兔CD31 免疫组化试剂盒
该试剂盒以HRP 标记的链霉亲和素复合物(HRP Streptavidin Conjugate,
HRP-SA)为基础,可用于检测细胞、组织内的特异性CD31 抗原。该试剂盒具有
灵敏度高、特异性强、定性定位准确、背景清晰。在所用的CD31 一抗与相应靶
抗原结合后,用生物化二抗与一抗特异性结合,最后加入HRP-SA,形成抗原—
特异一抗—生物素化二抗—HRP-SA 复合物,显微镜下观察成像。
试剂盒所含试剂:
试剂A 通透液:0.1% Triton-X 100 10 mL(选用)
试剂B 封闭缓冲液(封闭用) 20 mL
试剂C (原装进口分装)已稀释的即用型CD31 一抗(2.5ml)
试剂D (原装进口分装)生物素化羊抗兔IgG 1 支
(浓度1.5 mg/mL,稀释比为1:300~1:500)50 μL+抗体稀释液20ml
试剂E HRP-SA 复合物1 支(浓度1 μM,稀释比1:50~1:200)100 μL
试剂F DAB 显色液 5ml
兔CD31 免疫组化试剂盒
用户自备试剂:
1. 10mM TBS(pH7.2~7.4)
三羟基氨基甲烷1.21g
氯化钠7.6g
加蒸馏水800mL,浓盐酸调pH 值至7.2~7.4,最后定容至1000mL
TBS-T:TBS+Tween 20(0.05%体积比)
2.抗原修复液(依检测抗原不同而选择不同的修复液)
10mM pH6.0 柠檬酸缓冲液
柠檬酸0.38g
柠檬酸三钠2.45g
加蒸馏水900mL,浓盐酸调pH 值至6.0,最后定容至1000mL
或:0.5M EDTA 修复液(pH8.0)
EDTA·2H2O 186.1g
柠檬酸三钠2.45g
加蒸馏水700mL,用10mM NaOH 调pH 值至8.0,最后定容至1000Ml
3. 缓冲甘油封固剂10 mL
4. Tween 20 5 mL
石蜡包埋组织切片免疫染色
实验步骤(建议方案):
石蜡包埋组织切片3~4μm 厚度
1.烤片: 将待做切片置于切片架上,于60℃恒温烤箱中至少烤1 hr;
2.脱蜡: 切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡3 次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次
10 min;
3.水化: 切片经下行酒精水化,无水乙醇5min,95%乙醇2 次(每次2min),85%
乙醇2 min;75%乙醇2min,自来水冲洗,ddH2O 洗2×2min;
4.抗原修复: 根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复,常采用高压、微波(温
度达到98~100℃)或酶消化修复法,室温自然冷却,自来水冲洗,ddH2O 洗2×
2min,TBS 洗涤(2×2min)(具体修复方法见附1)* 注:有些抗原勿需修复,
直接进入第5 步封闭。
5.封闭: 滴加试剂B,37℃湿盒孵育30 min;
6.加一抗:滴加用试剂C(即用型一抗),37℃湿盒孵育2 hr 或4℃过夜;
7.洗涤: TBS-T 洗涤(3×5 min);
8.封闭: 滴加试剂B,37℃湿盒孵育10 min;
9.加二抗: 滴加用抗体稀释液稀释的生物素化二抗(试剂D),37℃湿盒中孵育
30 min;
10.洗涤: TBS-T 洗涤(3×5 min);
11.封闭: 滴加试剂Tween 20,37℃湿盒孵育封闭20 min;
12.加HRP-SA: 滴加用试剂C 稀释的试剂E(1:50~200,终浓度5~20 nM),37
℃湿盒中孵育30 min;
13.洗涤: TBS-T 洗涤(3×5 min),TBS 洗涤(2×5 min);
14.显色:应用DAB 溶液(试剂F)显色;
15.复染:自来水充分冲洗,复染,脱水,透明;
16.封片: 待组织标本干后,用试剂缓冲甘油封固剂封片;
17.观察成像: 显微镜下观察成像。
兔CD31 免疫组化试剂盒
注意事项:
1. 修复后缓冲液须自然冷却,自来水冲洗后方能把切片取出,骤冷有可能导致
结晶或抗原封闭。
2. 缓冲液的量必须保证所有切片都能浸泡到,用过的柠檬酸缓冲液不能反复使
用。
3. 若试剂为微量浓缩液,用前应低速离心,将内盖和管壁附着的溶液离到底部。
4. 封片前一定要换用TBS 充分洗涤,以便洗去组织上残留的Tween 20,否则会
影响结果观察。
5. 如须复染细胞核,则在封片前复染或直接采用含有染核试剂的封片剂进行封
片。
附1:
抗原修复方法
常用抗原修复液:柠檬酸缓冲液(0.01M pH6.0)、EDTA 抗原修复液(pH8.0 或
9.0)等等。
一、酶消化修复法
切片脱蜡水化处理,TBS 冲洗,在组织上滴加胃蛋白酶或胰蛋白酶,37℃孵育
20~30min 后TBS 冲洗即可。
二、微波抗原修复法
微波盒中加入抗原修复液微波加热至沸腾,将脱蜡水化后的切片置于耐高温塑料
切片架上,放入已沸腾的缓冲液中,中档或高档继续微波10~15min,取出微波
盒冷却至室温后,自来水冲洗,取出切片。因不同微波炉微波处理时间存在差异,
须自行调整。
三、直接高压抗原修复法
取修复液于不锈钢高压锅中加热至沸腾,将组织切片置于耐高温切片架上,修复
液沸腾后放入切片架,盖上锅盖,待喷气后计时1.5~2.5min 即可脱离热源,自
然冷却至室温后自来水冲洗,取出切片。此方法适用于较难检测或核抗原的修复。
四、隔水式高压抗原修复法
兔CD31 免疫组化试剂盒
不锈钢高压锅中加自来水加热至沸腾,微波盒中加入修复液于微波炉中加热至沸
腾,将切片放入微波盒中,再将微波盒放入高压锅中盖上锅盖,待喷气后计时
4~8 min 即可关闭热源,自然冷却至室温后自来水冲洗,取出切片。此方法适用
于较难检测或核抗原的修复。
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GS-E90013 鲑鱼补体蛋白3 C3 ELISA试剂盒
GS-E90014 鲑鱼补体蛋白4 C4 ELISA试剂盒
GS-E90015 鱼类白介素1α IL-1α ELISA试剂盒
GS-E90016 鱼类白介素1β IL-1β ELISA试剂盒
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GS-E90025 毒蛇因子(CVF) ELISA试剂盒 Cobra venom factor,CVF ELISA试剂盒
GS-E90026 牛蛙生长激素(GH) ELISA试剂盒 bullfrog growth hormone,GH ELISA试剂盒
GS-E90027 家蚕卵黄蛋白(LT) ELISA试剂盒 Bombyx mori Livetin,LT ELISA试剂盒
GS-E90028 蝶蛹金小蜂卵黄蛋白原(vtg)ELISA试剂盒 Nasoniavitripennis vitellogenin,Vtg ELISA试剂盒
GS-E90029 植物磷脂酰甘油(PG)ELISA试剂盒 Plant phosphatidylglycerol,PG ELISA试剂盒
GS-E90030 植物玉米索核苷(ZR )ELISA试剂盒 Plant zeatin riboside,ZR ELISA试剂盒
GS-E90031 植物赤霉素(GA) ELISA试剂盒 Plant Gibberellic Acid,GA ELISA试剂盒
GS-E90032 植物血凝素(PHA )ELISA试剂盒 phytohaemagglutinin,PHA ELISA试剂盒
GS-E90033 植物生长激素(GH )ELISA试剂盒 Plant growth hormone,GH ELISA试剂盒
GS-E90034 植物凝脂酸(PA )ELISA试剂盒 Plant phosphatidic acid,PA ELISA试剂盒
GS-E90035 植物吲哚乙酸(IAA) ELISA试剂盒 Plant Indole-3-acetic acid ,IAA ELISA试剂盒
GS-E90036 麦胚凝集素/凝集蛋白(WGA)ELISA试剂盒 Wheat germ agglutinin,WGA ELISA试剂盒
GS-E90037 荆豆凝集素(UEA)ELISA试剂盒 Ulex Europaeus agglutinin,UEA ELISA试剂盒
GS-E90038 槐凝集素(SJA)ELISA试剂盒 Sophora japonica agglutinin,SJA ELISA试剂盒
GS-E90039 花生凝集素(PNA)ELISA试剂盒 Peanut agglutinin,PNA ELISA试剂盒
GS-E90040 大豆凝集素(SBA)ELISA试剂盒 Soybean agglutinin,SBA ELISA试剂盒
GS-E90041 菜豆凝集素(PHA)ELISA试剂盒 Phaseolus vulgaris agglutinin,PHA ELISA试剂盒
GS-E90042 扁豆凝集素(LCA)ELISA试剂盒 Lens culinaris agglutinin,LCA ELISA试剂盒
GS-E90043 蓖麻凝集素(RCA)ELISA试剂盒 Ricinus communis agglutinin,RCA ELISA试剂盒
GS-E90044 豌豆凝集素(PSA)ELISA试剂盒 Pisum sativum agglutinin,PSA ELISA试剂盒
GS-E90045 双花扁豆凝集素(DBA)ELISA试剂盒 Dolichos bifows agglutinin,DBA ELISA试剂盒
GS-E90046 植物钙调素(CAM)ELISA试剂盒 Plant calmodulin,CAM ELISA试剂盒
GS-E90047 植物激素脱落酸(ABA )ELISA试剂盒 Plant hormone abscisic acid,ABA ELISA试剂盒
GS-E90048 植物维生素K1(VK1)ELISA试剂盒 Plant Vitamin K1,VK1 ELISA试剂盒
GS-E90049 植物维生素B12(VB12)ELISA试剂盒 Plant Vitamin B12,VB12 ELISA试剂盒
GS-E90050 植物维生素A(VA)ELISA试剂盒 Plant Vitamin A,VA ELISA试剂盒
GS-E90051 植物维生素E(VE)ELISA试剂盒 Plant Vitamin E,VE EELISA试剂盒
GS-E90052 植物维生素D2(VD2)ELISA试剂盒 Plant Vitamin D2,VD2 ELISA试剂盒
GS-E90053 植物维生素D3(VD3)ELISA试剂盒 Plant Vitamin D3,VD3 ELISA试剂盒
GS-E90054 植物维生素D(VD)ELISA试剂盒 Plant Vitamin D,VD ELISA试剂盒
GS-E90055 植物维生素B6(VB6)ELISA试剂盒 Plant Vitamin B6,VB6 ELISA试剂盒
GS-E90056 植物25羟基维生素D3(25(OH)D3/25 HVD3)ELISA试剂盒 Plant 25-Dihydroxy vitamin D3,HVD3 ELISA试剂盒
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