兔CD31 免疫组化试剂盒

兔CD31 免疫组化试剂盒
该试剂盒以HRP 标记的链霉亲和素复合物（HRP Streptavidin Conjugate，
HRP-SA）为基础，可用于检测细胞、组织内的特异性CD31 抗原。该试剂盒具有
灵敏度高、特异性强、定性定位准确、背景清晰。在所用的CD31 一抗与相应靶
抗原结合后，用生物化二抗与一抗特异性结合，最后加入HRP-SA，形成抗原—
特异一抗—生物素化二抗—HRP-SA 复合物，显微镜下观察成像。
试剂盒所含试剂：
试剂A 通透液：0.1% Triton-X 100 10 mL（选用）
试剂B 封闭缓冲液（封闭用） 20 mL
试剂C （原装进口分装）已稀释的即用型CD31 一抗（2.5ml）
试剂D （原装进口分装）生物素化羊抗兔IgG 1 支
（浓度1.5 mg/mL，稀释比为1:300~1:500）50 μL+抗体稀释液20ml
试剂E HRP-SA 复合物1 支（浓度1 μM，稀释比1:50~1:200）100 μL
试剂F DAB 显色液 5ml
兔CD31 免疫组化试剂盒
用户自备试剂：
1． 10mM TBS（pH7.2~7.4）
三羟基氨基甲烷1.21g
氯化钠7.6g
加蒸馏水800mL，浓盐酸调pH 值至7.2~7.4，最后定容至1000mL
TBS-T：TBS+Tween 20（0.05%体积比）
2．抗原修复液（依检测抗原不同而选择不同的修复液）
10mM pH6.0 柠檬酸缓冲液
柠檬酸0.38g
柠檬酸三钠2.45g
加蒸馏水900mL，浓盐酸调pH 值至6.0，最后定容至1000mL
或：0.5M EDTA 修复液（pH8.0）
EDTA·2H2O 186.1g
柠檬酸三钠2.45g
加蒸馏水700mL，用10mM NaOH 调pH 值至8.0，最后定容至1000Ml
3. 缓冲甘油封固剂10 mL
4. Tween 20 5 mL
石蜡包埋组织切片免疫染色
实验步骤（建议方案）：
石蜡包埋组织切片3~4μm 厚度
1.烤片： 将待做切片置于切片架上，于60℃恒温烤箱中至少烤1 hr；
2.脱蜡： 切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡3 次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次
10 min；
3.水化： 切片经下行酒精水化，无水乙醇5min，95%乙醇2 次（每次2min），85%
乙醇2 min；75%乙醇2min，自来水冲洗，ddH2O 洗2×2min；
4.抗原修复： 根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复，常采用高压、微波（温
度达到98~100℃）或酶消化修复法，室温自然冷却，自来水冲洗，ddH2O 洗2×
2min，TBS 洗涤（2×2min）（具体修复方法见附1）* 注：有些抗原勿需修复，
直接进入第5 步封闭。
5.封闭： 滴加试剂B，37℃湿盒孵育30 min；
6.加一抗：滴加用试剂C（即用型一抗），37℃湿盒孵育2 hr 或4℃过夜；
7.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min）；
8.封闭： 滴加试剂B，37℃湿盒孵育10 min；
9.加二抗： 滴加用抗体稀释液稀释的生物素化二抗（试剂D），37℃湿盒中孵育
30 min；
10.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min）；
11.封闭： 滴加试剂Tween 20，37℃湿盒孵育封闭20 min；
12.加HRP-SA： 滴加用试剂C 稀释的试剂E（1：50~200，终浓度5~20 nM），37
℃湿盒中孵育30 min；
13.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min），TBS 洗涤（2×5 min）；
14.显色：应用DAB 溶液（试剂F）显色；
15.复染：自来水充分冲洗，复染，脱水，透明；
16.封片： 待组织标本干后，用试剂缓冲甘油封固剂封片；
17.观察成像： 显微镜下观察成像。
兔CD31 免疫组化试剂盒
注意事项：
1. 修复后缓冲液须自然冷却，自来水冲洗后方能把切片取出，骤冷有可能导致
结晶或抗原封闭。
2. 缓冲液的量必须保证所有切片都能浸泡到，用过的柠檬酸缓冲液不能反复使
用。
3. 若试剂为微量浓缩液，用前应低速离心，将内盖和管壁附着的溶液离到底部。
4. 封片前一定要换用TBS 充分洗涤，以便洗去组织上残留的Tween 20，否则会
影响结果观察。
5. 如须复染细胞核，则在封片前复染或直接采用含有染核试剂的封片剂进行封
片。
附1：
抗原修复方法
常用抗原修复液：柠檬酸缓冲液（0.01M pH6.0）、EDTA 抗原修复液（pH8.0 或
9.0）等等。
一、酶消化修复法
切片脱蜡水化处理，TBS 冲洗，在组织上滴加胃蛋白酶或胰蛋白酶，37℃孵育
20~30min 后TBS 冲洗即可。
二、微波抗原修复法
微波盒中加入抗原修复液微波加热至沸腾，将脱蜡水化后的切片置于耐高温塑料
切片架上，放入已沸腾的缓冲液中，中档或高档继续微波10~15min，取出微波
盒冷却至室温后，自来水冲洗，取出切片。因不同微波炉微波处理时间存在差异，
须自行调整。
三、直接高压抗原修复法
取修复液于不锈钢高压锅中加热至沸腾，将组织切片置于耐高温切片架上，修复
液沸腾后放入切片架，盖上锅盖，待喷气后计时1.5~2.5min 即可脱离热源，自
然冷却至室温后自来水冲洗，取出切片。此方法适用于较难检测或核抗原的修复。
四、隔水式高压抗原修复法
兔CD31 免疫组化试剂盒
不锈钢高压锅中加自来水加热至沸腾，微波盒中加入修复液于微波炉中加热至沸
腾，将切片放入微波盒中，再将微波盒放入高压锅中盖上锅盖，待喷气后计时
4~8 min 即可关闭热源，自然冷却至室温后自来水冲洗，取出切片。此方法适用
于较难检测或核抗原的修复。

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GS-E90016     鱼类白介素1β     IL-1β ELISA试剂盒    

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GS-E90018     鱼类促性腺激素释放激素     GnRH ELISA试剂盒     

GS-E90019     鱼类三碘甲状腺原氨酸(T3)ELISA试剂盒     Fish Tri-iodothyronine,T3 ELISA试剂盒    

GS-E90020     鱼类皮质醇(Cortisol)ELISA试剂盒     Fish Cortisol ELISA试剂盒    

GS-E90021     鱼类超敏C反应蛋白(hs-CRP)ELISA试剂盒     Fish high sensitivity C-Reactive Protein,hs-CRP ELISA试剂盒     

GS-E90022     鱼骨钙素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)ELISA试剂盒     Fish Oste ocalcin/Bone gla protein,OT/BGP ELISA试剂盒    

GS-E90023     红螯光壳螯虾卵黄脂磷蛋白/卵黄磷蛋白(Lv/Vn)ELISA试剂盒     Cherax quadricarinatus lipovitellin/vitellin,Lv/Vn ELISA试剂盒     

GS-E90024     罗氏沼虾诺达病毒(MrNV)ELISA试剂盒     Macrobrachium rosenbergii Nodavirus,MrNV ELISA试剂盒    

GS-E90025     毒蛇因子(CVF) ELISA试剂盒     Cobra venom factor,CVF ELISA试剂盒    

GS-E90026     牛蛙生长激素（GH） ELISA试剂盒     bullfrog growth hormone,GH ELISA试剂盒    

GS-E90027     家蚕卵黄蛋白(LT) ELISA试剂盒     Bombyx mori Livetin,LT ELISA试剂盒    

GS-E90028     蝶蛹金小蜂卵黄蛋白原（vtg)ELISA试剂盒     Nasoniavitripennis vitellogenin,Vtg ELISA试剂盒    

GS-E90029     植物磷脂酰甘油(PG)ELISA试剂盒      Plant phosphatidylglycerol,PG ELISA试剂盒    

GS-E90030     植物玉米索核苷（ZR ）ELISA试剂盒     Plant zeatin riboside,ZR ELISA试剂盒    

GS-E90031     植物赤霉素（GA） ELISA试剂盒     Plant Gibberellic Acid,GA ELISA试剂盒    

GS-E90032     植物血凝素（PHA ）ELISA试剂盒     phytohaemagglutinin,PHA ELISA试剂盒    

GS-E90033     植物生长激素（GH ）ELISA试剂盒      Plant growth hormone,GH ELISA试剂盒     

GS-E90034     植物凝脂酸（PA ）ELISA试剂盒      Plant phosphatidic acid,PA ELISA试剂盒     

GS-E90035     植物吲哚乙酸（IAA） ELISA试剂盒     Plant Indole-3-acetic acid ,IAA ELISA试剂盒    

GS-E90036     麦胚凝集素/凝集蛋白(WGA)ELISA试剂盒      Wheat germ agglutinin,WGA ELISA试剂盒    

GS-E90037     荆豆凝集素(UEA)ELISA试剂盒      Ulex Europaeus agglutinin,UEA ELISA试剂盒    

GS-E90038     槐凝集素(SJA)ELISA试剂盒      Sophora japonica agglutinin,SJA ELISA试剂盒    

GS-E90039     花生凝集素(PNA)ELISA试剂盒      Peanut agglutinin,PNA ELISA试剂盒    

GS-E90040     大豆凝集素(SBA)ELISA试剂盒      Soybean agglutinin,SBA ELISA试剂盒    

GS-E90041     菜豆凝集素(PHA)ELISA试剂盒      Phaseolus vulgaris agglutinin,PHA ELISA试剂盒    

GS-E90042     扁豆凝集素(LCA)ELISA试剂盒      Lens culinaris agglutinin,LCA ELISA试剂盒    

GS-E90043     蓖麻凝集素(RCA)ELISA试剂盒      Ricinus communis agglutinin,RCA ELISA试剂盒    

GS-E90044     豌豆凝集素(PSA)ELISA试剂盒      Pisum sativum agglutinin,PSA ELISA试剂盒    

GS-E90045     双花扁豆凝集素(DBA)ELISA试剂盒      Dolichos bifows agglutinin,DBA ELISA试剂盒    

GS-E90046     植物钙调素(CAM)ELISA试剂盒      Plant calmodulin,CAM ELISA试剂盒     

GS-E90047     植物激素脱落酸（ABA ）ELISA试剂盒     Plant hormone abscisic acid,ABA ELISA试剂盒    

GS-E90048     植物维生素K1(VK1)ELISA试剂盒      Plant Vitamin K1,VK1 ELISA试剂盒     

GS-E90049     植物维生素B12(VB12)ELISA试剂盒      Plant Vitamin B12,VB12 ELISA试剂盒     

GS-E90050     植物维生素A(VA)ELISA试剂盒      Plant Vitamin A,VA ELISA试剂盒     

GS-E90051     植物维生素E(VE)ELISA试剂盒      Plant Vitamin E,VE EELISA试剂盒     

GS-E90052     植物维生素D2(VD2)ELISA试剂盒      Plant Vitamin D2,VD2 ELISA试剂盒     

GS-E90053     植物维生素D3(VD3)ELISA试剂盒      Plant Vitamin D3,VD3 ELISA试剂盒     

GS-E90054     植物维生素D(VD)ELISA试剂盒      Plant Vitamin D,VD ELISA试剂盒     

GS-E90055     植物维生素B6(VB6)ELISA试剂盒      Plant Vitamin B6,VB6 ELISA试剂盒     

GS-E90056     植物25羟基维生素D3(25(OH)D3/25 HVD3)ELISA试剂盒      Plant 25-Dihydroxy vitamin D3,HVD3 ELISA试剂盒     

GS-E90057     植物维生素C(VC)ELISA试剂盒      Plant Human Vitamin C,VC ELISA试剂盒     

GS-E90058     α-银环蛇毒素(α-BGT)ELISA试剂盒      α-bungarotoxin,α-BGT ELISA试剂盒    

GS-E90059     大肠杆菌宿主残留蛋白(E.coli P)ELISA试剂盒      Escherichia coli Protein,E.coli P ELISA试剂盒    

GS-E90060     黄曲霉毒素(AFT)ELISA试剂盒      Aflatoxin,AFT ELISA试剂盒    

GS-E90061     苏云金芽孢杆菌蛋白(BT)ELISA试剂盒      Bacillus thuringiensis,BT ELISA试剂盒    

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