基本的方法，可广泛用于细菌、真菌等，保存期限非常短，斜面容易干裂。液体石蜡保存法：可用于保存霉菌、酵母菌、放线菌及需氧菌，方法简便，可防止斜面干燥和氧气进入，但一些固氮菌、分枝杆菌、毛霉、厌氧菌等不适宜用此法。甘油冷冻保存法：用于一般细菌的保存，需使甘油终浓度为20%左右，然后-20℃或-70℃以下保存。融化时需要水浴溶化。真空冷冻保存法：具有低温、干燥、无氧的保存条件，适用于98%以上菌种的保存，但操作复杂，一般实验室难以使用。液氮保存法：基本所有微生物均可保存，并且保存时间长，但操作较为复杂而且需要设备，不适用于一般实验室保存菌种。沙土保存法半固体保存法瓷珠菌种保存法的原理瓷珠菌种保存管是实验室保存菌种的容器，管内有表面凹孔小瓷珠用于细菌的吸附和保存，放置于-20℃或-80℃下便可创造干燥、低温、缺营养的环境，使菌株处于“休眠” 状态，方可长期保存（视不同菌种与保存温度，一般可保存3-10 年）, 同时菌种保存管的取用和保存较为便利（取用复苏及保存菌种仅需1分钟）。用途：菌种保存、复苏和运输。优点：操作简单方便、菌种保存快速、包装物体积小、菌种保存时间长。操作简单方便：挑取细菌新鲜纯培养物，接入菌种保存管。菌种保存快速：混匀后，吸出冷冻保存液。包装物体积小：1.8ml冷冻管。菌种保存时间长：2-8℃可保存6个月；-20℃可保存12个月；-80℃可保存24个月。瓷珠菌种保存管的使用方法1.从培养18h以上的平板上刮去新鲜纯培养物于菌种保存管中，配成大约3-4麦氏比浊度的菌悬液。2.拧紧保存管，来回颠倒几次使细菌乳化，不能旋摇。3.用无菌移液器将菌种保存管内的液体吸取干净，妥善放置被吸出的液体。4.拧紧保存管，迅速将其置于-20℃或-70℃冰箱中。使用时的注意事项被保存的菌种要求是经过纯化后培养 18-24h 内的新鲜菌种（细菌18-24h，酵母菌需3 天，形成孢子的微生物保存孢子，而放线菌和丝状真菌需培养7 天后保存），不宜使用老化或未经鉴定的菌种。菌种保存浓度必须要做3-4 麦氏比浊度，如接种浓度过低将会降低复苏效果。待保存于菌种保存管中的菌种完全乳化均匀吸附在多孔小瓷珠后，要将多余的菌种保存液吸取出来并弃之，否则在复苏时的冻融过程中会损伤菌株活性。做厌氧菌保存时，应提供厌氧的环境，如厌氧箱、厌氧袋，菌种保存管中可通入氮气来驱除保存菌种时所引入的氧气。菌种复苏时，也要创造厌氧的环境。菌种复苏完成后，对使用菌株需要进行再次纯化，以保证菌株的单一性。

仪器标签1.仪器标签贴在仪器下方，看上去要整齐、美观，同时不能影响仪器使用，同种仪器贴在同一位置，仪器要分类使用不同的仪器标贴。2.同类需经常洗涤使用的玻璃仪器中，只须贴其中一个，放在该类仪器前方，其他同类玻璃仪器不用贴。3.同类标签贴法要统一，仪器要除去包装再贴，不要贴在外包装上。4.仪器标签上书写要规范，统一用同种颜色的笔书写。5.书写内容，包括类别、序列号等等。（1）类别按照仪器所属分类书写，可参考台帐或仪器目录中的黑体字，如力学、电学等；编号：仪器统-5位数编号；柜号：仪器柜的编号，建议实验室将仪器柜从门口开始按一定规律编号；（2）序列号有的教学仪器出厂的时候设置的一个编号，每个编号不一样，用于查看和管理；名称：按照台账或仪器目录上的规范名称书写，要写全称，不要用省略的符号。仪器柜标签1.仪器柜标签上书写要规范，字体工整：2.标签贴上后很难除下，请确保书写清楚后再贴，免得返工；3.仪器柜标签贴在面向仪器柜右边门的玻璃的左上角位置，每个仪器柜尽量只用一张大标签写完；确实需贴第二张标签，请与第一张标签并列由左往右张贴；4.今年开始柜外标签采用透明塑套+白卡片的形式，透明塑套可用双面胶等固定在柜外，如是玻璃推门注意不要影响门的开关。除下旧款贴式标签时，请用电吹风吹软标签后小心撕下并溶剂洗去胶迹。如何撰写标签标识实验室仪器设备应使用校准类标签，对需校准的所有设备进行标记，标签的内容包括:1.校准状态2.上次校准的日期3.再校准4.失效日期标签标识在下面几种情况下，可以其他适宜的方式加以控制：1.使用标签将会影响设备的准确性； 2.设备的使用环境或介质，不允许加贴标签或标记；3.设备太小无法使用标签或进行标记。遇到这种情况，校准标签可以加贴在设备的包装上，如可将校准标签粘贴在砝码盒上。