兔（Rabbit）肿瘤坏死因子α（TNF-α）ELISA 检测试剂盒

2014-04-21 08:45

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资料摘要：

兔（Rabbit）肿瘤坏死因子α（TNF-α）ELISA 检测试剂盒本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆试验原理： TNF-α试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知TNF-α浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将TNF-α和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中TNF-α的浓度呈比例关系。试剂盒内容及其配制：试剂盒成份 96孔配置 48孔配置 96/48人份酶标板 1块板（96T）半块（48T）塑料膜板盖 1块半块标准品：400pg/ml 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml）空白对照 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml）标准品稀释缓冲液 1瓶（8.0ml） 1瓶（4.0ml）生物素标记的抗TNF-α抗体 1瓶（8.0ml） 1瓶（4.0ml）亲和链酶素-HRP 1瓶（12ml） 1瓶（6.0ml）洗涤缓冲液 1瓶（20ml） 1瓶（10ml）底物A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml）底物B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml）终止液 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml）自备材料： 1．蒸馏水。 2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。 3．振荡器及磁力搅拌器等。 4．样品收集、处理及保存方法： 1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2、血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。 3、细胞上清液---1000×g离心10分钟除颗粒和聚合物。 4、组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液 5、保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。操作注意事项： ? 试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。 ? 实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。 ? 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。 ? 使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。 ? 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。 ? 底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。 ? 加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。 ? 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

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