昆虫过氧化物酶（POD）ELISA试剂盒操作方法

昆虫过氧化物酶（POD）酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围： 96T
1.2U/L -60 U/L
使用目的：
本试剂盒用于测定昆虫样本中过氧化物酶（POD）含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中昆虫过氧化物酶（POD）水平。用纯化的昆虫过
氧化物酶（POD）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入过氧化物
酶（POD），昆虫过氧化物酶（POD）ELISA试剂盒再与HRP 标记的过氧化物酶（POD）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合
物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作
用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的过氧化物酶（POD）呈正相关。用酶标仪在
450nm 波长下测定吸光度（OD 值），昆虫过氧化物酶（POD）ELISA试剂盒通过标准曲线计算样品中过氧化物酶（POD）浓度。
试剂盒组成
1 30 倍浓缩洗涤液20ml×1 瓶7 终止液6ml×1 瓶
2 酶标试剂6ml×1 瓶8 标准品（100 U/L） 0.5ml×1 瓶
3 酶标包被板12 孔×8 条9 标准品稀释液1.5ml×1 瓶
4 样品稀释液6ml×1 瓶10 说明书1 份
5 显色剂A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 张
6 显色剂B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 个
标本要求
1. 血清：
室温血液自然凝固10-20 分钟后，离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保
存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
2. 血浆：
应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20 分钟后，离心20
分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。
尿液：
用无菌管收集。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。昆虫过氧化物酶（POD）ELISA试剂盒保存过程中如有沉淀
形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
4.细胞培养上清：
检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。
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5.培养细胞:
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100 万/ml 左右。
通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20 分钟左
右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
6.组织标本:
切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化
后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀
浆器将标本匀浆化。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检
测，其余冷冻备用。
7.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进
行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
8.不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
50U/L 5 号标准品150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液
25U/L 4 号标准品150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液
12.5U/L 3 号标准品150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液
6.25U/L 2 号标准品150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液
3.125U/L 1 号标准品150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，
然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽
量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此
重复5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15 分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 昆虫过氧化物酶（POD）ELISA试剂盒测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止
液后15 分钟以内进行。
操作程序总结：
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计算
以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的
OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标
准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，
即为样品的实际浓度。
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注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好
控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值
大于标准品孔第一孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计
算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6 个月

GS-E20172     小鼠戊糖素(Pentosidine)ELISA试剂盒      Mouse Pentosidine ELISA试剂盒    

GS-E20173     小鼠晚期糖基化终末产物(AGEs)ELISA试剂盒     Mouse advanced glycation end products,AGEs ELISA试剂盒     

GS-E20174     小鼠中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)ELISA试剂盒      Mouse neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL ELISA试剂盒    

GS-E20175     小鼠幽门螺旋菌IgG(Hp-IgG)ELISA试剂盒      Mouse Helicobacter pylori IgG,Hp-IgG ELISA试剂盒    

GS-E20176     小鼠多巴胺D1受体(D1R)ELISA试剂盒      Mouse Dopamine D1 receptor,D1R ELISA试剂盒    

GS-E20177     小鼠肾上腺素能a1A受体(ADRA1A)ELISA试剂盒      Mouse adrenergic alpha-1A receptor,ADRA1A ELISA试剂盒    

GS-E20178     小鼠钙结合蛋白(CR)ELISA试剂盒      Mouse Calretinin,CR ELISA试剂盒    

GS-E20179     小鼠透明质酸结合蛋白(HABP)ELISA试剂盒      Mouse Hya]uronate binding protein,HABP ELISA试剂盒    

GS-E20180     小鼠嗜环蛋白/亲环素A(CyPA)ELISA试剂盒      Mouse cyclophilin A,CyPA ELISA试剂盒     

GS-E20181     小鼠骨形成蛋白6(BMP-6)ELISA试剂盒      Mouse Bone morphogenetic protein 6,BMP-6 ELISA试剂盒     

GS-E20182     小鼠淋巴细胞因子ELISA试剂盒      Mouse lymphocyte factor ELISA试剂盒    

GS-E20183     小鼠抗利尿激素/血管加压素/精氨酸加压素(ADH/VP/AVP)ELISA试剂盒      Mouse antidiuretic hormone/vasopressin/arginine vasopressin,ADH/VP/AVP ELISA试剂盒    

GS-E20184     小鼠N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)ELISA试剂盒      Mouse N-Acetyl-Ser-Asp-Lys-Pro,AcSDKP ELISA试剂盒    

GS-E20185     小鼠抗血小板抗体IgG/M/A(PA-IgG/M/A)ELISA试剂盒      Mouse platelet antibodies IgG/M/A,PA-IgG/M/A ELISA试剂盒    

GS-E20186     小鼠纤连蛋白(FN)ELISA试剂盒     Mouse Fibronectin,FN ELISA试剂盒     

GS-E20187     小鼠FMS样酪氨酸激酶3(Flt3)ELISA试剂盒      Mouse FMS-like tyrosine kinase 3,Flt3 ELISA试剂盒    

GS-E20188     小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白1(IGFBP-1)ELISA试剂盒     Mouse Insulin-like growth factor binding protein 1,IGFBP-1 ELISA试剂盒     

GS-E20189     小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白2(IGFBP-2)ELISA试剂盒     Mouse Insulin-like growth factor binding protein 2,IGFBP-2 ELISA试剂盒     

GS-E20190     小鼠白介素16(IL-16)ELISA试剂盒     Mouse Interleukin 16,IL-16 ELISA试剂盒    

GS-E20191     小鼠白介素3(IL-3)ELISA试剂盒     Mouse Interleukin 3,IL-3 ELISA试剂盒    

GS-E20192     小鼠白介素4(IL-4)ELISA试剂盒     Mouse Interleukin 4,IL-4 ELISA试剂盒     

GS-E20193     小鼠白介素-5(IL-5)ELISA试剂盒     Mouse Interleukin 5,IL-5 ELISA试剂盒    

GS-E20194     大鼠P选择素(P-Selectin/CD62P)ELISA试剂盒      Rat P-Selectin ELISA试剂盒    

GS-E20195     小鼠层连蛋白/板层素(LN)ELISA试剂盒     Mouse Laminin,LN ELISA试剂盒     

GS-E20196     小鼠巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)ELISA试剂盒     Mouse Macrophage Colony-Stimulating Factor,M-CSF ELISA试剂盒     

GS-E20197     小鼠巨噬细胞来源的趋化因子(MDC/CCL22)ELISA试剂盒     Mouse Macrophage-Derived Chemokine,MDC ELISA试剂盒     

GS-E20198     小鼠正常T细胞表达和分泌因子(RANTES/CCL5)ELISA试剂盒      Mouse regulated on activation in normal T-cell expressed and secreted,RANTES ELISA试剂盒     

GS-E20199     小鼠巨噬细胞炎性蛋白2(MIP-2)ELISA试剂盒     Mouse Macrophage Inflammatory Protein 2,MIP-2 ELISA试剂盒     

GS-E20200     小鼠催产素(OT)ELISA试剂盒      Mouse oxytocin,OT ELISA试剂盒    

GS-E20201     7     Mouse macrophage inflammatory protein 3β,MIP-3β ELISA试剂盒     

GS-E20202     小鼠Ⅰ型胶原N末端肽(NTX)ELISA试剂盒      Mouse cross linked N-telopeptide of type Ⅰ collagen,NTX ELISA试剂盒    

GS-E20203     小鼠5核苷酸酶(5-NT)ELISA试剂盒     Mouse 5-Nucleotidase,5-NT ELISA试剂盒     

GS-E20204     小鼠神经生长因子(NGF)ELISA试剂盒     Mouse Nerve growth factor,NGF ELISA试剂盒     

GS-E20205     小鼠神经营养因子3(NT-3)ELISA试剂盒     Mouse Neurotrophin 3,NT-3 ELISA试剂盒     

GS-E20206     小鼠神经营养因子4(NT-4)ELISA试剂盒     Mouse Neurotrophin 4,NT-4 ELISA试剂盒    

GS-E20207     小鼠骨保护素(OPG)ELISA试剂盒     Mouse Osteoprotegerin,OPG ELISA试剂盒    

GS-E20208     小鼠B因子(BF)ELISA试剂盒     Mouse factor B,BF ELISA试剂盒     

GS-E20209     小鼠抑瘤素M(OSM)ELISA试剂盒     Mouse Oncostatin-M,OSM ELISA试剂盒     

GS-E20210     小鼠血小板衍生生长因子可溶性受体α(PDGFsR-α)ELISA试剂盒     Mouse Platelet-Derived Growth Factor Soluble Receptor α,PDGFsR-α ELISA试剂盒     

GS-E20211     小鼠血小板衍生生长因子AB(PDGF-AB)ELISA试剂盒     Mouse Platelet-Derived Growth Factor AB,PDGF-AB ELISA试剂盒     

GS-E20212     小鼠P选择素(P-Selectin/CD62P)ELISA试剂盒     Mouse P-Selectin ELISA试剂盒     

GS-E20213     小鼠L苯丙氨酸解氨酶(PAL)ELISA试剂盒     Mouse L-Phenylalanine ammonla-lyase,PAL ELISA试剂盒     

GS-E20214     小鼠可溶性CD30配体(sCD30L)ELISA试剂盒     Mouse Soluble Cluster of differentiation 30 ligand,sCD30L ELISA试剂盒     

GS-E20215     小鼠干细胞因子/肥大细胞生长因子(SCF/MGF)ELISA试剂盒     Mouse Stem cell factor/mast cell growth factor,SCF/MGF ELISA试剂盒