Copure® 酸性橙Ⅱ专用柱 | 辣椒酱中酸性橙Ⅱ号的测定

准确称取辣椒酱2.0 g(精确至0.01 g)于50 mL离心管(带盖)中，加入20 mL甲醇-氨水溶(甲醇：氨水：水=7:2:1)于涡旋振荡器振荡提取10 min后超声30 min，然后8000 r/min离心10 min，重复提取一次，合并上清液，至恒温数显水浴氮吹仪中60℃氮吹浓缩至10 mL，混匀后待净化。

分别用3.0 mL甲醇、3.0 mL 2%甲酸水溶液活化固相萃取柱，将上述待净化提取液加入固相萃取柱。然后分别依次用3.0 mL 2%甲酸水溶液、3.0 mL 甲醇淋洗小柱，抽干。

加入10%氨水甲醇6 mL，抽干（整个固相萃取过程流速控制在1~2滴/秒）。收集洗脱液于玻璃氮吹管中，于60℃下氮气吹至近干。加入1.0 mL一级水涡旋复溶，过滤（0.45μm  PES膜）至进样小瓶中，待测。

不称取试样，按上述步骤进行实验。

准确吸取适量酸性橙Ⅱ标准工作液， 用水配制成0.1、0.2、0.5、1.0、10.0 µg/m L的标准工作溶液, 以酸性橙Ⅱ含量(X, µg/mL)为横坐标，不同浓度标准物质在484 nm处的色谱图面积Y为纵坐标，制作校准曲线， 利用校准曲线对样品进行定量计算。

设备：Thermo Scientific UltiMate 3000

色谱柱：Commasil^® AQ-C18（4.6 mm*250 mm，5 um）

检测器：紫外检测器

检测波长：484 nm

流动相：A：甲醇  B：20 mmol/L 乙酸铵

洗脱方式：等度洗脱（A：B=8:2）

流速：1 mL/min

进样体积：10 µL

表1 辣椒酱中酸性橙Ⅱ加标回收实验结果

实验室按照上述实验制作标准曲线，相关系数为0.9992, 斜率为0.8434, 截距为0.0054, 线性关系良好。

图1 酸性橙Ⅱ标准曲线

图2 辣椒酱本底液相色谱图

图3 辣椒酱中酸性橙Ⅱ的液相色谱图

（加标浓度100 μg/kg）