蜜饯和糖果中8种合成着色剂的测定

蜜饯和糖果中8种合成着色剂的测定

（Copure® PWAX混合型弱阴离子交换柱）

《食品安全国家标准 食品中合成着色剂的测定》

食品合成着色剂，也称为食品合成染料，被广泛应用到食品的加工过程中。鉴于合成着色剂的不安全性，国家加强了对这类合成着色剂的监管，制订了食品合成着色剂的测定标准（GB5009.35-2016）。

逗点生物依据国标的征求意见稿，建立了固相萃取-高效液相色谱法测定食品中8种合成着色剂含量的方法，样品经乙醇氨水提取后，经PWAX混合型弱阴离子交换柱净化，采用高效液相色谱仪结合紫外检测器测定。经验证，8种合成着色剂在0.10 μg/mL到10 μg/mL范围内线性良好，R^2>0.995，加标回收率在80%-110 %范围内，符合测试需求。

1、 样本前处理

1.1样品提取    

准确称取样品2 g（精确至0.001 g），置于50 mL具塞离心管中，加入25 mL乙醇氨水溶液（硬糖需要先加入2 mL水超声使其溶解），涡旋1 min，50℃超声提取20 min，8000 转/分钟离心5 min，取上清液置于50 mL离心管中，残渣中再加入15 mL乙醇氨水溶液重复提取1次，离心后合并上清液，用乙醇氨水溶液定容至50 mL，即得提取液。准确吸取提取液10 mL，50℃下氮气浓缩至2 mL左右，分2~3次共加入10 mL 5%甲醇水溶液溶解，作为待净化液。

注：乙醇氨水溶液配制，量取无水乙醇700 mL，加入4 mL氨水，用水稀释并定容至1 L，混匀。

1.2试样的净化浓缩

先依次用6 mL甲醇和6 mL水活化WAX固相萃取柱（150 mg/6 mL），保持柱体湿润，将待净化液注入柱中，控制流出液流速在1滴/秒，弃去流出液。再依次用6 mL 2%甲酸水和6 mL甲醇淋洗，弃去淋洗液，抽干小柱。最后用6 mL 2%氨化甲醇洗脱，分两次加入，收集洗脱液，于50 ℃氮吹至近干。准确加入2 mL pH=9的乙酸铵溶液溶解，过0.45 μm PTFE滤膜，弃去2~5滴初滤液，取续滤液作为待测液。

1.3空白实验

1.3.1过程空白：取一支洁净的50 mL具塞离心管，不称取试样，按照上述1.1和1.2进行提取、净化，浓缩，取续滤液上机测试。

1.3.2空白本底实验

称取样品2 g（精确至0.001 g）按照上述1.1和1.2进行提取、净化，浓缩，取续滤液上机测试。

2、 标准系列工作液

精密移取着色剂混标中间液（1 μg/mL）0.10 mL、0.20 mL于2个1 mL色谱瓶中，再吸取混合标准中间液（10 μg/mL）0.05 mL、0.10 mL、0.20 mL、0.50mL于3个1 mL色谱瓶中，分别用水定容至1 mL，混匀，得标准系列工作液。浓度分别为0.10 μg/mL、0.20 μg/mL、0.50 μg/mL、1.00 μg/mL、2.00 μg/mL、5.00 μg/mL和10.0 μg/mL。

3、 仪器条件

仪器：ThermoFisher U3000液相色谱仪

色谱柱：CommaSil® C18 (4.6 mm×250 mm，5 μm)

流动相：A：20 mmol/L乙酸铵溶液 B：甲醇

洗脱方式：梯度洗脱，见表1

流速：1 Ml/min

柱温：30 ℃

进样量：10 Μl

检测器：紫外检测器

检测波长：415 nm、520 nm、610 nm

表1 梯度洗脱程度

4、 实验结果

4.1 加标回收

表1 加标浓度7.5 mg/kg竞品比对结果

表2 加标浓度12.5 mg/kg竞品比对结果

图1 加标浓度为7.5 mg/kg时山楂中8种合成着色剂液相色谱图

图2 加标浓度为12.5 mg/kg时硬糖中8种合成着色剂液相色谱图

5、 注意事项

1.在使用乙醇氨水溶液提取时，需要提取两次以上，提取一次可能会导致提取不充分，导致回收率偏低。

2.过柱前确认样液的Ph值＜6，以便于合成着色剂目标化合物和填料PWAX更好的结合。

3.上机之前过滤所用的针式过滤器不能使用尼龙针式过滤器，会吸附部分合成着色剂，导致回收率偏低，建议使用PTFE亲水针式过滤器。

4.在检测赤藓红时，需要注意在使用离心管氮吹时会有少量的赤藓红会附着在离心管上，可以采用涡旋和超声的方法进行溶解，使用玻璃的氮吹管更易溶解；或者在溶解的时候加入一定量的甲醇便于赤藓红的溶解。

六、订购信息