人丙氨酸氨基转移酶(ALT)ELISA试剂盒操作说明

人丙氨酸氨基转移酶(ALT)酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围： 96T
2 U/L -60U/L
使用目的：

人丙氨酸氨基转移酶(ALT)ELISA试剂盒

本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中丙氨酸氨基转移酶(ALT)含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平。用纯化的人丙
氨酸氨基转移酶(ALT)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入丙氨
酸氨基转移酶(ALT)，再与HRP 标记的丙氨酸氨基转移酶(ALT)抗体结合，形成抗体-抗原-
酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，
并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的丙氨酸氨基转移酶(ALT)呈正相
关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人丙氨酸氨
基转移酶(ALT)浓度。
试剂盒组成
1 30 倍浓缩洗涤液20ml×1 瓶7 终止液6ml×1 瓶
2 酶标试剂6ml×1 瓶8 标准品（120U/L） 0.5ml×1 瓶
3 酶标包被板12 孔×8 条9 标准品稀释液1.5ml×1 瓶
4 样品稀释液6ml×1 瓶10 说明书1 份
5 显色剂A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 张
6 显色剂B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 个
标本要求
1. 血清：
室温血液自然凝固10-20 分钟后，离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保
存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
2. 血浆：
应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20 分钟后，离心20
分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。
尿液：
用无菌管收集。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀
形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
4.细胞培养上清：
检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。
人丙氨酸氨基转移酶(ALT)ELISA试剂盒5.培养细胞:
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100 万/ml 左右。
通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20 分钟左
右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
6.组织标本:
切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化
后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀
浆器将标本匀浆化。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检
测，其余冷冻备用。
7.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进
行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
8.不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
60U/L 5 号标准品150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液
30U/L 4 号标准品150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液
15U/L 3 号标准品150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液
7.5U/L 2 号标准品150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液
3.75U/L 1 号标准品150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，
然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽
量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此
重复5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
10 分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止
液后15 分钟以内进行。
操作程序总结：
人丙氨酸氨基转移酶(ALT)ELISA试剂盒计算
以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的
OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标
准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，
即为样品的实际浓度。
注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好
控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值
大于标准品孔第一孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计
算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
人丙氨酸氨基转移酶(ALT)ELISA试剂盒7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6 个月

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人轴突生长诱向因子1(Ntn1)ELISA试剂盒     Human Netrin-1,Ntn1 ELISA试剂盒    

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人B细胞κ 轻肽基因增强子核因子抑制因子ε(Nfkbie)ELISA试剂盒      human nuclear factor of kappa light polypeptide gene enhancer in B-cells inhibitor epsilon,Nfkbie    

人ADAM金属肽酶含血小板反应蛋白1基元4(ADAMTS4)ELISA试剂盒     human ADAM metallopeptidase with thrombospondin type 1 motif4,ADAMTS4 ELISA试剂盒    

人类似RIKEN cDNA 4933429F08 基因 ELISA试剂盒     human similar to RIKEN cDNA 4933429F08 gene ELISA试剂盒    

人孕酮和adipoQ受体家族成员Ⅶ(PAQR7)ELISA试剂盒     human progestin and adipoQ receptor family member Ⅶ,PAQR7 ELISA试剂盒    

人集蛋白亚家族成员11(COLEC11)ELISA试剂盒     human collectin sub-family member 11,COLEC11 ELISA试剂盒    

人丝氨酸蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子进化枝3G(Serpina3g)ELISA试剂盒     human serine/cysteine peptidase inhibitor clade A member 3G,Serpina3g ELISA试剂盒    

人类似RIKEN cDNA A630077B13 基因 ELISA试剂盒     human similar to RIKEN cDNA A630077B13 gene ELISA试剂盒    

人类似RIKEN cDNA 3110050K21 基因 ELISA试剂盒     human similar to RIKEN cDNA 3110050K21 gene ELISA试剂盒    

人类似RIKEN cDNA 2610307008 基因 ELISA试剂盒     human similar to RIKEN cDNA 2610307008 gene ELISA试剂盒    

人类似RIKEN cDNA 2010109K09 基因 ELISA试剂盒     human similar to RIKEN cDNA 2010109K09 gene ELISA试剂盒    

人ras同源物基因家族成员b(RHOB)ELISA试剂盒     human ras homolog gene family,memmber B,RHOB ELISA试剂盒    

人假定蛋白LOC677340 ELISA试剂盒     human hypothetical protein LOC677340 ELISA试剂盒    

人假定蛋白LOC433328 ELISA试剂盒     human hypothetical protein LOC433328 ELISA试剂盒    

人髓样分化因子初次应答基因88(MYD88)ELISA试剂盒     human myeloid differentiation primary response gene 88,MYD88 ELISA试剂盒    

人干扰素活化基因205(Ifi205)ELISA试剂盒     human interferon activated gene 205,Ifi205 ELISA试剂盒    

人组织相容性2-K1-K 区(H2-K1)ELISA试剂盒     human Histocompatibility 2-K1-K region,H2-K1 ELISA试剂盒    

人白细胞免疫球蛋白样受体亚家族B成员4(LILRB4)ELISA试剂盒     human leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 4,LILRB4 ELISA试剂盒    

人C型凝集素结构域家族4成员E(CLEC4E)ELISA试剂盒     human C-type lectin domain family 4 member e,CLEC4E ELISA试剂盒    

人假定蛋白LOC677168 ELISA试剂盒     human Hypothetical protein LOC677168 ELISA试剂盒    

人淋巴细胞抗原6复合物基因座A(Ly6a)ELISA试剂盒     human lymphocyte antigen 6 complex locus A,Ly6a ELISA试剂盒    

人嗜酸性白血球相关之RNA水解酵素家族成员1(EAR1)ELISA试剂盒     human eosinophil-associated ribonuclease A family member 1,EAR1 ELISA试剂盒    

人混合系列蛋白激酶样结构域(MLKL)ELISA试剂盒     human mixed lineage kinase domain-like,MLKL ELISA试剂盒    

人过氧化物酶体增殖激活物受体γ辅激活因子1α(PPARGC1)ELISA试剂盒     human peroxisome proliferative activated receptor gama coactivator 1 alpha,PPARGC1 ELISA试剂盒    

人类似cDNA顺序BC027382 ELISA试剂盒     human similar to cDNA sequence BC027382 ELISA试剂盒    

人类似RIKEN cDNA 4931408D14 基因 ELISA试剂盒     human similar to RIKEN cDNA 4931408D14 gene ELISA试剂盒    

人REST协阻抑因子3(RCOR3)ELISA试剂盒     human REST corepressor 3,RCOR3 ELISA试剂盒    

人集蛋白亚家族成员11(COLEC11)ELISA试剂盒     Human collectin sub-family member 11,COLEC11 ELISA试剂盒    

人α1β糖蛋白(α1β-GP)ELISA试剂盒     Human α1β glycoprotein,α1β-GP ELISA试剂盒    

人可溶性髓系细胞触发受体-1(sTREM-1)ELISA试剂盒     Human soluble Triggering Receptor Expresses on Myeloid Cells-1,sTREM-1 ELISA试剂盒    

人肌抑素(MSTN)ELISA试剂盒     Human Myostatin,MSTN ELISA试剂盒    

人黑素瘤衍生亮氨酸拉链额外核因子(MLZE)ELISA试剂盒     Human melanomaderived leucine zipper extra-nuclear factor,MLZE ELISA试剂盒    

人二磷酸尿核苷葡糖醛酸基转移酶2家族肽B4(UGT2B4)ELISA试剂盒     Human uridine dipho-sphate glucuronosyltransferase 2 family polypeptide B4,UGT2B4 ELISA试剂盒    

人蛋白磷酸酶1调控/抑制因子亚基1A(PPP1R1A)ELISA试剂盒     Human protein phosphatase 1 regulatory subunit A,PPP1R1A ELISA试剂盒    

人腺苷三磷酸结合盒转运体G2(ABCG2)ELISA试剂盒     Human ATP-binding cassette transporter G2,ABCG2 ELISA试剂盒     

人鸟苷酸解离抑制因子(GDI)ELISA试剂盒      Human Guanine nucleotide dissociation Inhibitor,GDI ELISA试剂盒    

人八聚体转录因子(OTF2B)ELISA试剂盒      Human octamer transcription factor 2B,OTF2B ELISA试剂盒    

人八聚体转录因子(OTF2A)ELISA试剂盒      Human octamer transcription factor 2A,OTF2A ELISA试剂盒    

人脱氧尿三磷酸(DUTP)ELISA试剂盒      Human deoxyuridinetriphate,DUTP ELISA试剂盒