酚氧化物酶（PO）ELISA试剂盒操作方法

酚氧化物酶（PO）酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围： 96T
1.2pg/ml-50pg/ml
使用目的：
本试剂盒用于测定样本中酚氧化物酶（PO）含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中酚氧化物酶（PO）水平。用纯化的酚氧化物酶
（PO）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入酚氧化物酶（PO），
再与HRP 标记的酚氧化物酶（PO）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底
洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最
终的黄色。颜色的深浅和样品中的酚氧化物酶（PO）呈正相关。酚氧化物酶（PO）ELISA试剂盒用酶标仪在450nm 波长下
测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中酚氧化物酶（PO）浓度。
试剂盒组成
1 30 倍浓缩洗涤液20ml×1 瓶7 终止液6ml×1 瓶
2 酶标试剂6ml×1 瓶8 标准品（96pg/ml） 0.5ml×1 瓶
3 酶标包被板12 孔×8 条9 标准品稀释液1.5ml×1 瓶
4 样品稀释液6ml×1 瓶10 说明书1 份
5 显色剂A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 张
6 显色剂B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 个
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
48pg/ml 5 号标准品150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液
24pg/ml 4 号标准品150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液
12pg/ml 3 号标准品150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液
6pg/ml 2 号标准品150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液
3pg/ml 1 号标准品150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，
然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽
量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，酚氧化物酶（PO）ELISA试剂盒每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此
重复5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
10 分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止
液后15 分钟以内进行。
操作程序总结：
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的
OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标
准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，
即为样品的实际浓度。
注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，酚氧化物酶（PO）ELISA试剂盒以避免试验误差。一次加样时间最好
控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值
大于标准品孔第一孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计
算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5． 酚氧化物酶（PO）ELISA试剂盒封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6 个月

GS-E30038     大鼠凝聚素(CLU)ELISA试剂盒     Rat Clusterin,CLU ELISA试剂盒    

GS-E30039     大鼠转化生长因子β刺激蛋白22(TSC22)ELISA试剂盒     Rat transforming growth factor-beta-stimulated Protein clone-22,TSC22 ELISA试剂盒    

GS-E30040     大鼠白介素32(IL-32)ELISA试剂盒     Rat Interleukin 32,IL-32 ELISA试剂盒    

GS-E30041     大鼠孕酮受体(PROGR)ELISA试剂盒      Rat Progesterone receptor,PROGR ELISA试剂盒    

GS-E30042     大鼠白介素21(IL-21)ELISA试剂盒      Rat Interleukin 21,IL-21 ELISA试剂盒    

GS-E30043     大鼠D-乳酸脱氢酶(D-LDH)ELISA试剂盒      Rat D-Lactate Dehydrogenase,D-LDH ELISA试剂盒    

GS-E30044     大鼠胸腺活化调节趋化因子(TARC/CCL17)ELISA试剂盒     Rat thymus activation regulated chemokine,TARC ELISA试剂盒    

GS-E30045     大鼠胆固醇(CH)ELISA试剂盒     Rat cholesterol,CH ELISA试剂盒    

GS-E30046     大鼠甘油三酯(TG)ELISA试剂盒     Rat Triglyceride,TG ELISA试剂盒    

GS-E30047     大鼠低密度脂蛋白(LDL)ELISA试剂盒      Rat low density lipoprotein,LDL ELISA试剂盒    

GS-E30048     大鼠高密度脂蛋白(HDL)ELISA试剂盒     Rat High density lipoprotein,HDL ELISA试剂盒    

GS-E30049     大鼠孕酮受体(PGR)ELISA试剂盒      Rat progesterone receptor,PGR ELISA试剂盒    

GS-E30050     大鼠血管紧张素Ⅱ转化酶(ACEⅡ)ELISA试剂盒     Rat Angiotensin Ⅱ converting enzyme,ACEⅡ ELISA试剂盒    

GS-E30051     大鼠血管紧张素Ⅰ转化酶(ACEⅠ)ELISA试剂盒     Rat Angiotensin Ⅰ Converting Enzyme,ACEⅠ ELISA试剂盒    

GS-E30052     大鼠促性腺激素释放激素受体(GnRHR)ELISA试剂盒     Rat Gonadotropin-releasing hormone receptor,GnRHR ELISA试剂盒    

GS-E30053     大鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)ELISA试剂盒     Rat Phosphorylated adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK ELISA试剂盒    

GS-E30054     大鼠热休克蛋白47(HSP47)ELISA试剂盒     Rat heat shock protein,HSP47 ELISA试剂盒    

GS-E30055     大鼠内源性糖皮质激素(GC)ELISA试剂盒     Rat glucocorticoid,GC ELISA试剂盒    

GS-E30056     大鼠柠檬酸合酶(CS)ELISA试剂盒     Rat Citrate synthase,CS ELISA试剂盒    

GS-E30057     大鼠L-鼠乳酸脱氢酶(L-LDH) ELISA试剂盒      Rat L-Lactate Dehydrogenase,L-LDH ELISA试剂盒    

GS-E30058     大鼠脂酰辅酶A合成酶(ACS)ELISA试剂盒     Rat Fatty acyl-CoA synthetase,ACS ELISA试剂盒    

GS-E30059     大鼠肉毒碱脂酰转移酶(CACT)ELISA试剂盒     Rat carnitine-acylcarnitine translocase,CACT ELISA试剂盒    

GS-E30060     大鼠磷酸化乙酰辅酶A羧化酶(pACCase)ELISA试剂盒     Rat Phosphorylated acetyl-CoA catboxylase,pACCase ELISA试剂盒    

GS-E30061     大鼠金属硫蛋白(MT)ELISA试剂盒     Rat Metallothionein,MT ELISA试剂盒    

GS-E30062     大鼠心肌特异性肌钙蛋白T(cTnT)ELISA试剂盒     Rat cardiac isoform of Tropnin T,cTnT ELISA试剂盒    

GS-E30063     大鼠乙酰胆碱酯酶(AChE)ELISA试剂盒      Rat Acetylcholinesterase,AChE ELISA试剂盒    

GS-E30064     大鼠糖缺失性转铁蛋白(CDT)ELISA试剂盒      Rat carbohydrate-deficient transferrin,CDT ELISA试剂盒    

GS-E30065     大鼠总胆汁酸(TBA)ELISA试剂盒      Rat Total bile acide,TBA ELISA试剂盒    

GS-E30066     大鼠β2微球蛋白(BMG/β2-MG)ELISA试剂盒     Rat β2-microglobulin,BMG/β2-MG ELISA试剂盒    

GS-E30067     大鼠视黄醇结合蛋白(RBP)ELISA试剂盒     Rat Retinol-binding protein,RBP ELISA试剂盒    

GS-E30068     大鼠促性腺激素释放激素受体抗体(GNRHR-Ab)ELISA试剂盒     Rat anti-gonadotropin-releasing hormone receptor antibody,GNRHR-Ab ELISA试剂盒    

GS-E30069     大鼠血管性血友病因子裂解蛋白酶(ADAMTS13/vWF-cp)ELISA试剂盒     Rat von Willebrand Factor cleaving protease,ADAMTS-13/vWF-cp ELISA试剂盒    

GS-E30070     大鼠主要碱性蛋白(MBP)ELISA试剂盒      Rat major basic protein,MBP ELISA试剂盒    

GS-E30071     大鼠嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)ELISA试剂盒     Rat eosinophil cationic protein,ECP ELISA试剂盒