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兔(Rabbit)肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA 检测试剂盒
兔(Rabbit)肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA 检测试剂盒 本试剂仅供研究使用 标本:血清或血浆 试验原理: TNF-α试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知TNF-α浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将TNF-α和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中TNF-α的浓度呈比例关系。 试剂盒内容及其配制: 试剂盒成份 96孔配置 48孔配置 96/48人份酶标板 1块板(96T) 半块(48T) 塑料膜板盖 1块 半块 标准品:400pg/ml 1瓶(1.0ml) 1瓶(0.5ml) 空白对照 1瓶(1.0ml) 1瓶(0.5ml) 标准品稀释缓冲液 1瓶(8.0ml) 1瓶(4.0ml) 生物素标记的抗TNF-α抗体 1瓶(8.0ml) 1瓶(4.0ml) 亲和链酶素-HRP 1瓶(12ml) 1瓶(6.0ml) 洗涤缓冲液 1瓶(20ml) 1瓶(10ml) 底物A 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 底物B 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 终止液 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 自备材料: 1. 蒸馏水。 2. 加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。 3. 振荡器及磁力搅拌器等。 4. 样品收集、处理及保存方法: 1、 血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2、 血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。 3、 细胞上清液---1000×g离心10分钟除颗粒和聚合物。 4、 组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液 5、 保存------如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。 操作注意事项: ? 试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。 ? 实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。 ? 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。 ? 使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。 ? 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。 ? 底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。 ? 加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。 ? 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
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2014/04/21
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2013/11/28
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