各种已被命名和经过细胞生物学鉴定的细胞系或细胞株，都是一些形态比较均一、生长增殖比较稳定的和生物性状清楚的细胞群。因此凡符合上述情况的细胞群也可给以相应的名称，即文献中常称之为已鉴定的细胞（Certified Cells）。已鉴定的细胞可用于各种实验研究和生产生物制品，当前世界上已建的各种细胞系（株）已难胜数。体外培养细胞的种类和命名体外培养细胞的名称，随培养细胞技术的发展和细胞种类的增多而演变。最早采用的名称为细胞株（Cell strain），以后又出现细胞系（Cell Line）一词，两者曾一度混用致概念不明确，导致文献中也很混乱。名词的由来细胞株（cell strain）最初为W.Earle（1940）所采用，他把自己建立的小鼠结缔组织L系称为“株”，1951年，George Gey把其建立的人体宫颈癌细胞Hela系称为“株”。1954年，White另外使用了“系”来称呼A Carrel培养的鸡胚心脏的细胞群，细胞系（cell line）由此产生，之后这两个名词长-期混用。即使在1979年国际组织培养协会专业术语委员会颁布“专业名词建议”和1984年在宁波召开的全国动物组织和细胞培养会议通过“动物细胞、组织和器官培养技术中的一些术语的译名和解释”之后，到目前为止国内对这两个名词的使用仍是混乱的，不仅在商品名中混用，在专业文献中亦有混用现象。现将细胞系和细胞株区分如下：1、细胞系（Cell Line）：原代培养物经shou次传代成功即成细胞系，由原先存在于原代培养物中的细胞世系（Lineage of Cells）所组成。2、细胞株（Cell Strain）：通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物称为细胞株。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。如果不能继续传代或传代数有限，称为有限细胞株（finitecell strain）；如果可以连续传代，称为连续细胞株（continuous cell strain）。对于人类肿瘤细胞，在体外培养半年以上，生长稳定，并连续传代的即可称为连续性株或系。因此，细胞系泛指可传代的细胞，细胞株是具有特殊性质的细胞系。（一）初代培养初代培养又称原代培养，即直接从体内取出的细胞、组织和器官进行的第1次的培养物。一旦已进行传代培养（Subculture）的细胞，便不再称为初代培养，而改称为细胞系。（二）细胞系初代培养物开始第1次传代培养后的细胞，即称之为细胞系。如细胞系的生存期有限，则称之为有限细胞系（Finite Cell Line）；已获无限繁殖能力能持续生存的细胞系，称连续细胞系或无限细胞系（Infinite Cell Line）。无限细胞系大多已发生异倍化，具异倍体核型，有的可能已成为恶性细胞，因此本质上已是发生转化的细胞系。无限细胞系有的只有永生性（或不死性），但仍保留接触抑制和无异体接种致癌性；有的不仅有永生性，异体接种也有致瘤性，说明已恶性化。这两种不同性质的无限细胞系，在国内外文献中对这些名词的应用上也常不十分严格。为概念上的明确，对有恶性的无限细胞系采用“恶性转化细胞系”一词表示可能更妥。而对那些只具永生性而无恶性的细胞系，则用无限细胞系或转化细胞系即可。如 NIH3T3、Rat-1、10T1/2等均属这类细胞系。由某一细胞系分离出来的、在性状上与原细胞系不同的细胞系，称该细胞系的亚系（Subline）。（三）克隆细胞株从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培养或通过筛选的方法，单细胞增殖形成的细胞群，称细胞株。再由原细胞株进一步分离培养出与原株性状不同的细胞群，亦可称之为亚株（Substrain）（四）二倍体细胞细胞群染色体数目具有与原供体二倍细胞染色体数相同或基本相同（2n细胞占75％或80％以上）的细胞群，称二倍体细胞培养。如仅数目相同，而核型不同的即染色体形态有改变者为假二倍体。二倍体细胞在正常情况下具有限生命期，故属有限细胞系。但随供体年龄和组织细胞的不同，二倍体细胞的寿命长短各异。人胚肺成纤维细胞可传50代土10代，人胚肾只有8～10代，人胚神经胶质细胞15～30代；如从老龄个体取可传50则细胞生存期更短。由不同年龄供体取材建立的二倍体细胞系可供研究衰老之用。为保持二倍体细胞能长期被利用，一般在初代或2～5代即大量冻存作为原种（Stook Cells），用时再进行繁殖，用后再继续冻存，可供长期使用或延缓细胞的衰老。

　　玻璃器皿清洁是实验室工作的重要一环。随着实验室洗瓶机的普及,洗瓶机工作时的清洗剂bi不可少,下面介绍几种实验室中常用的清洗剂:　　1、工业浓盐酸:工业浓盐酸一般是在防腐处理后的钢瓶里让氯气在氢气中燃烧生成氯化氢,再通入水中制得。工业浓盐酸可除去水垢及某些无机盐沉淀。　　2、30%硝酸溶液:多用于洗涤微量滴管及二氧化碳测定仪。　　3、5%草酸溶液:用数滴硫酸酸化,可有效除去高锰酸钾残留。　　4、5%～10%磷酸三钠(Na3PO4·12H2O)溶液:可有效洗涤油污物。　　5、5%～10%乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na2)溶液:该溶液加热煮沸后多用于清洗玻璃仪器内壁的白色沉淀物。　　6、尿素洗涤液:尿素洗涤液是蛋白质的良好溶剂,多用于洗涤残留蛋白质的玻璃器皿。　　7、含有高锰酸钾的氢氧化钠溶液和氢氧化钾的乙醇溶液:这两种强碱性的洗涤液可有效清除玻璃器皿内壁污垢。但因其对玻璃器皿的侵蚀性较强,应注意控制洗涤时间不宜过长。　　8、有机溶剂:常见的有机溶剂如二甲苯,可清洗油漆;乙醇,可清洗油脂、脂溶性污渍。　　9、铬酸清洗液:烧杯内加入工业浓硫酸100mL,一边加热烧杯一边缓慢加入5g重铬酸钾粉末,加入过程中不断搅拌。待重铬酸钾粉末全部溶解并冷却后制得铬酸清洗液。该清洗液可有效清除油污、手印等污垢。配制时要注意人身安全,配戴好防护用具。　　以上清洗剂可在实验室中配置获取,但功能相对单一、配制耗时耗力,无形中降低了实验人员的工作效率。如果经济条件允许的话,推荐购买厂家提供的专用清洗剂,省时省力,还更安全可靠。

一、微笑形区带（两边翘起，中间凹下）：形成原因：主要是由凝胶中间部分凝固不均匀引起的，多出现于较厚的凝胶中。处理办法：待其充分凝固再做实验。二、皱眉形区带（两边向下，中间鼓起）：形成原因：主要出现在蛋白质垂直电泳槽中，一般是由两板之间的底部间隙气泡未排除干净引起的。处理办法：可在两板之间加入适量缓冲液，以排除气泡。三、区带拖尾：形成原因：主要是由样品溶解效果不佳或分离胶浓度过大引起的。处理办法：加样前离心；选择适当的样品缓冲液，加适量样品促溶剂；电泳缓冲液放置时间过长，重新配制；降低凝胶浓度。四、区带出现纹理：形成原因：主要是由样品不溶性颗粒引起的。处理办法：加样前离心，加适量样品促溶剂。五、鬼带：形成原因：主要是由于还原剂在加热的过程中被氧化而失去活性，致使原来被解离的蛋白质分子重新折叠结合和亚基重新缔合，聚合成大分子，其分子量比目标区带大，有时不能进入分离胶。但它与目标区带有相同的免疫学活性，在免疫印迹反应中可见，能与目标区带对应的抗体作用。处理办法：加热煮沸后再添加适量的DTT或Beta巯基乙醇，以补充不足的还原剂；加适量EDTA来阻止还原剂的氧化。六、溴酚蓝不能起到指示作用：形成原因：实验中常遇到溴酚蓝已跑出板底，但蛋白质却还未跑下来的现象，主要与缓冲液和分离胶的浓度有关。处理办法：更换正确pH值的Buffer，降低分离胶浓度。七、区带很粗：形成原因：主要是由于浓缩胶未浓缩好。处理办法：适当增加浓缩胶长度，保证浓缩胶贮液的pH正确（6.8），适当降低电压。八、电泳电压很高而电流很低：形成原因：主要是由于电泳槽没有正确装配，电流未形成通路。处理办法：电泳槽正确装配。

（1） 质粒的提取 (Tiangen质粒提取试剂盒)：a） 挑菌： 选取培养板中大小中等的单个菌落， 消毒牙签接种到10ml摇菌管中， 其中含有卡那霉素的LB约5ml， 37 °C， 220rpm恒温摇床中震荡培养过夜。b） 取上述2.0ml培养液， 于常温下12000 rpm离心1分钟， 弃上清， 干燥沉淀。c） 加入250ul溶液P1(配有去RNA酶， 4 °C保存)， 涡旋振荡， 完全悬浮细菌，不能留有沉淀， 否则会影响裂解。d） 加入250ul溶液P2， 快速上下颠倒8次， 常温静置3分钟， 可见混合液逐渐变清、 粘稠， 表示已充分裂解。e） 再加入350 ul溶液Ⅲ， 快速上下颠倒8次， 可见白色絮状物出现。f） 常温12000rpm离心10分钟， 所得上清液倒入已经用BL平衡过的过滤柱中，注意不要倒入白色絮状物沉淀， 静置3分钟， 12000 rpm离心1分钟。g） 加入500 ?l溶液PD， 12000 rpm离心1分钟。h） 加入600 ?l溶液PW， 12000 rpm离心1分钟； 此步骤再重复1次； 弃废液后空管再次12000 rpm离心2分钟。i） 于超净台通风干燥， 放置2-5分钟， 加入33ul已加热至65 °C的已灭菌的ddH 2 O， 室温静置3分钟， 12000 rpm离心2分钟， 得到相关质粒DNA， 测浓度， -20 °C保存备用。（2） 质粒鉴定及保存取100ng上述提取的质粒， 进行酶切（反应体系见前）， 随后用0.8%琼脂糖凝胶电泳以鉴定（方法同前所述）， 最后将粗略鉴定正确的样本送至生物技术公司测序。 如测序正确， 用50%灭菌甘油300?l+700?l的菌液， 标记于-80 °C保存备用。11） 质粒或PCR产物纯化（胶回收）（1） 琼脂糖电泳酶切或 PCR 相关产物。（2） 在紫外投射反射仪割取含有目的片段的琼脂糖凝胶片段， 割取要迅速， 以避免紫外线对 DNA 的损伤， 但注意尽量割取目的片段， 减少无目的片段的凝胶量， 以便提高纯化回收效率。（3） 用天平称先称区空 EP 管重量， 再称取含有凝胶的 EP 管重量， 计算得到凝胶重量（mg）， 加入等量体积（ul） Bindingbuffer（如 1 mg=1 μl）。（4） 将含有凝胶的 EP 管置入 60 °C 恒温水浴箱中融化凝胶， 持续 8-10min，间或拿出摇匀， 以确保完全凝胶溶解。（5） 将上述凝胶溶液转移至干净的纯化柱上， 室温下静置吸附 3 分钟。（6） 将纯化柱 12000rpm 离心 1 分钟， 弃超滤液， 必要时可将超滤液重新离心1 次可提供纯化效率； 再次加入 100?l Binding buffer， 12000rpm 离心 1 分钟。（7）加入 700?l Wash buffer （事先已经加入无水乙醇）， 12000 rpm 离心 1 分钟，弃超滤液； 空管 12000 rpm 离心 2 分钟。（8） 纯化柱置于 1.5 毫升干净离心管中， 于超净台通风干燥 5 分钟。（9） 加入 30?l 已加热至 65 °C 的已灭菌的 ddH 2 O， 室温静置 3 分钟， 12000 rpm离心 2 分钟， 得到相应的 DNA 片段， 测浓度， -20 °C 保存备用。

细胞培养被支原体污染是个世界性问题，在细胞培养中支原体感染发生率达到63%。支原体是一类无细胞壁，形态呈高度多形性，为圆形、丝状或梨形，其直径仅有0.13～0.18μm，变形能力大，故能通过滤菌器，最突出的结构特征是没有细胞壁，对作用于细胞壁生物合成的抗生素不敏感。研究表明，支原体能耗尽营养物，促进代谢积累，导致pH改变，对细胞造成多种影响，包括生长状况、生化特性、代谢、免疫、以及细胞存活等多方面的改变，继而干扰实验结果，或造成无法解释的差异。更加不幸的是拯救被感染的细胞几乎是不可能的。那如何检测你的细胞是否收到支原体的入侵呢？下面介绍了几种检测方式，或许对你的实验有用。分离培养法分离培养法是支原体检测的金标方法，其检测精确度最高。这种方法是从可疑的细胞培养体系中取样，并接种到最适宜支原体生长的琼脂平板上。如果样本中含有支原体，它们就会在这种琼脂平板上疯狂生长，最终形成明显可见的特征性菌落。分离培养法基本不会出现假阴性结果，因此被誉为支原体检测金标准。但是，分离培养法也存在两个弊端，一是检测时间太长，支原体要长出明显克隆至少需要4周时间。二是尽管可以检测绝大多数支原体种类，分离培养法也有力所不及的时候，例如支原体M. hyorhinis。DNA检测法，也称直接培养法将可疑样品与指示细胞共同培养，一般需要几天时间。DNA检测所用的指示细胞通常是细胞质区域较大的Vero细胞，如果原样本中含有支原体，那么当细胞DNA被荧光染料（如Hoechst染料）染色时，就可以在指示细胞的核周围观察到荧光斑点或荧光颗粒。但是这种方法灵敏度太低，当检测成阳性时，细胞经常已经严重污染。且Hoechst荧光染色：操作复杂，操作不当易造成假阳性或假阴性。PCR法PCR法采用针对支原体DNA的引物用PCR检测可疑样本，其PCR引物可特异扩增支原体基因组中rDNA保守序列，包括所有已知的支原体，及细胞培养过程普遍遇到的种属，例如M. arginini、M. arthritidis、M. bovis、M. fermentans、M. genitalium、M. hominis、M. hyorhinis、M. neurolyticum、M. orale、M. pirum、M. pneumoniae、M. pulmonis、M. salivarium 和U. urealyticum。在凝胶电泳过程中，支原体DNA会显示为特异性条带，以此指示支原体的存在。PCR法快速，简便，具有强扩增能力和极高的敏感性，可以检测大多数支原体，但谨慎起见最好同时使用另一种检测方法来进行验证。PCR法检测支原体只需几个小时，是最快但也是最不灵敏的支原体检测方法。酶学检测酶学检测是将可疑样本添加到特定底物中，在这一体系内支原体的酶可以将ADP转化为ATP，随后能利用ATP发光的luciferase酶就可以指示支原体的存在。最后，建议你进行定期检测支原体感染会影响细胞的正常生长，因此对培养细胞定期进行支原体检测非常重要。一般来说每1至3个月就应该进行一次支原体检测。将定期支原体检测常规化坚持下去，是细胞培养实验室应对支原体感染的关键。

一、无菌操作要求1.接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。2.进行接种食品样品时，必须穿专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用。3.接种食品样品时，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球将手擦干净。4.进行接种所用的吸管，平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼三次后使用。5.从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不得触及试管或平皿边。6.接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。7.接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到环和针与杆的连接处，接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min，再经火焰烧灼。8.吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。二、无菌间使用要求1、无菌间通向外面的窗户应为双层玻璃，并要密封，不得随意打开，并设有与无菌间大小相应的缓冲间及推拉门，另设有0.5-0.7平方米的小窗，以备进入无菌间后传递物品。2、无菌间内应保持清洁，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，擦拭工作台面，不得存放与实验无关的物品。3、无菌间使用前后应将门关紧，打开紫外灯，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需30W紫外灯，距离在1.0m处，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响。4、处理和接种食品标本时，进入无菌间操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。5、在无菌间内如需要安装空调时，则应有过滤装置。三、消毒灭菌要求微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等，必须经灭菌后方能使用。（一）干热和湿热高压蒸气锅灭菌方法1、灭菌前准备（1）所有需要灭菌的物品首先应清洗晾干，玻璃器皿如吸管、平皿用纸包装严密，如用金属筒应将上面通气孔打开。（2）装培养基的三角瓶塞，用纸包好，试管盖好盖，注射器须将管芯抽出，用纱布包好。2、装放（1）干热灭菌器：装放物品不可过挤，且不能接触箱的四壁。（2）大型高压蒸气锅：：放置灭菌物品分别包扎好，直接放入消毒筒内，物品之间不能过挤。3、设备检查（1）检查门的开关是否灵活，橡皮圈有无损坏，是否平整。（2）检查压力表蒸气排尽时是否停留在零位，关好门和盖，通蒸气或加热后，观察是式高压锅或立式压力蒸气灭菌器的使用应按下列步骤进行：①手提式高压锅在主体内加入3L清水，立式高压锅加水16L（重复使用时应将水量补足，水变混浊需更换）.②手提式压力锅将顶盖上的排气管插入消毒桶内壁的方管中（无软管或软管锈蚀破裂的灭菌器不得使用）。③盖好顶盖拧紧，勿使漏气；置灭菌器于火源上加热，立式压力锅通上电源，并打开顶盖上的排气阀放了冷气（水沸腾后排气10-15min）。④关闭排气阀，使蒸气压上升到规定要求，并维持规定时间（按灭菌物品性质与有关情况而定）。⑤达到规定时间后，对需干燥的物品，立即打开排气阀排出蒸气，待压力恢复到零时，自然冷却至60℃后开盖取物，如为液体物品，不要打开排气阀，而应立即将锅去除热源，待自然冷却，压力恢复至零，温度降到60℃以下再开盖取物，以防突然减压液体剧烈沸腾或容器爆破。（3）卧式压力锅蒸气灭菌器的使用按下列步骤进行：①关紧锅门，打开进气阀，将蒸气引入夹层进行预热，夹层内冷空气经阻气器自动排出。②夹层达到预定温度后，打开锅室进气阀，将蒸气引入锅室，锅室内冷空气经锅室阻气器自动排出。③待锅室达到规定的压力与温度时，调节进气阀，使保持恒定至④自然或人工降温至60℃再开门取物，不得使用快速排出蒸气法，以防突然降压，液体剧烈沸腾或容器爆破。⑤使用自动程序控制式压力蒸气灭菌器，在放好物品关紧门后，应根据物品类别按动相应开关，以便按要求程序自动进行灭菌，灭菌时必须利用附设仪表记录温度与时间以备查，操作要求应严格按照厂家说明书进行。4、灭菌温度与时间（1）干热灭菌器灭菌温度160℃，1.5-2h。（2）压力蒸气灭菌锅灭菌温度与时间（二）间歇灭菌方法1、灭菌方法系利用不加压力的蒸气灭菌，某些物质经高压蒸气灭菌容易破坏，可用此法灭菌。（1）将欲灭菌物品置于锅内，盖上顶盖，打开排水口，使器内余水排尽。（2）关闭排水口，打开进气门，根据需要消毒10～20min。（3）灭菌完毕关闭进气门，取出物品待冷至室温温度，放入37℃温箱过夜，次日仍按上述方法消毒，如此三次，即可达到灭菌目的。2、血清凝固器使用方法，培养基中含有血清或鸡蛋特殊成份时，因高热会破坏其营养成份，故用低温，可使血清凝固，又可达到灭菌目的。（1）在使用该法灭菌的血清等分装时，需严格遵守无菌操作，试管、平皿也经灭菌后使用。（2）将培养基按要求使成斜面或高层，加足水后，接上电源，升温75～90℃1h灭菌，放37℃温箱过夜，再如此灭菌三次。3、煮沸消毒：可用煮锅或煮沸消毒器，水沸腾后再煮5～15min，也可在水中加入2%石炭酸煮沸5min，加入0.02%甲醛，80℃煮60min均可达到灭菌目的，但选用煮沸消毒的增消剂时，应注意对物品的腐蚀性。4、灭菌处理：灭菌后物品，按正常情况已属无菌，从灭菌器中取出应仔细检查放置，以免再度污染。（1）物品取出，随即检查包装的完整性，若有破坏或棉塞脱掉，不可作为无菌物品使用。（2）取出的物品，如为包装有明显的水浸者，不可作为无菌物品使用。（3）培养基或试剂等，应检查是否符合达到灭菌后的色泽或状态，未达到者应废弃。（4）启闭式容器，在取出时应将筛孔关闭。（5）取出的物品掉落在地或误放不洁这处，或沾有水液，均视为受到污染，不可作为无菌物品使用。（6）取出的合格灭菌物品，应存放于贮藏室或防尘柜内，严禁与未灭菌物品混放。（7）凡属合格物品，应标有灭菌日期及有效期限。（8）每批灭菌处理完成后，记录灭菌品名、数量、温度、时间、操作者。四、有毒有菌污物处理要求微生物实验所用实验器材、培养物等未经消毒处理，一律不得带出实验室。1、经培养的污染材料及废弃物应放在严密的容器或铁丝筐内，并集中存放在指定地点，待统一进行高压灭菌。2、经微生物污染的培养物，必须经121℃30min高压灭菌。

植物组织培养基包括多种成分：无机盐、维生素、氨基酸、生长调节剂、糖类、琼脂（或结冷胶）和水。所有这些成分在植物组织培养中至少有1种或多种作用。植物组织培养基中的矿质元素进入植物细胞后用于合成有机分子或作为酶反应中的催化剂。可溶性盐离子在植物电离分子运输中作为平衡离子，渗透压的调节以及维持植物体电化学势的平衡都起着重要的作用。氮、硫和磷是蛋白质和核酸的组成成分。镁离子和许多的微量元素是许多酶和细胞器的基本组成部分，因此在多种反应中起着重要的催化作用。钙离子和硼酸主要存在植物的细胞壁中，尤其是钙离子在维持生物膜稳定性起着重要作用。相反，钾离子和氯化物在渗透调节中起着重要作用，参与维持电化学势的平衡，同时也是许多酶的活化剂。下面对常用培养基做一个介绍：MS培养基，最初是Murashige 和Skoog 于1962年为烟草细胞培养设计的，经过改良后，现今可以用于多种植物的组织培养，如马铃薯、胡萝卜、甘蓝等，许多研究者根据不同的试验需要，先后研发了改良MS培养基包括含1/2大量元素、含3/4大量元素、用NaNO3替代NH4NO3、不含NH4NO3、含1/2NH4NO3和KNO3的培养基等，一般需要根据具体的试验材料和试验目的选用具体的培养基。N6培养基，被定义用来改善水稻花粉愈伤组织的形成、生长和分化。NH4+离子浓度的最适范围是7.0 mM（或3.5mM(NH4)2SO4)）。高浓度的铵盐会显着抑制水稻花粉的生长和分化。KNO3和培养基中其他成分的浓度不会影响花粉的生长。B5培养基是1968年由Gamborg等为培养大豆根细胞而设计的，双子叶植物在B5培养基上生长更适宜。B5(Gamborg)培养基的主要特点是含有较低的铵，这是因为铵可能对不少培养物的生长有抑制作用。NB培养基，为N6培养基大量元素和B5培养基的微量元素和维生素混合物。木本植物培养基也叫WPM培养基，是1981年由Lloyd和McCown为山月桂茎尖培养专业设计，根据MS培养基改良而来，相对MS培养基而言，使用了硫酸钾替换了硝酸钾，硝酸铵的含量也降低到了MS培养基的1/4，氮盐也主要以硝酸钙的形式供应，现主要用于木本植物的组织培养。配置培养基的注意事项1、调pH 用滴管吸取物质的量浓度为1 mol/L的NaOH溶液（一般刚配好的培养基都是偏酸），逐滴滴入溶化的培养基中，边滴边搅拌，并随时用精密的pH试纸(5.4～7.0)测培养基的pH，一直到培养基的pH为5.8为止(培养基的pH必须严格控制在5.8)。在这里要注意的是，许多同学在做培养基时明明PH值调到了5.8但是还是不凝固，这个原因可能是：a. 先检查培养基组分中琼脂的用量和质量b. 如果琼脂没有问题，灭菌时间过长，一般在0.15MPa超过1小时后易凝固不良。c. 如果以上都正常，我们还要考虑称量工具是否准确，有些小市场买的称量工具不是很准确，建议称量工具到正规厂家或专业商店购买。2、培养基的分装溶化的培养基应该趁热分装。注意不要让培养基沾到瓶口和瓶壁上，因为粘在瓶口容易污染。3、pH不要调过头，以避免回调而影响培养基内各离子的浓度。4、需不断搅拌,以防琼脂糊底烧焦。5、严格按照培养基配方配制

1、抗原提纯与动物免疫 对抗原的要求是纯度越高越好，尤其是初次免疫所用的抗原。如为细胞抗原，可取1×107个细胞作腹腔免疫。可溶性抗原需加完全福氏佐剂并经充分乳化，如为聚丙烯酰胺电泳纯化的抗原，可将抗原所在的电泳条带切下，研磨后直接用以动物免疫。选择与所用骨髓瘤细胞同源的BALB/c健康小鼠，鼠龄在8～12周，雌雄不限。为避免小鼠反应而不佳或免疫过程中死亡，可同时免疫3～4只小鼠。免疫过程和方法与多克隆抗血清制备基本相同，因动物、抗原形式、免疫途径不同而异，以获得高效价抗体为最终目的。免疫间隔一般2～3周。一般被免疫动物的血清抗体效价越高，融合后细胞产生高效价特异抗体的可能性越大，而且单克隆抗体的质量（如抗体的浓度和亲和力）也与免疫过程中小鼠血清抗体的效价和亲和力密切相关。末次免疫后3～4天，分离脾细胞融合。2、骨髓瘤细胞及饲养细胞的制备选择瘤细胞株的最重要的一点是与待融合的B细胞同源。如待融合的是脾细胞，各种骨髓瘤细胞株均可应用，但应用最多的是Sp2/0细胞株。该细胞株生长及融合效率均佳，此外，该细胞株本身不分泌任何免疫球蛋白重链或轻链。细胞的最高生长刻度为9×105/ml，倍增时间通常为10～15h。融合细胞应选择处于对数生长期、细胞形态和活性佳的细胞（活性应大于95％）。骨髓瘤细胞株在融合前应先用含8-氮鸟嘌呤的培养基作适应培养，在细胞融合的前一天用新鲜培养基调细胞浓度为2 ×105/ml，次日一般即为对数生长期细胞。在体外培养条件下，细胞的生长依赖适当的细胞密度，因而，在培养融合细胞或细胞克隆化培养时，还需加入其他饲养细胞（feeder cell）。常用的饲养细胞为小鼠的腹腔细胞，制备方法为用冷冻果糖液注入小鼠腹腔，轻揉腹部数次，吸出后的液体中即含小鼠腹腔细胞，其中在巨噬细胞和其他细胞。亦有用小鼠的脾细胞、大鼠或豚鼠的腹腔细胞作为饲养细胞的。在制备饲养细胞时，切忌针头刺破动物的消化器官，否则所获细胞会有严重污染。饲养细胞调至1×105/ml，提前一天或当天置板孔中培养。3、细胞融合细胞融合是杂交瘤技术的中心环节，基本步骤是将两种细胞混合后加入PEG使细胞彼此融合。其后吧培养液稀释PEG，消除PEG的作用。将融合后的细胞适当稀释，分置培养板孔中培养。融合过程中有几个问题应特别注意。①细胞比例：骨髓瘤细胞与脾细胞的比值可从1:2到1:10不等，常用1:4的比例。应保证两种细胞在融合前都具有较高活性。②反应时间：在两种细胞的混合细胞悬液中，第1min滴加4.5ml培养液；间隔2min滴加5ml培养液，尔后加培养液50ml。③培养液的成分：对融合细胞，良好的培养液尤其重要，其中的小牛血清、各种离子和营养成分均需严格配制。如融合效率降低，应随时核查培养基情况。4、有限稀释法筛选阳性株一般选用的骨髓瘤细胞为HAT敏感细胞株，所以只有融合的细胞才能待续存活一周以上。融合细胞呈克隆生长，经有限稀释后（一般稀释至0.8个细胞/孔），按Poisson法计算，应有36％的孔为1个细胞/孔。细胞培养至覆盖0％～20％孔底时，吸取培养上清用ELISA检测抗体含量。首先依抗体的分泌情况筛选出高抗体分泌孔，将孔中细胞再行克隆化，尔后进行抗原特异的ELISA测定，选高分泌特异性细胞株扩大培养或冻存。5、单克隆抗体的制备和冻存筛选出的阳性细胞株应及早进行抗体制备，因为融合细胞随培养时间延长，发生污染、染包体丢失和细胞死亡的机率增加。抗体制备有两种方法。一是增量培养法，即将杂交瘤细胞在体外培养，在培养液中分离单克隆抗体。该法需用特殊的仪器设备，一般应用无血清培养基，以利于单克隆抗体的浓缩和纯化。最普遍采用的是小鼠腹腔接种法。选用BALB/c小鼠或其亲代小鼠，先用降植烷或液体石蜡行小鼠腹腔注射，一周后将杂交瘤细胞接种到小鼠腹腔中去。通常在接种一周后即有明显的腹水产生，每只小鼠可收集5～10ml的腹水，有时甚至超过40ml。该法制备的腹水抗体含量高，每毫升可达数毫克甚至数十毫克水平。此外，腹水中的杂蛋白也较少，便于抗体的纯化。接种细胞的数量应适当，一般为5×105/鼠，可根据腹水生长情况适当增减。选出的阳性细胞株应及早冻存。冻存的温度越低越好，冻存于液氮的细胞株活性仅有轻微的降低，而冻存在－70℃冰箱则活性改变较快。细胞不同于菌种，冻存过程中需格外小心。二甲亚砜（DMSO）是普遍应用的冻存保护剂。冻存细胞复苏后的活性多在50％～95％之间。如果低于50％，则说明冻存复苏过程有问题.6、单克隆抗体的纯化单克隆抗体的纯化方法同多克隆抗体的纯化，腹水特异性抗体的浓度较抗血清中的多克隆抗体高，纯化效果好。按所要求的纯度不同采用相应的纯化方法。一般采用盐析、凝胶过滤和离子交换层析等步骤达到纯化目的，也有采用较简单的酸沉淀方法。目前最有效的单克隆抗体纯化方法为亲和纯化法，多用葡萄球菌A蛋白或抗小鼠球蛋白抗体与载体（最常用Sepharose）交联，制备亲和层析柱将抗体结合后洗脱，回收率可达90％以上。蛋白可与IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3结合，同时还结合少量的IgM。洗脱液中的抗体浓度可用紫外光吸收法粗测，小鼠IgG单克隆抗体溶液在A280nm时，1.44（吸光单位）相当于1mg/ml。经低pH洗脱后在收集管内预置中和液或速加中和液对保持纯化抗体的活性至关重要。

很多人都不太清楚标准溶液的配制和标定标准有哪些，下面小编来为大家科普。标准溶液的配制和标定有两种标准分别是：SH/T0079《石油产品试验用试剂溶液配制方法》GB/T601-2002《化学试剂标准滴定溶液的制备》。我们目前采用的是SH/T0079.配制标准溶液应注意一下几点：标准溶液的配制和标定标准：(1) 溶液配制中所用的水，在没有注明其它要求时，应符合GB6683中三级水规格。所用乙醇是指95%乙醇。(2) 标定溶液和配制基准溶液所用试剂为容量分析基准试剂。配制一般溶液所用试剂纯度不低于分析纯。(3) 溶液配制中使用的分析天平的砝码、滴定管、容量瓶及移液管等需按计量检定规程要求定期检定。(4) 配制溶液所称取的试剂质量，应在所规定的质量±10%以内。(5) 标定标准滴定溶液浓度时，单次标定的浓度值与算术平均值之差不应大于算术平均值的0.2%。至少取三次标定结果的算术平均值作为标准滴定溶液的实际浓度。(6) 标准滴定溶液和基准溶液的浓度取四位有效数字。(7) 所配制的标准滴定溶液的浓度值与所规定的浓度值之差不应大于规定浓度值±5%。(8) 用标定和比较两种方法标定溶液浓度时，如有争议应以标定法为准。1、标准溶液的标定用优级纯以上的酸、碱或强溶解性的相应盐类等基准物质,用双重蒸馏去离子水溶解于容量瓶中,并定容至所需的贮备溶液,浓度为(mol/L),并按要求选取洁净容器盛装,贴好标签,按规范要求贮存。2、标定物质应选用基准物质的纯试剂作为标定物质,标定前应干燥至恒重,并准确称取。3、标定过程标准溶液在标定过程中,严格执行2人双平行标定,用精确的标定物,对标准溶液进行标定、计算,在误差很小,数据又相当接近的情况下,则取平均值为该标准溶液的浓度。4、标定时间常温下1.000mol/L及以上浓度贮备液,应每2a标定1次;0.5000mol/L浓度贮备液,应每1a标定1次;0.1000mol/L浓度贮备液,应每6个月标定1次;低于0.1000mol/L浓度的应用液,应每3个月标定1次。

标准物质是一种已经确定了具有一个或多个足够均匀的特性值的物质或材料，作为分析测量行业中的“量具"，在校准测量仪器和装置、评价测量分析方法、测量物质或材料特性值和考核分析人员的操作技术水平，以及在生产过程中产品的质量控制等领域起着不可或缺的作用。那么标准物质有哪些要注意的问题呢?下面小编来给大家介绍一下。(1)特性量的种类及定值方法：某些标准物质可能只适用某一特定方法或专属领域的应用，某些标准物质的值有特殊规定，如含结晶水的值，应对证书中该类说明加以注意，防止误选误用;(2)特性量水平：标准物质的特性量水平应与日常测量样品的水平匹配;(3)可接受的不确定度水平：标准物质特性量的相关不确定度水平应与日常测量中的精密度和正确度限度要求匹配;(4)基体及可能的干扰：标准物质用于开展方法确认、质量控制以及一些基体效应较为严重的测量方法的校准时，基体应与日常测量样品基体尽可能接近;(5)形式：标准物质可制备成不同的形式，如冻干与冰冻样品，制备方式的不同可能会导致相同特性在标准物质与真实样品中的行为差异，从而产生互换性问题，选购前应充分调研;(6)最小取样量：只要标准物质证书中规定了最小取样量，用于测量的取样量应不小于该最小取样量，因此选购时应考虑最小取样量是否能满足测量方法要求;(7)用量：标准物质的购买用量应足以满足整个实验计划中的应用，包括根据需要考虑的备样;(8)稳定性：选购前应确认所购买批次标准物质的有效期限，避免使用时发生过期的情况。

标准品实际上就是大家所说的标准物品，它所充当的角色就是衡量标准，专门用做药物方面对照品的一种衡量标准，即为含量测定中的标准含量。标准品种类也是多式多样的，常见的有冶金标准品、化学计量标准品和药检标准品等。虽然标准品与对照品有一定的区别，但是标准品或对照品混用的现象是司空见惯的，这就带来了一定的麻烦。那么，为什么会出现标准品或对照品混用的情况呢?下面小编来给大家简单分析一下其原因。为什么会出现标准品或对照品混用的情况呢：(1)卫生部提供的对照品使用说明书不够详尽，极其关键部分并没有做一个详尽的介绍，大多无对照品质量要求及标定方法，这就使得人们在使用标准品和对照品的时候出现了纰漏。(2)使用者们对标准品或者对照品，甚至是两者的正确使用方法知识相当的缺乏，正所谓要使用一个东西就必须对其有一个充分的了解，所以在不了解的情况下出现错误是情理之中的。(3)日常科研中极难找到相应的对照品，所以科研人员就只好用标准品代替对照品，久而久之大家就搞混了两者的区别。(4)中国药典正文中也常存在对照品混用的问题，如常将含量测定用的标准品或对照品用于溶出度检查，而含量测定方法与溶出度分析方法又不同，故极易引起混用。总而言之，上述所介绍的四点就是标准品和对照品常常出现混用情况的原因，希望大家在彻底了解了其相关原因之后，能够竭尽所能的改正自己常常犯的错误，在使用标准品或者对照品的时候，大家务必要认真检测自己是否拿错了，接着看看标准品和对照品的说明书，然后在正确将其投入使用中。

在生物实验中相信大家都经常要倒平板，细菌培养，分子生物学实验等等。医药企业中倒平板更是家常便饭，环境监测、水监测、微生物检查等，初学者往往都倒不好，现在总结几点小技巧供大家参考：一、防止倒皿时的冷凝：1、有经验的都知道，手心不烫手背烫，这是一个经验数据，此时的温度在45度左右，最适合倒平板。 2、如果要连续倒多个皿，尤其是在冬天往往容易凝固，一旦凝固则需要再加热到较高温度才能溶化（玻璃体的特性）。所以建议此时有个50度的恒温水浴开着，随时把装培养基的三角瓶放进去效果会好不少。二、培养皿中有冷凝水：一般来说，都会有几滴，影响不大。如果过多则需要注意。大概的情况是：1、倒皿前将平皿最好保持在35-40度的温度（触手有温热感），2、保持平皿静置环境温度高一些。三、倒已冷却的琼脂培养基：对已冷却的培养基再融化颇感头痛心烦，因为放在电炉上烤不仅需要耐心，还得加上小心，一不留神就会冲湿瓶塞；重新放入灭菌锅加热吧，好是好，可又嫌费事。解决方法是用微波炉加热，又快又好，融得彻底，用着放心。当然，装培养基所用的三角瓶得能够放入微波炉才行：250ml.没有微波炉怎么办？用电炉要加小心了，在电炉上直接加热融化营养琼脂时应注意在融化到上面剩最后薄薄的一层时应用小火，缓慢加热，防止气体冲破薄层时导致爆沸，营养琼脂冲出三角瓶。四、倒平皿保持均一性：倾注平皿要左三圈，右三圈的晃动，注意不要把平皿盖沾上，并且要轻轻晃动。五、具体对待：前面几点讲了倒平皿的最适温度保持在35-40度，但不同品牌的琼脂质量不一样，同样按照国标中的配方琼脂含量1.5%， 有些琼脂凝固很快，有些凝固慢一些，还有环境温度偏低，琼脂凝固也会快一些，要根据实际情况，适当调整琼脂的含量，在室温较低时我们所配的培养基琼脂 用量就偏少一些，还有在倒平板和混匀时动作要快一些，室温实在太低，也可以把培养皿放到烘箱中适当加热一下（40度左右）。六、避免气泡：还有同学反映在倒平板时会产生气泡，主要遵守以上各点，加热不要过高，融化即可，加强操作练习，还有就是倒的时候要慢点，最好能够贴着平皿的壁倒下去。

微生物检验过程中检出的微生物应该进行微生物鉴定，虽然药典里明确了鉴定到什么水平的标准和一些基础内容操作方法。但是因为实验室能力有限，很多实验室要么消极抵抗要么稀里糊涂的要么完全委外。其实我们一般微生物实验室自己还是可以做一些工作，特别是细菌的鉴定。再就是菌种鉴定时，不是直接拿来就鉴定，需要一些预先做一些处理或判断。现将一些基础知识进行总结如下：一、相关定义1、生理生化鉴定：根据微生物对各种生理条件（温度、pH、氧气、渗透压）、生化指标（唯1碳氮源、抗生素、酶、盐碱性）代谢反应进行分析，并将结果转化成软件可以识别的数据，进行聚类分析，与已知的参比菌株数据库进行比较，最终对未知菌进行鉴定的一种技术。2、革兰氏染色：系细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，染色后细菌与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，而用以分类鉴定。3、平板划线法：系指把杂菌样品通过在平板表面划线稀释而获得单菌落的方法。4、氧化酶试验：氧化酶不直接与氧化酶试剂起反应，而是先使细胞色素C氧化，然后此氧化型细胞色素C再使对苯二胺氧化，产生颜色反应而进行的试验，用于区分不发酵的革兰阴性杆菌（氧化酶阳性）和肠道菌（氧化酶阴性）。5、触酶试验：大多需氧和兼性厌氧菌均产生过氧化氢酶，但链球菌属阴性，故常用此试验来鉴定，用于区分葡萄球菌(过氧化氢酶阳性）和链球菌(过氧化氢酶阴性）。6、凝固酶试验：用于区分凝固酶阴性葡萄球菌（可推测为非致病性）和凝固酶阳性葡萄球菌(很可能为致病性）。二、工作程序1、微生物鉴定程序微生物鉴定的基本程序包括分离纯化和鉴定，鉴定时一般先将待检菌进行初步的分类。鉴定的方法有表型微生物鉴定和基因型微生物鉴定，根据所需要达到的鉴定水平选择鉴定方法。目前实验室室进行表型微生物鉴定后可以用API试剂条进行或其他等效的试剂条进行菌种鉴定，如API试剂条鉴定不能满足要求时采取委外鉴定。注：为了控制成本，可以自己进行鉴定，不具备能力时再委外。API鉴定用的试剂条的效期有限，需要注意效期或跟供应商做好沟通备货。1.1 待检菌的分离与纯化微生物鉴定的第一步是待检培养物的分离纯化，最常用的分离纯化方法是挑去待检菌的纯培养物（单个菌落），必要时可进一步进行纯培养，为表型鉴定和随后的鉴定程序提供足够量的菌体。从药物原材料、制药用水、生产环境、中间产品和最终产品的样品中检出的受损微生物，经分离纯化程序使其由不利生存易产生变化的状态变为在营养富集和最佳培养温度条件下生存的稳定状态，以保证鉴定结果的准确性，具体详见表1。表1待检菌的分离与纯化明细表1.1.1 平板划线法平板划线方法一般通过连续画蛇形曲线或四区划线方法进行。四区划线具体步骤如下：先在平皿上做好标识，然后在选择所获得的新鲜菌种进行划线；左手持无菌平板，拇指和食指控制皿盖，其余指控制皿底，打开皿盖，用接种环在皿上进行划线，一区要连续紧密的几根平行线（如果菌量过多可以更换接种环），二区紧着着一区的最后一根线带出来，划几根平行线，然后三区、四区同样的操作，四区应尽量避免接触到菌落密集区，影响单菌落的形成；最后再选择适宜的温度进行培养。1.1 .2 稀释倒平板法首先把微生物悬液作一系列的稀释（如1:10、1:100、1:1000、1:10000），然后分别取不同稀释液少许，与已熔化并冷却至50℃左右的琼脂培养基混合，摇匀后，倾入灭过菌的培养皿中，待琼脂凝固后，制成可能含菌的琼脂平板，保温培养一定时间即可出现菌落。如果稀释得当，在平板表面或琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落，这个菌落可能就是由一个细菌细胞繁殖形成的。随后挑取该单个菌落，或重复以上操作数次，便可得到纯培养。1.1.3 涂布平板法因为将微生物悬液先加到较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，且采用稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微生物学研究中常用的纯种分离方法是涂布平板法。其做法是先将已熔化的培养基倒入无菌平皿，制成无菌平板，冷却凝固后，将一定量的微生物悬液滴加在平板表面，再用无菌玻璃涂棒将菌液均匀分散至整个平板表面，经培养后挑取单个菌落。1.2 初筛实验常规的微生物鉴定，一般要先进行初筛试验确定待检菌的基本微生物特征，将待检菌进行初步分类。常见的初筛试验包括革兰氏染色、芽孢染色、镜检观察染色结果和细胞形态、重要的生化反应等。1.2.1 革兰氏染色原理：检查细菌细胞壁的渗透性，染色前所有细胞是透明的，结晶紫着色后用碘增加染料与菌体结合，乙醇从G(-)菌体洗脱结晶紫，用番红液复染，革兰氏阴性菌呈粉红色，革兰氏阳性菌呈蓝紫色。染色步骤：一般按照染色液说明书规定进行染色，如说明书无明确说明时按以下步骤进行染色。结晶紫初染，在载玻片上滴一小滴纯化水，用灼烧过的接种针挑取少量细菌，置载玻片的水滴中与水混合并涂抹开，涂抹要均匀平坦，涂抹后直径约为1 cm的薄层。将载玻片在火焰上方快速来回通过一两次，以载玻片的加热面接触手背皮肤，不觉过烫为佳，待冷却后再在火焰上方来回通过一两次，再冷却，重复操作直到薄层干燥为止；在制好的片上滴一滴草酸铵结晶紫，染色1 min后用水洗；碘液媒染，加碘液一滴，作用1 min后用水冲洗，用过滤纸吸干；乙醇脱色，用95%乙醇脱色，脱色时间大概为30 s。水洗后用过滤纸吸干；番红复染，滴加0.5%的番红染色液一滴，染色10～30 s后，用自来水冲洗。镜检：先低倍镜，再高倍镜，最后油镜观察，观察菌落形态与菌落颜色，菌落呈红色即革兰氏阴性菌，呈蓝紫色为革兰氏阳性菌。1.2.2 芽孢染色一般按照染色液使用说明进行芽孢染色。如无明确说明时按以下步骤进行芽孢染色。涂片，先在载玻片上滴一滴纯化水，用接种环灼烧过的接种针挑取少量细菌，置载玻片的水滴中与水混合并涂抹开，涂抹要均匀平坦，涂抹后直径约为1 cm的薄层。干燥固定，将载玻片在火焰上方快速来回通过一两次，以载玻片的加热面接触手背皮肤，不觉过烫为佳，待冷却后再在火焰上方来回通过一两次，再冷却，重复操作直到薄层干燥为止。孔雀绿覆盖，用木夹夹住载玻片一端，加数滴5%孔雀绿染液覆盖涂片，在微火上加热至染料冒蒸汽并开始计时，维持5min。冲洗，待玻片冷却后，用缓流自来水冲洗载玻片背面，直至流出的水无色为止。复染，用0.5%番红染液覆盖玻片，保持3min。  水洗干燥，用缓流自来水冲洗载玻片背面，直至流出的水无色为止，使其自然干燥。镜检，观察菌落是否含有芽孢。1.2.3 氧化酶试验（革兰氏阴性杆菌）革兰氏阴性菌，做氧化酶试验。取将待检菌落于无菌的滤纸片上，滴加一滴氧化酶试剂，反应3分钟，出现紫色为阳性，反之为阴性。1.2.4 非发酵菌鉴定接种前把OF培养基在沸水浴溶解，在室温冷却后,每试验分装 2个安培的固体OF培养基，利用接种针挑单个菌落,穿刺到OF培养基(深度约1cm.)，把其中一个已接种好的安培(OF.F),用石蜡油覆盖1cm. 把两个安培盖上塑料帽,培养35-37°C , 24 – 48小时。结果判定：两瓶均为黄色，则为发酵菌，则为发酵菌，两管培养基一瓶显示绿色F-，一瓶显示黄色O+。1.2.5 触酶试验（革兰氏阳性菌）玻片法：挑取被捡菌落于玻片上，直接用试剂进行乳化，5s内产生气泡即为阳性结果，反之为阴性。1.3 表型微生物鉴定表型微生物鉴定依据表型特征的表达来区分不同微生物间的差异，是经典的微生物分类鉴定法，以微生物细胞的形态和习性表型为主要指标，通过比较微生物的菌落形态、理化特征和特征化学成分与典型微生物的差异进行鉴别。微生物分类中使用的表型特征如表2。表2 微生物分类中使用的表性特征表

湿热灭菌的原理：是使微生物的蛋白质及核酸变形导致其死亡。这种变形首先是分子中的氢键分裂，当氢键断裂时，蛋白质及核酸内部结构被破坏，进而丧失了原有功能。湿热灭菌法是在饱和蒸汽或沸水或流通蒸汽中进行灭菌的方法。以高温高压水蒸气为介质，由于蒸汽潜热大，穿透力强，容易使蛋白质变性或凝固，最终导致微生物的死亡，所以灭菌效率比干热灭菌法高。湿热灭菌是应用最广泛的一种灭菌方法，它具有灭菌可靠，操作方便，易于控制和经济等优点，是药物制剂生产过程中最常用的灭菌方法。湿热灭菌法可分为：煮沸灭菌法、巴氏消毒法、高压蒸汽灭菌法、流通蒸汽灭菌法、和间歇蒸汽灭菌法影响因素主要有：1）细菌的种类与数量：不同细菌的不同发育阶段对热的抵抗力有所不同。细菌数越少，灭菌时间越短。2）蒸汽的性质：蒸汽有饱和蒸汽，湿饱和蒸汽和过热蒸汽。饱和蒸汽热含量较高，热穿透力较大，因此灭菌效力高。湿饱和蒸汽带有水分，热含量较低，穿透力差，灭菌效力较低。过热蒸汽温度高于饱和蒸汽，但穿透力差，灭菌效率低。流通蒸气灭菌法：是指在常压条件下，采用100摄氏度流通蒸气加热杀灭微生物的方法，灭菌时间通常为30-60分钟。该法适用于消毒以及不耐高热制剂的灭菌，但不能保证杀灭所有芽孢，是非可靠的灭菌方法。  间歇蒸汽灭菌法：利用反复多次的流通蒸汽加热，杀灭所有微生物，包括芽胞。方法同流通蒸汽灭菌法，但要重复3次以上，每次间歇是将要灭菌的物体放到37℃孵箱过夜，目的是使芽胞发育成繁殖体。若被灭菌物不耐100℃高温，可将温度降至75℃～80℃，加热延长为30～60分钟，并增加次数。适用于不耐高热的含糖或牛奶的培养基。高压蒸汽灭菌法：103.4千帕蒸汽压温度达121.3℃，维持15-20分钟。湿热灭菌法 湿热法可在较低的温度下达到与干热法相同的灭菌效果，因为：①湿热中蛋白吸收水份，更易凝固变性；②水分子的穿透力比空气大，更易均匀传递热能；③蒸汽有潜热存在，每1克水由气态变成液态可释放出529卡热能，可迅速提高物体的温度。3）介质的性质：制剂中含有营养物质，如糖类、蛋白质等，增强细菌的抗热性。细菌的生存能力也受介质PH值的影响。一般中性环境耐热性最大，碱性次之，酸性不利于细菌发育。4）物品的性质与灭菌时间：一般来说，灭菌温度越高灭菌时间越短。湿热灭菌法一般采用121℃，灭菌20-30min，如果是产孢子的微生物则应采用灭菌后适宜温度下培养几小时，再灭菌一次，以用于杀死刚刚萌发的孢子。但考虑到被灭菌物的稳定性，应在达到有效灭菌的前题下可适当降低灭菌温度或缩短灭菌时间。（1）流通蒸气灭菌法：是指在常压条件下，采用100摄氏度流通蒸气加热杀灭微生物的方法，灭菌时间通常为30-60分钟。该法适用于消毒以及不耐高热制剂的灭菌，但不能保证杀灭所有芽孢，是非可靠的灭菌方法。（2）间歇蒸汽灭菌法：利用反复多次的流通蒸汽加热，杀灭所有微生物，包括芽胞。方法同流通蒸汽灭菌法，但要重复3次以上，每次间歇是将要灭菌的物体放到37℃孵箱过夜，目的是使芽胞发育成繁殖体。若被灭菌物不耐100℃高温，可将温度降至75℃～80℃，加热延长为30～60分钟，并增加次数。适用于不耐高热的含糖或牛奶的培养基。（3）高压蒸汽灭菌法：103.4千帕蒸汽压温度达121.3℃，维持15-20分钟。湿热灭菌法 湿热法可在较低的温度下达到与干热法相同的灭菌效果，因为：①湿热中蛋白吸收水份，更易凝固变性；②水分子的穿透力比空气大，更易均匀传递热能；③蒸汽有潜热存在，每1克水由气态变成液态可释放出529卡热能，可迅速提高物体的温度。湿热灭菌法一般采用121℃，灭菌20-30min，如果是产孢子的微生物则应采用灭菌后适宜温度下培养几小时，再灭菌一次，以用于杀死刚刚萌发的孢子。（4）巴氏消毒法：利用病原体不是很耐热的特点，用适当的温度和保温时间处理，将其全部杀灭。巴氏灭菌法主要为牛奶的一种灭菌法，既可杀死对健康有害的病原菌又可使乳质尽量少发生变化。巴氏杀菌不可能杀死所有细菌，它只能将致病菌的数量降低到对消费者不会造成危害的水平。巴氏灭菌法除牛奶之外，也可应用于发酵产品

　　样品取样的要求　　1）在取样之前应确认货、证是否相符。　　2）取样过程中应避免与水等环境的不良因素影响，防止样品被污染。　　3）取样用具（如注射器、采血管、试管、探子、铲子、匙、取样器、剪子、样品袋等）必须是经过灭菌的。　　4）对采集的样品一般要求随机取样。若怀疑最有可能受病原体污染或者带有bin原体的样品，可以进行选择取样。　　5）根据样品种类（如盒装、袋装、瓶装和罐装），应取完整密封的样品。如果样品很大，则需用无菌取样器取样；若样品是粉末，应边取边混合；若样品是液体的，通过振摇即可混匀；若样品是冷冻的，应保持冷冻状态（可放在冰内、冰箱的冷盒内或低温冰箱内保存），而非冷冻动物产品须保持在0℃~5℃中保存。　　6）取样前或取样后应在盛装样品的容器或样品袋上立即贴上标签，每件样品必须标记清除（包括品名、来源、数量、取样地点、取样人及取样日期）。　　7）获取有关取样产品的信息：如样品名称、批量大小、包装类型、包装容器体积、生产线、产品编号或控制号、批量号、标签内容、包装破损状况、产品存放地点或建筑物的基本情况等。　　8）当客户对所规定的取样程序有偏离、添加或删节的要求时，应详细记录这些要求和相关的取样资料，并记入包含检测结果的所有文件中，同时告知相关人员。　　9）当取样作为检测一部分时，实验室应有程序记录与取样有关的资料和操作。这些纪录应包括所用的取样程序、取样人的识别、环境条件（如果相关）、必要时有抽样地点的图示或其他等效方法，如果合适，还应包括取样程序所依据的统计方法。

冷冻干燥菌种的转接技术建议用下列方法恢复培养冷冻干燥保藏的菌种。一、安瓶管开封1．用浸过70％酒精的脱脂棉擦净安瓿管。2．用火焰将安瓿管顶端加热。3．滴无菌水至加热的安瓿管顶端使玻璃开裂。4．用挫刀或镊子敲下已开裂的安瓿管的顶端。二、菌株恢复培养1．用无菌吸管，吸取0.3～0.5ml适宜的液体培养基，滴人安瓿管内，轻轻振荡，使冻于菌体溶解呈悬浮状。2．取0.1～0.2ml菌体悬浮液，移植于适宜的琼脂斜面／平板培养基上，剩余的菌液，注入适宜的液体培养基内，然后在建议的温度下培养。3．若未能活化，或活化后有疑问时，请于收到菌种1个月内，通知保藏中心，经查证无误后，即免费补寄。三、注意事项1．菌种活化前，请将安瓿管保存在6一10℃的环境下。2．厌氧菌的培养，如无特别说明，自开封至接种完成，均需以无氧气体充填，以保持厌氧状态。3．某些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，需连续两次继代培养才能正常生长，此时请将步骤二(2)重复一次。液氮超低温保藏程序1、容器的选择：使用带螺旋盖的2ml塑料安培瓶。2、检查安培瓶是否渗漏：用0.05%的亚甲基蓝水溶液在4℃浸泡30-45分钟，冲洗干净，弃去含有蓝色染料的安培瓶，其余的安培瓶备用。3、打印标签（激光打印）。4、容器的灭菌：先用蒸馏水漂洗干净安培瓶，再用蒸馏水在灭菌锅中121℃浸泡灭菌15分钟，干燥并将打印好的标签放入安培瓶中，略拧紧螺旋盖，再行121℃灭菌30分钟。5、保藏菌菌龄：处于最大生长量阶段或对数生长期后期。6、保护剂：选用5-10%的甘油或二甲基亚砜作保护剂。1）甘油的准备：在121℃灭菌15分钟，2-8℃贮存。甘油一般以两倍最终所需浓度的水溶液保存，然后与同等量的细胞悬液混合。若不用细胞悬液，则以最终所需浓度的水溶液保存。2）二甲基亚砜：用0.22um的聚四氟乙烯过滤膜过滤除菌。过滤膜预先用甲醇和二甲基亚砜漂洗。无菌的二甲基亚砜以10-15ml装量2-8℃避光保存。7、分装：在无菌条件下，将细胞悬液（从平板上打下直径为5cm的菌块）分装于安培瓶中，并注入保护剂，拧紧螺旋盖。8、将安培瓶固定在铝夹上，贴好标签。为了便于取用，一般一个铝夹上仅放一个菌株。9、将控温系统先预冷到4℃，再将铝夹放入其中。以每分钟1℃降温至-40℃，然后以每分钟10℃降温至-90℃。降温以后，将铝夹转移至处于液氮中的储存器中保存。10、菌种的复活：将液氮保藏的菌种取出，迅速放入37℃水浴中解冻。一般需2至2.5分钟,等完全解冻后，再及时转接到合适的培养基中培养。

从实验室的室内环境来看，能导致急剧温差和湿度过大的情况几乎不存在，这样对温湿度调节器的短期控制程度要求很高，要从降温、加热、加湿和除湿这几种方式来严格控制。与此同时，从外部环境来看，实验室室内的温湿度变化会受外部条件的影响，例如地域的气候特点、白天和黑夜的温差、各种特殊天气的影响，产生温湿度的高低变化。因此，要保证温湿度的平衡和达到实验标准，实验室需要密封隔绝外部环境任何有可能导致室内空气变化的突发情况，严格要求管理人员定时换送新鲜空气的时机，禁止出现人员的过失对室内环境的污染，对照明设备、精密仪器的使用环境进行测温，以保证室内温湿度达到规定的偏差。特别是对实验室的相对湿度变化进行严格的控制，因为实验室的空气不存在其他条件导致出现温湿度差异，而空气的温度只要变动了1.0℃，就会导致相对湿度出现大幅度的变化，影响室内仪器的正常运作。甚至只是0.2℃的温差，也会引起大于0.5%的湿度变化。因此，对温湿度非常敏感的实验室，需要使用专业的传感器来严格控制偏差，尤其是对湿度的精准监测。传感器有两种，一种是温度传感器，相对精准；另一种是湿度传感器，在一定的条件下会失准，必须定时监测空气的湿度来确保精准。于此同时，构造实验室的时候还要注意整个温湿度控制区域的均匀度。温度要求试剂室 温度10-30℃，湿度35-80%样品存放室 温度10-30℃，湿度35-80%天平室 温度10-30℃，湿度35-80%水分室 温度10-30℃，湿度35-65%红外室 温度10-30℃，湿度35-60%中心实验室 温度10-30℃，湿度35-80%留样室 温度10-25℃，湿度35-70%

凝胶过滤层析又称凝胶排阻色谱, 分子筛色谱法, 凝胶过滤法等。利用凝胶过滤介质为固定相，根据物料中溶质相对分子质量的差异的液相色谱法。只依据尺寸大小分离，大组分最先被洗提出。色谱固定相是多孔性凝胶，只有直径小于孔径的组分可以进入凝胶孔道。大组分不能进入凝胶孔洞而被排阻，只能沿着凝胶粒子之间的空隙通过，因而最大的组分最先被洗提出来。小组分可进入大部分凝胶孔洞，在色谱柱中滞留时间长，会更慢被洗提出来。溶剂分子因体积最小，可进入所有凝胶孔洞，因而是最后从色谱柱中洗提出。这也是与其他色谱法最大的不同。凝胶过滤层析常见问题解答：1. 色谱峰对称性差出峰上升时，上升缓慢是填料装填过紧，而拖尾是因为装填的太松，此时对称因子及柱效都很差，出现这种情况就要重现装柱。装柱前要了解填料的压缩系数（压缩因子）如Focurose FF系列的填料的压缩系数是1.15，且装完后要测柱效。2. 柱床有裂缝或干涸等塌柱现象检测管路及柱床体系是否有泄露或气泡，必要时重现装柱。3. 分离度差(1) 样品和选择的填料不匹配待分离的样品中目标物质和其它杂质的分子量小于2倍且都在选择的填料的排阻极限之外或者之内。若样品中目标物质的分子量和其它杂质的分子量小于2倍时，建议尝试其它方法分离，反之选择凝胶过滤层析时，填料的选择应根据样品中目标分子的大小选择最接近（大或小都可以）目标分子排阻极限的填料进行分离。(2) 柱床装填的效果差通过测柱效等方式确保柱床装填的满足凝胶过滤层析的过程。(3) 上样量过大根据样品中目标物质和杂质的分子差异优化上样量，如脱盐等样品中目标分子和杂质的分子量大于50倍时，上样量可以达到柱床体积的25%，最高不超过30%，若样品中目标分子和杂质的分子量差异在2-5倍时，通常上样量控制在柱床体积的5%以内。(4) 流速过快凝胶过滤的过程流速不宜过快，降低流速在一定程度上可以提高分离度。(5) 层析填料被污染或老化随着填料的使用，一些杂质的积累会使层析填料的孔径发生变化（如堵塞，非特异性吸附积累，微生物污染，破碎等），导致其排阻能力发生偏差而影响分离度。此时可对填料进行CIP清洗，若清洗后还不能达到分离要求，就要更换新的填料。(6) 样品自身的问题样品粘度过大也会导致分离度下降，粘度大的样品在凝胶过滤时要对其进行稀释处理在凝胶过滤；样品中目标物质和其它杂质的非特异性结合或者作用力，此时就要尝试添加一些添加剂（如2%的Triton x-100,150mM NaCl等），减少样品中各组份之间的作用力；样品的pH，离子强度对某些填料的柱床体积会产生一些影响，也会影响分离度，必要时可以优化样品的缓冲液。4、反压大，液流慢凝胶过滤层析柱的装填应控制在60-100cm，太低影响分离度，太高反压增大。另外填料的清洁程度及样品的粘度，pH，离子强度也会影响液流速度。

　　开展 PCR 应具有一定的条件。需要一个正规的 pCR 实验室，采集标本、核酸提取、扩增及产物分析应在不同的房间进行；需有严密的防污染措施、假阳性和假阴性结果的质控等。实验者应具有一定的分子生物学理论知识及实验技能，能够及时发现和纠正实验中的问题。目前，我国在 PCR 应用中尤其是在临床诊断中存在问题较多，主要表现为： PCR 试剂的考核、审查工作薄弱，许多单位实验条件不符合要求，部分操作人员的理论和实验知识水平较低。 PCR 的应用范围过宽等，因此造成 PCR 实验结果的可靠性差，出现较多的假阳性、假阴性结果。　　一、假阳性：　　实验中设立的阴性对照可提示有无假阳性结果出现。如果一次实验中的几个阴性对照中出现一个或几个阳性结果，提示本次实验中其它标本的检测结果可能有假阳性。造成假阳性的原因包括样品污染、扩增试剂污染、扩增产物交叉污染等。常见的污染来源包括实验室环境、加样器、操作中形成的喷雾、 DNA 抽提仪器、试剂及任何与扩增产物接触的东西。预防措施：(1)工作区隔离。(2)改进实验操作，如在加样过程中避免试剂飞溅、吸头离心管使用前高压处理、试剂分装成小份一次使用后弃去等。(3)操作程序合理化，如后加阳性对照等。　　交叉污染的处理方法： 交叉污染指扩增产物对将要扩增的样品或反应管的污染。由于 PCR 的敏感性和效率特别高，所以少量的扩增产物污染标本或反应管即可出现假阳性。交叉污染的处理方法包括 ：　　1 ．在 DNA 模板和多聚酶加入前，紫外线照射反应管内容物以破坏污染的 PCR 产物。一般选用波长 254nm 照射 30min （ Nature ， 1990 ， 34:27 ）　　2 ． PCR 实验中使用 dUTP ，而不用 dTTP 。在扩增前使用 UraciI N 一 g1ycosylase （尿嘧啶糖基化酶）处理可降解交叉污染的 PCR 产物，而不降解基困组 DNA 模板，然后热灭活此酶，再进行扩增反应（ Gene ， 1990 ， 93 ： 125 ）。美国 PE 公司提供此类试剂盒（ PCR carry-over preventionkit 。　　3 ．在 PCR 反应前加入一种光化学试剂，反应完成后激活该试剂，光化学试剂可交联 DNA 链，使之不能再扩增（ Nucleic Acids Res ， 1991 ， 19 ： 99 ）。　　二、假阴性：　　如果实验中设置的阳性对照未能扩增成阳性结果，提示本次实验中可能有假阴性结果。但这里应注意，许多国产 PCR 试剂盒中阳性对照采用质粒 DNA ，和标本相比来说，不需纯化提取核酸的步骤，因此，如果在标本核酸纯化提取步骤有问题，即使阳性对照均呈阳性，标本检测中还可能有假阴性。　　造成假阴性的原因包括: (1) DNA 抽提过程不当。 (2) DNA 样品中含有 Taq 聚合酶抑制剂，如尿素、 DMSO 、 SDS 等物质，可抑制 Taq 酶活性， DNA 样品中的蛋白质和重金属离子等亦影响 Taq 酶活性，尤其是含有较多脓液或分泌物的标本，其中虽有待查菌，但却因标本处理不当而出现假阴性 。　　设置内对照是判断假阴性较好的指示系统。在每一反应管中加入内对照，若内对照未能扩增出来，说明该反应管的结果可能有问题。　　三、PCR产物的鉴定　　PCR 产物通过琼脂糖凝胶电泳可判断其长度是否为预期的长度，但只有通过杂交试验或序列分析等才能判断其特异性。严格说来， PCR 产物均应通过实验证实其特异性。在我国一些科研论文和临床检测中缺乏这一环节。　　综上所述， PCR 具有其优点，但也有不足之处，它是一种很好的科研手段，但作为常规诊断方法尚需进一步改进和提高。目前的关键问题是如何正确应用 PCR 。虽然 PCR 尚未在包括美国等发达国家作为常规诊断方法，但如果具备开展 PCR 需要的条件， PCR 是可作为辅助诊断手段使用的。目前，只有针对 PCR 应用中存在的问题，采取措施，正确应用 PCR ，才能使这一技术在科研和临床工作中发挥应有的作用。

一、标准品和对照品的概念对照品指用于鉴别、检查、含量测定和校正检定仪器性能的标准物质。标准品指用于生物检定、抗生素或生物药品中含量或效价测定的标准物质，以效价单位(U)表示。国家标准品及生物参考品系指用于鉴别、检查含量或效价测定的标准物质，其制备与标定应符合:“生物制品国家标准物质制备和标定规程”要求，并由国务院药品监督管理部门指定的机构分发。企业工作标准品或参考品必须经国家标准品或参考品标化后方能使用。对照品系指用于生物制品理化等方面测定的特定物质，由生产单位采用与制品生产工艺相同的方法制备。对照品应尽可能与制品原液配方一致，稳定性较差的，可加不含对测定有干扰物质的适宜稳定剂。对照品由国家药品检定机构审查认可，其标准应不低于制品的质量标准。国家药品标准物质是国家药品标准的物质基础，它是用来检查药品质量的一种特殊的专用量具;是测量药品质量的基准;也是做为校正测试仪器与方法的物质标准;在药品检验中，它是确定药品真伪优劣的对照，是控制药品质量必不可少的工具。目前，中国药品生物制品检定所已能提供各类国家标准物质1242种，其中中药化学对照品288种，对照药材400种，两者占总数的一半以上。国家药品标准品、对照品系指国家药品标准中用于鉴别、检查、含量测定、杂质和有关物质检查等标准物质，它是国家药品标准不可分割的组成部分。二、标准品、对照品种类生物制品标准物质分为二类：1、国家生物标准品系指用国际标准品标定的，或我国自行研制的(尚无国际生物标准品者)用于定量测定某一制品效价或毒性的标准物质，其生物活性以国际单位(IU)或以单位(U)表示。2、国家生物参考品国家生物参考品系指用国际参考品标定的，或我国自行研制的(尚无国际参考品者)用于微生物(或其产物)的定性鉴定或疾病诊断的生物试剂、生物材料或特异性抗血清;或指用于定量检测某些制品的生物效价的参考物质，如用于麻疹活疫苗滴度或类毒素絮状单位测定的参考品，其效价以特定活性单位表示，不以(IU)表示。三、如何区分对照品与标准品对照品与标准品是2个不同的概念，中国药典凡例中已有明确的定义：对照品系指用于鉴别、检查、含量测定和校正检定仪器性能的标准物质，而标准品系指用于生物检定、抗生素或生物药品中含量或效价测定的标准物质，以效价单位(U)表示。文献中常将2种概念混淆，认为对照品就是标准品，是1种物质2种提法而已，造成错误的原因，可能是有的药品既有对照品，又有标准品。例如当用微生物法测定头孢克罗效价时，用头孢克罗标准品，用高效液相色谱仪HPLC或紫外分光光度计UV法测定时，则用对照品;非那西丁当用作熔点校准物质时，用熔点标准品，测定含量时用对照品。即使是同一种物质的标准品和对照品，它们的规格、标定方法以及用途都可能是不同的。对照品或标准品混用，即将对照品或标准品用于不是其标定方法的含量测定，是药品检验中经常出现但未引起重视的一个问题。尽管同一批对照品不同标定方法的含量有很好的相关性，但并不完全相同，有时差别会很大。如英国Glaxo公司提供的头孢呋肟酯对照品，HPLC标定为96.9%，供含量测定用;UV为98.8%，供溶出度测定。虽然中国药典凡例明确规定卫生部所发对照品仅用于正文中所规定的分析方法。但由于：(1)卫生部提供的对照品使用说明书不够详尽，大多无对照品质量要求及标定方法;(2)对对照品或标准品的正确使用缺乏认识;(3)日常科研中极难找到相应的对照品;(4)中国药典正文中也常存在对照品混用的问题，如常将含量测定用的标准品或对照品用于溶出度检查，而含量测定方法与溶出度分析方法又不同，故极易引起混用。

酵母浸粉的介绍：酵母浸粉又称酵母提取物，是采用新鲜酵母经酵母自溶、过滤、 浓缩、喷雾干燥而得到的一种浅黄色至类白色 干燥粉末。有酵母自然 香味，易溶于水，水溶液呈淡黄色。酵母浸粉极具吸湿性，请放阴凉干燥处保存。酵母浸粉当中含有氨基酸类、肽类、水溶性维生素、及酵母多糖、酵母核酸组成的一种混合物，酵母浸粉当中含有丰富的B族维生素和各种氨基酸。核苷酸类、有机酸类、矿物质类及维生素类的水溶性物质。在当中它起的主要作用是补充氮源和提供细菌生长的各种维生素及氨基酸。酵母浸粉主要用于微生物培养基制备的基础原材料以及生物制药发酵原料。1、酵母提取物、酵母浸出物都是一类产品吗？答：酵母提取物与酵母浸出物广义上讲是同一类产品，主要用于生物发酵以及配制微生物培养基的基础原料。酵母提取物通常称为酵母浸出物，有自己的生产工艺与质量标准体系。2、酵母粉和酵母浸粉是一个产品吗?答：很多人把酵母浸粉叫做酵母粉，但其实两者是不同的产品。酵母粉是经过高温干燥失去活性的酵母菌体；而酵母浸粉是酵母经过自溶酶解、分离、真空浓缩、喷雾干燥等工序精制而成。3、酵母浸出物的主要成分是什么？答：酵母浸出物富含蛋白质、氨基酸类、肽类、核苷酸、B族维生素、微量元素等。主要作用是补充氮源和提供微生物生长的各种维生素及氨基酸及生长因子。4、酵母浸粉和酵母浸膏有什么区别？答：都属于酵母浸出物的不同产品形态，对于酵母浸出物产品而言，酵母浸粉经过高温瞬时干燥所损失的营养成分比酵母浸膏长时间浓缩所损失的营养要少得多，所以酵母浸粉在实际使用中用量更经济，且使用方便，也更易于运输和保存。

传统检测有三种方法1、直接显微镜观察，正常情况，在一定的培养条件下（相同的培养基、温度以及培养时间），同种微生物表现出稳定的菌落特征。可以通过显微镜观察菌落特征对微生物种类进行判断。2、选择培养基培养微生物或人为提供有利于目的菌株生长的条件，选择培养基，其作用是允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他微生物生长。选择培养一般是通过观察微生物的同化作用类型或某一特征进行间接判断，得到的微生物往往并不只有一种，但是能够大致确定这些微生物存在的共有特征从而对其分类。3、鉴别培养基，根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品。与选择培养相比，鉴别培养基的鉴别所得结果的范围比较小，一般可直接测定某微生物的种类。现代定义微生物：个体难以用肉眼观察的一切微小生物之统称。微生物包括细菌、病毒、真菌、和少数藻类等。（但有些微生物是肉眼可以看见的，像属于真菌的蘑菇、灵芝等。）病毒是一类由核酸和蛋白质等少数几种成分组成的“非细胞生物”，但是它的生存必须依赖于活细胞。根据存在的不同环境分为空间微生物、海洋微生物等，按照细胞机构分类分为原核微生物和真核微生物。主要特征1、体小面大2、吸多转快3、生长繁殖快微生物的这一特性使其在工业上有广泛的应用，如发酵、单细胞蛋白等。微生物是人类不可或缺的好朋友。

抗体作为免疫基础实验中常用的试剂，WB、IHC、IF、FC实验应用中都会用到抗体，如何正确使用抗体，其中稀释液的选择非常重要，不同的生产厂家对抗体稀释液的要求都不一样，一般常见的稀释液是自己配置5%脱脂奶粉或者5%BSA溶液。各种抗体稀释液的配置方法和配方！辣根过氧化物酶标记抗体稀释液的配制：1%牛血清白蛋白（稳定剂）；0.1%冷鱼皮明胶（堵）；0.05%硫柳汞（防腐剂）；0.01MPBSpH7.2；注：1）抗体稀释使用该缓冲区可以存储在4oC 6个月未还原的结合活性。2）不要用BSA或其他含血清试剂稀释二抗因为他们可能与牛血清白蛋白或血清抗体的亲和性降低。3）用TBS稀释二抗常常产生较弱的染色。所以用TBS只有抗体高背景染色和碱性磷酸酶标记抗体由于磷酸盐抑制碱性磷酸酶的活性。辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素稀释液：0.01MPBS，pH7.2；0.05%硫柳汞（防腐剂）；注：抗体稀释使用这个缓冲区可以存储在4oC6个月未还原的结合活性。AP链霉亲和素稀释液：0.05TBS，pH值7.60.05%硫柳汞（防腐剂）；注：1）抗体稀释使用该缓冲区可以存储在4oC6个月未还原的结合活性。2）PBS不能因为磷酸盐抑制碱性磷酸酶的活性稀释剂-美联社。荧光染料（AvidinFITC标记的抗生物素蛋白生物素，德克萨斯红，AMCA）稀释缓冲液：0.01MPBS，pH7.20.05%硫柳汞（防腐剂）。原抗体稀释缓冲液：1%牛血清白蛋白（稳定剂和阻塞）；0.1%冷鱼皮明胶；0.05%叠dan化钠；0.01MPBSpH7.2（pH7.6的TBS用于初级抗体稀释液产生弱染色）；注：1）抗体稀释使用该缓冲区可以存储在4oC6个月未还原的结合活性。2）这个缓冲区不能用于稀释辣根过氧化物酶标记抗体的叠dan化钠酶抑制剂。使用时按照抗体效价（或个人优化条件），将适量抗体加入抗体稀释液即可。例如，效价为1：100时，可将10ul抗体加入到1ml抗体稀释液中，充分混匀后即可使用。抗体现用现稀释，稀释后的抗体2-8℃可以短期保存，但抗体的效价会随时间而降低。

日常管理和测试（1）搅拌和充气：光合细菌培养过程中必须充气或搅拌，作用是帮助沉淀的光合细菌上浮获得光照，保持菌细胞的良好生长。小型厌气培养常用人工摇动培养容器的方法使菌细胞上浮，每天至少摇动三次，定时进行。大型厌气培养则用机械搅拌器或使用小水泵使水缓慢循环运转，保持菌体悬浮。微气培养是通过充气帮助菌体上浮，因为培养液中溶解氧含量增加，光合细菌繁殖受到抑制，产量下降，所以必须严格控制充气量。一般采用定时断续充气，充气量控制在1～1.5升/（升·h）之间，溶解氧量保持在1×10-6以下。（2）调节光照度：培养光合细菌需要连续进行照明。在日常管理工作中，应根据需要经常调整光照度。白天可利用太阳光培养，晚上则需要人工光源照明，或完全利用人工光源培养。人工光源一般使用碘钨灯或白炽灯泡。不同的培养方式所要求的光照强度有所不同。一般培养光照强度应控制在2000～5000lx之间。如果光合细菌生长繁殖快，细胞密度高，则光照强度应提高到5000～10000lx。光照强度可通过调整培养容器与光源的距离或使用可控电源箱调节。（3）调节温度：光合细菌对温度的适应范围很广，一般在23～39℃的范围内均能正常生长繁殖，可不必调整温度。在常温下培养也可通过调整，将温度控制在光合细菌生长繁殖最适宜的范围内，使光合细菌更好地生长。（4）酸碱度的测定和调整：在培养光合细菌的过程中，必须注意酸碱度的变化。由于光合细菌的大量繁殖，菌液的pH值上升，这意味着光合细菌正处于指数生长期。但当pH值超过最适范围甚至生长的适应范围时，光合细菌的生长达到顶点，随后生长下降。如果能及时调整菌液的酸碱度，使pH值保持在最适范围，则光合细菌能继续生长繁殖。为了延长光合细菌的指数生长期，提高培养基的利用率和单位水体的产量，测定和调整PH值是非常重要的。一船采用加酸的办法来降低菌液的酸碱度，醋酸、乳酸和盐酸部可使用，最常用的是醋酸。在日常的管理工作中，必须每天或隔天测定菌液的pH值，当pH值上升超出最适范围，即加酸调整。如果在培养过程中不测定、调整酸碱度，当光合细菌的生长达到一定密度后pH值也上升到9以上，细菌生长受阻，此时应采收或再扩大培养。在培养过程中不调整PH值，获得的最终产量低。

1、药敏试验是如何测定的？根据美国临床标准委员会推荐的纸片扩散法测定。将含有一定量抗菌药的纸片贴在涂有细菌的琼脂平板表面，35℃培养过夜，测量纸片周围抑菌圈的大小确定细菌对药物的敏感性，抑菌圈越大敏感性越高。不同细菌对不同抗菌药敏感性的判定标准不同，例如头孢-噻肟对肠杆菌科细菌的抑菌圈≤14mm为R，15mm-22mm为I，≥23mm为S；苯唑西林对金黄色葡萄球菌抑菌圈≤10mm为R，11mm-12mm为I，≥13mm为S。2、药敏试验报告中S、I、R 指的是什么？S ：是指细菌对抗菌药敏感，使用常规剂量时的平均血浓度超过MIC 5倍以上，用常规剂量通常有效；I ：是指细菌对抗菌药中度敏感，常规剂量时平均血浓度等于或略高于MIC，需用高剂量或对体内药物浓缩部位的感染可能有效；R ：是指细菌对某种抗菌药耐药，药物对细菌的MIC 高于应用常规剂量时的血浓度，应用常规剂量治疗通常无效。3、药敏试验中，测试抗菌药物的品种是如何选定的？抗菌药有近200种，药敏试验中没必要也不可能包括每种抗菌药。所测试的抗菌药纸片的种类是根据各类细菌对抗菌药的敏感性及临床可能选用的药物而确定的，同类药物通常只选择1-2个代表品种。NCCLS对各种细菌的药敏试验中宜测试的药物品种进行了推荐，如测定葡萄球菌属的药敏试验应包括苯唑西林、青-霉素、红-霉素、克林-霉素、复方-磺胺甲恶唑（SMZ-TMP）和万古-霉素；此外可根据情况增加其他品种如氯-霉素、环丙-沙星、庆大-霉素、利-福平和呋喃-妥因等。4、为什么肠球菌属细菌药敏报告的测定药物这么少？对头孢-菌素类和多种抗菌药天然耐药，故药敏试验中所包括的抗菌药品种较少，NCCLS 推荐的测试品种为氨-苄西林或青霉-素、万古--霉素（去甲万古-霉素），此外亦可增加庆大-霉素、氯-霉素、红霉-素、利-福平、环丙-沙星和呋喃-妥因等，后两者适用于尿标本。5、细菌对多种抗菌药物敏感时，如何选择最有效药物？应根据感染部位、病情严重程度、药物的抗菌作用及药动学特点选择抗菌药。6、是否所有阳性培养均有临床意义？并非所有阳性培养都是真正的病原菌，原因可能有：①所报告细菌为污染菌，细菌培养结果的临床意义大小与所取标本有关，如为关节液、胸腔积液等无菌标本则临床意义较大，但即使血培养阳性也可能为污染菌，据报道单次血培养凝固酶阴性葡萄球菌、草绿色链球菌、肠球菌阳性，污染可能性分别为85%、52%、22%。某些标本易受污染如痰标本易于受咽喉部携带菌的污染，尿培养易受下尿道、尿道口寄居菌污染。②可能为应用抗菌药后的菌群交替，特别是原为复数菌感染时，针对优势菌治疗一段时间后可能非优势上升为优势菌，广谱抗菌药治疗后可能出现真菌感染，故使用抗菌药时间较长的感染，疗程中需复查细菌培养。此外影响临床疗效的因素很多，据报道药敏试验结果与临床疗效的符合率约为70%，因此细菌培养及药敏试验报告只能作为临床用药的参考，应根据患者用药后的治疗反应和临床病情调整用药。

1、颜色改变单位法（colour change unit,简称CCU）这种方法通常用于很小，用一般的比浊法无法计数的微生物，比如支原体等，因为支原体的液体培养物是完-全透明的，呈现为清亮透明红色，因此无法用比浊法来计数，由于支原体固体培养很困难，用cfu法也不容易计数，因此需要用特殊的计数方法，即CCU法。它是以微生物在培养基中的代谢活力为指标，来计数微生物的相对含量的，下面以解脲脲原体为例，简单介绍其操作：（1）取12只无菌试管，每一管装1.8ml解脲脲原体培养基。（2）在第1管加入0.2ml待测解脲脲原体菌液，充分混匀，从中吸取0.2ml加入第二管，依次类推，10倍梯度稀释，一直到最末一管（3）于37度培养，以培养基颜色改变的最末一管作为待测菌液的CCU，也就是支原体的最-大代谢活力，比如第六管出现颜色改变，他的相对浓度就是10的6次方CCU/ml.一般来说，比浊法和菌落计数法就可以满足绝大多数细菌的计数，但是对支原体这样比较特殊的微生物，用CCU法比较合适。测定微生物生长的方法很多，各种方法均有其优缺点，也不是在任何情况下都适用。在微生物学工作中一般常用的是平皿菌落计数法、计数器法和比浊法。至于哪种方法比较适合你，得根据你的具体条件而定。2、计数器测定法：即用血细胞计数器进行计数。取一定体积的样品细胞悬液置于血细胞计数器的计数室内，用显微镜观察计数。由于计数室的容积是一定的(O.1mm3)，因而根据计数器刻度内的细菌数，可计算样品中的含菌数。本法简便易行，可立即得出结果。本法不仅适于细菌计数，也适用于酵母菌及霉菌孢子计数。3、电子计数器计数法:电子计数器的工作原理是测定小孔中液体的电阻变化，小孔仅能通过一个细胞，当一个细胞通过这个小孔时，电阻明显增加，形成一个脉冲，自动记录在电子记录装置上。该法测定结果较准确，但它只识别颗粒大小，而不能区分是否为细菌。因此，要求菌悬液中不含任何碎片。4、活细胞计数法常用的有平板菌落计数法，是根据每个活的细菌能长出一个菌落的原理设计的。取一定容量的菌悬液，作一系列的倍比稀释，然后将定量的稀释液进行平板培养，根据培养出的菌落数，可算出培养物中的活菌数。此法灵敏度高，是一种检测污染活菌数的方法，也是目前国际上许多国家所采用的方法。使用该法应注意：①一般选取菌落数在30～300之间的平板进行计数，过多或过少均不准确；②为了防止菌落蔓延，影响计数，可在培养基中加入O．001％2，3，5一氯化三苯基四氮唑(TTC)；③本法限用于形成菌落的微生物。广泛应用于水、牛奶、食物、药品等各种材料的细菌检验，是最chang用的活菌计数法。5、比浊法比浊法是根据菌悬液的透光量间接地测定细菌的数量。细菌悬浮液的浓度在一定范围内与透光度成反比，与光密度成正比，所以，可用光电比色计测定菌液，用光密度(OD值)表示样品菌液浓度。此法简便快捷，但只能检测含有大量细菌的悬浮液，得出相对的细菌数目，对颜色太深的样品，不能用此法测定。6、测定细胞重量法此法分为湿重法和干重法。湿重法系单位体积培养物经离心后将湿菌体进行称重；干重法系单位体积培养物经离心后，以清水洗净放人干燥器加热烘干，使之失去水分然后称重。此法适于菌体浓度较高的样品，是测定丝状真菌生长量的一种常用方法。7、测定细胞总氮量或总碳量氮、碳是细胞的主要成分，含量较稳定，测定氮、碳的含量可以推知细胞的质量。此法适于细胞浓度较高的样品。

配方一 各种动物需用的生理盐水哺乳类 需用生理盐水浓度是 0.9% 。称取 0.9 克氯化钠，溶解在少量蒸馏水中，稀释到 100 毫升。鸟类 需用的生理盐水浓度是 0.75% 。称取 0.75 克氯化钠，溶解后用蒸馏水稀释到 100 毫升。两栖类 需用的生理盐水浓度是 0.65% 。称取 0.65 克氯化钠，溶解后用蒸馏水稀释到 100 毫升。配方二 任氏（ Ringer’s ）生理盐水氯化钠 6.5 克 碳酸氢钠 0.2 克氯化钾 0.14 克 磷酸二氢钠 0.01 克氯化钙 0.12 克先把氯化钠、氯化钾、碳酸氢钠、磷酸二氢钠分别溶解在少量蒸馏水中，混合后用蒸馏水稀释到 980 毫升。然后取氯化钙溶解在 20 毫升蒸馏水中，把氯化钙溶液逐滴加入到上述溶液内，边滴、边搅拌，以免产生不溶解的磷酸钙沉淀。此溶液用于变温动物，尤其常用于两栖类。配方三 乐氏（ Locke’s ）生理盐水氯化钠 9.0 克 碳酸氢钠 0.1 ～ 0.3 克氯化钾 0.42 克 氯化钙 0.24 克把氯化钠、氯化钾、碳酸氢钠分别用少量蒸馏水溶解，混合后加蒸馏水到 980 毫升。把氯化钙溶解在 20 毫升蒸馏水里，逐滴加入上述溶液中。以上溶液用于恒温动物，尤其常用于哺乳类。

微生物细胞的固定方法有主要有物理吸附法和包埋法两种.1．物理吸附法带电的微生物细胞和载体之间的静电相互作用,使细胞体吸附固定在硅藻土、木材、玻璃、陶瓷和塑料等载体上.如酵母细胞是带负电的,在固定时要选择带正电的载体.在PH4时,热带假丝酵母、酿酒酵母等在陶瓷表面上的吸附程度较大,载体表面的40~70%被细胞牢固吸附,不会被高流培养液冲掉.载体的性质也影响细胞与载体之间的相互作用,主要是载体的成分、表面电荷、表面积和PH的影响.所有的玻璃和陶瓷都是由不同比例的氧化硅、氧化镁等组成,如将玻璃等放在溶液中,在它的表面会发生离子交换,形成不再是铝、硅等的氧化物,而为相应的氢氧化物.载体表面的羟基可被微生物细胞表面的氨基或羧基所取代,在细胞与载体之间形成键.物理吸附法固定化活细胞的酶活性不受影响,但吸附过程相当复杂,吸附过程与微生物的性质、载体的特性及细胞与载体之间发生的相互作用有关,只有这些参数配合恰当时才能形成稳定的微生物细胞-载体复合物.2．包埋法将微生物细胞用物理的方法包埋在琼脂、海藻酸钠、明胶、聚丙烯酰胺和聚乙烯醇（PVA）等凝胶载体内,使微生物细胞固定化.一般的包埋成形法比较复杂、机械性能差、易磨损、不适于大批量生产.因而近年来一些学者又研究了一种制备珠型固定化细胞技术.1）琼脂凝胶包埋法,称取4g琼脂或琼脂糖溶于50ml 0.2M pH7.0磷酸缓冲液中,加热溶解后,冷却到55℃左右,将细胞浓度为60%左右细菌悬浮液于40℃下保温,然后与琼脂溶液混合均匀.用注射器针头将热的混合液滴入冷的甲苯溶液,四氯乙烯溶液或液体石腊内,冷却形成2~3mm直径的小球.或将热琼脂-细菌混合液流加到搅拌下的500ml30℃的醋酸丁酯中,加完后继续搅拌3分钟,到混合物分散成小滴,迅速加入300ml冷的醋酸丁酯,再搅拌2~5分钟,倾去醋酸丁酯,抽滤干,用缓冲液洗至无醋丁酯味,即制成珠型固定化细胞,小珠约在1~3mm.使用前将球形固定化细胞放入消毒好营养液中30℃活化24小时后再用. 2）海藻酸钙凝胶包埋法 称取2g海藻酸钠,加30ml生理盐水于高压灭菌锅中加热溶解、冷却到40℃,取20ml与20ml细胞浓度为50%的细菌悬浮混合均匀,然后用注射器针头滴加到0.1M氯化钙或4%的氯化钡溶液中,边滴边摇,使其形成2mm直径球型小珠,然后用生理盐水洗涤.或将混合液流加到搅拌下的200~500ml醋酸丁酯中,当分散成小滴后,迅速加入5ml 0.1M的二氯化钙溶液,继续搅拌5~10分钟,自然沉降,倾去醋酸丁脂,再加入50ml 0.1M的二氯化钙溶液,浸泡1小时,进一步固化,然后用蒸馏水彻底洗涤,即得直径为1~3mm珠型固定化细胞.干后可保存于低温下,使用前需放入消毒好的营养液中30℃活化24小时后再用.由于磷酸盐会破坏凝胶的结构,因而在使用海藻酸钠固定细胞时尽量防止磷酸盐的加入.3）明胶包埋法 称取6g明胶,加入50ml 0.1M pH7.0的磷酸缓冲液,加热溶解后冷却至40℃,取20ml与20ml细胞浓度为60%的细菌悬液在40℃混合均匀,冷却凝固后切成1~2mm3方块,然后再加2.5%戊二醛,使包埋块悬浮在戊二醛溶液中,室温下轻轻搅拌4小时进行交联,滤去戊醛后,逐次用0.1M氯化钠和去离子水洗涤后即成.或者将明胶-菌体混合液流加到200ml 20℃搅拌下的醋酸丁酯溶液中,当分散成小珠后,迅速加入5ml 5%的戊二醛溶液,继续搅拌5~10分钟,倾去醋酸丁酯,水洗即得到珠型固定化细胞,再放入50ml的pH5.0的戊二醛溶液中浸泡30分钟,然后彻底洗涤,即获得直径1~3mm的球形小珠.使用前将其放入营养液中30℃活化24小时后再用.用戊二醛交联的明胶包埋法,可获得机械强度及工作稳定性较好的固定化细胞.4）聚丙烯酰胺凝胶包埋法,引此法是较常用的一种包埋法.聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺单体和交联剂甲叉双丙烯酰胺在催化剂作用下聚合形成三维网状结构的凝胶.常用的催化剂和加速剂是过硫酸铵和四甲乙二胺或三乙醇胺.称取17.6g丙烯酰胺和1.2g N—N′—甲叉双丙烯酰胺溶于0.05M pH7.0的Tris-HCl缓冲液中,取20ml与5g的湿菌泥混合均匀,加入50μl的40%过硫酸铵,混合均匀后流加到搅拌的豆油或液体石蜡中,搅拌分散成小滴,迅速加入250μl的四甲基乙二胺,小滴即很快聚合形成小珠,倾去流体,用水或缓冲液充分洗涤即可获得珠型固定化细胞.或将菌泥混合液加入1%过硫酸铵0.25ml和10%三乙醇胺4 ml,将上述混合液搅拌均匀,不要出现气泡,置于40℃恒温浴中30分钟左右,即形成聚内烯酰胺凝胶固定化细胞,在凝胶未干时切成2~3mm3小块,于50~60℃中干燥后保存.使用前将包埋好的固定化细胞放入消毒后的营养液中活化24小时再用.最常用的是包埋法.

选一与欲测组分相近但能完-全分离的组分做内标物（当然是样品中没有的组分），然后配制欲测组分和内标物的混合标准溶液，进样得相对校正因子。再将内标物加入欲测组分的样品中，进样后测得欲测组分和内标物的定量参数。用内标法公式计算即可。内标法是将一定量的纯物质作内标物，加入到准确称量的试样中，根据被测试样和内标物的质量比及其相应的色谱峰面积之比，来计算被测组分的含量。 选择内标物有4个要求：1.内标物应是该试样中不存在的纯物质；2.它必须完-全溶于试样中，并与试样中各组分的色谱峰能完-全分离；3.加入内标物的量应接近于被测组分；4.色谱峰的位置应与被测组分的色谱峰的位置相近，或在几个被测组分色谱峰中间。内标法的优点是测定的结果较为准确，由于通过测量内标物及被测组分的峰面积的相对值来进行计算的，因而在一定程度上消除了操作条件等的变化所引起的误差。内标法的缺点是操作程序较为麻烦，每次分析时内标物和试样都要准确称量，有时寻找合适的内标物也有困难。外标法简便，但进样量要求十分准确，要严格控制在与标准物相同的操作条件下进行，否则造成分析误差，得不到准确的测量结果。内标与外标都是定量的一种方法而已，至于哪一种方法好与不好不能一概而论，做不同的分析，面对着不同的要求，再加上分析成本分析效率等等问题，我想简单而有效进行定量分析来满足要求才是最重要的。1、以前做过很多医药、农药中间体的芳香族卤代化合物的常量定量分析，没有自动进样器，用外标法定量，确实重现性与稳定性非常差，结果经常受到搞合成同事的质疑。其实，仔细分析原因不一定就是外标法不适合这种定量分析，首先我们的实验室仪器和手段是否调整到一种稳定而合理的状态了，比如，衬管是否洁净，玻璃棉的位置是否合适恰当（能否使样品尽可能的汽化）、汽化温度是否合适、色谱峰形是否对称（也就是样品与色谱柱健合相是否匹配）、附近有没有其它色谱峰的干扰、选用什么进样方式（如快速进样还是热针进样）等等因素的影响都需要考虑。如果这些因素都考虑了，按照GMP方法验证对于精密度的要求，同一样品进6针以上的RSD和配制6个样品的定量结果RSD都能满足小于1.5%的要求，那么这个方法用外标法就是完-全适用的，但是前面的影响因素是一定要都考虑到的，否则谈论这个方法是否适用就有失偏颇了。在做过的许多出口产品的定量分析方法当中有许多是一些医药公司提供的比较完善而验证过的方法，内标与外标都有（他们用的都是自动进样）精密度都能满足RSD小于1.5%的要求，当一个方法能够满足测试要求的时候，无论内标外标，都是可行的。当然有一个分析成本和分析时间的问题，内标的成本和控制溶液、样品溶液的配制当然要比外标要高和麻烦一些了。而有些时候，可能受你实验室现有仪器和附属设备的影响，达不到一定的要求，而还必须进行定量分析，有时外标的结果可能就要差一些。这时，你可能就要考虑用内标法了，可以排除手动进样的误差、分流歧视的影响、包括一些未知因素平行误差的影响，这时内标可能就显示出它的优势来了。2、上面已经提到当做方法验证的时候，当同一样品配制6个样品溶液用所选用的外标法进行定量的时候，RSD都满足1.5%的要求时，也分为两种情况，小于1%和大于1%小于1.5%。如果RSD的结果小于1%，那这个方法就没有什么可以怀疑的了；如果RSD的结果大于1%而在1.5%略低一些的范围活动时，这个方法的可行性就将受到质疑，毕竟这是方法验证，你就要考虑上面1所提到的影响因素的影响了，如果排除掉以上的影响因素。RSD还是在1.5%附近，就要尝试内标了，如果内标结果的RSD很好，就证明你的这个方法受实验条件的影响很大，只能用内标了，或者干脆将原方法做大的变动，再尝试用外标法测试。3、而对于微量分析，比如农药和兽药残留的分析、环境分析等，根据不同的限量标准要求对于精密度的要求也比常量分析的要求要宽松的多，RSD有时可以允许达到10%甚至更高，这时可能外标法有更大的应用空间。4、单从精密度方面去考虑，排除其它成本和效率的因素，个人认为还是内标优于外标。曾经做过一个中间体二氨基丙醇的常量定量分析，以二乙醇胺为内标，RTX-5 amine（碱改性） 15m*0.32mm*1.0um色谱柱分析，将配制好的控制溶液（含有内标物）自动进样器进6针，目的物（二氨基丙醇）与内标物（二乙醇胺）峰面积比率的RSD为0.18%。而只对这六针样品的目的物峰（二氨基丙醇）面积求RSD，结果为0.71%，通过这一实例的结果大家就会发现到底哪个方法精密度更好了，当然是内标更好了。当然这个化合物的检测方法最-后根据上面的验证数据用内标和外标定量都是可以的，实验室可以自由选择。但内标与外标精密度结果的差异是显然存在的事实。结论：应用外标法能够满足要求，shou选还是外标法了，毕竟简单而省事。对于精密度要求比较高、结果准确度会产生重大影响、实验室条件不是很理想的等等条件下，用内标法还是必要的。无论应用那种方法，方法的验证和确认都是很重要的，只要是按照程序经过验证和确认的方法，都有其应用的空间的。

无菌实验室在行业内其实也会称之为洁净实验室或生物安全实验室，他主要应用在生物化学、生物医学、基因重组、微生物学等生物学方面的研究实验室。无菌实验室对于洁净度要求十分高，那么在设计以及建造时我们应该注意些什么呢？一、无菌实验室的基本配置1、准备室是配置培养基以及对生物样品基本处理的空间，室内必须要配备有电源、冰箱、电炉、实验台、试剂柜、存放器具以及材料柜和上下水道。2、洗涤室用于清理已经使用过的实验器皿以及相关用具，因为已经使用过的试验器具上会有残留的实验微生物，也有可能会有部分病原微生物存在。所以洗涤室也是必不可少的，并且室内应该配备有洗涮器皿所需要的的盆、桶，肥皂、瓶刷、去污粉等，还应该配有蒸锅和加热器。3、灭菌室顾名思义是用于消灭菌群的实验空间，主要用于培养基灭菌以及各类器皿上的灭菌，室内配备应有高压蒸汽灭菌器以及烘箱等设备。4、无菌室是接种室的学名，主要是做纯化菌种和系统接种等无菌操作的空间。菌种的接种和移植是微生物实验中的重要步骤，这项步骤一定要保证的就是防止杂菌污染、以及菌种的纯种，普通环境下的杂菌以及灰尘过多，不适合操作无菌试验。二、无菌实验室的要求实验室整体布局1、无菌实验室在进行建造的时候，建筑材料应该选用易于维修及清洁、坚固耐用、并且可以防止其他生物进入。2、无菌实验室应该分开人流、物流等，分别设置人员通道以及物品通道，通道清洁度需要严格要求，并装有风幕及防虫设施等3、无菌实验室的建设必须要满足整体环境卫生要求，以及实验设备的维护需求。