Porcine CSFV Ag ELISA KitFOR RESEARCH USE ONLY96 determinationsPurposeThis kit allows for the determination of CSFV Ag concentrations in Porcineserum, and other biological fluids.Principle of the assayThe kit assay CSFV Ag level in the sample，use Purified CSFV antibody tocoat microtiter plate wells, make solid-phase antibody, then add CSFV Ag towells, Combined With CSFV Ag, after washing and removing non-combinativeantibody and other components ,then Combined CSFV antibody which withHRP labeled become antibody – antigen - enzyme- antibody complex, afterwashing Completely, Add TMB substrate solution,, TMB substrate becomesblue color At HRP enzyme-catalyzed, reaction is terminated by the addition ofa sulphuric acid solution and the color change is measuredspectrophotometrically at a wavelength of 450 nm. Compared with theCUTOFF value, according to this to judge CSFV Ag exist in the sample or not.Materials provided with the kit1 wash solution 20ml×1bottle 7 Stop Solution 6ml×1 bottle2 HRP-Conjugatereagent 6ml×1 bottle 8 Positive control 0.5ml×1 bottle3 Microelisa stripplate 12well×8strips 9 Negativecontrol0.5ml×1bottle4 Sample diluent 6ml×1 bottle 10 Instruction 15 Chromogen SolutionA 6ml×1 bottle 11 Closure platemembrane 2IBL International GmbHFlughafenstra?e 52a 22335 Hamburg DEIBL@IBL-International.com6 Chromogen SolutionB 6ml×1 bottle 12 Sealed bags 1Specimen requirements1. extract as soon as possible after Specimen collection,and according to therelevant literature, and should be experiment as soon as possible after theextraction. If it can’t, specimen can be kept in -20 ℃ to preserve, Avoidrepeated freeze-thaw cycles.2. Can’t detect the sample which contain NaN3, because NaN3 inhibits HRPactive.Assay procedure1.Number: to sample correspond microtitration well and Number Sequence,each plate should be set feminine comparison 2 wells, masculine comparison2 wells, blank comparison 1 well(don’t add sample and HRP-Conjugatereagent to blank comparison well, other each step the operation are same).2.add sample：separately add Positive control and Negative control 50μl to thePositive and Negative well . add Sample dilution 40μl to testing sample well,then add testing sample 10μl. add sample to the bottom of ELISA platescoated well , don’t touch the well wall as far as possible, and Gently mix.3.Incubate: After closing plate with Closure plate membrane ,incubate for 30min at 37℃.4.Configurate liquid: 30-fold (or 20-fold)wash solution diluted 30-fold (or 20-fold)with distilled water until 600ml,and reserve.5.washing：Uncover Closure plate membrane, discard Liquid, dry by swing,add washing buffer to every well, still for 30s then drain, repeat 5 times, dry byIBL International GmbHFlughafenstra?e 52a 22335 Hamburg DEIBL@IBL-International.compat.6.add enzyme：Add HRP-Conjugate reagent 50μlto each well, except the blankwell.7.incubate：Operation with 3.8.washing：Operation with 5.9.color：Add Chromogen Solution A 50ul and Chromogen Solution B to eachwell, evade the light preservation for 15 min at 37℃10.Stop the reaction：Add Stop Solution50μl to each well, Stop the reaction(theblue color change to yellow color).11. assay：take blank well as zero , Read absorbance at 450nm after AddingStop Solution and within 15min.Determine the resultTest validity: the average of Positive control well≥1.00; the average ofNegative control well ≤0.10.Calculate Critical(CUT OFF) : Critical= the average of Negative control well+ 0.15.Negative control: sample ODNegative control.Positive control: ample OD≥ Calculate Critical(CUT OFF) is CSFV AgPositive control.Important notesIBL International GmbHFlughafenstra?e 52a 22335 Hamburg DEIBL@IBL-International.com1.Please according to use instruction strictly, Do not mix reagents with thosefrom other lots.2.The kit takes out from the refrigeration environment should be balanced15-30 minutes in the room temperature then use, ELISA plates coated ifhas not use up after opened, the plate should be stored in Sealed bag.3.washing buffer will Crystallization separation, it can be heated the waterhelps dissolve when dilute . Washing does not affect the result.4.Closure plate membrane only limits the disposable use, in order to avoidthe overlapping pollution5.The substrate please evade the light preservation.6.The test result determination must take the microtiter plate reader as astandard, when use dual-wavelength to assay, Reference wavelength is630nm.7.All samples, washing buffer and each kind of reject should according toinfective material process. Stopp Solution is 2M sulphuric acid. You must payattention to safe when use .Storage and validity1．Storage： 2-8℃.2．validity： six months.

Nature Com：Omega-3可阻止数年后精神病发作据本周二公布的一项研究表明，ω- 3脂肪酸是在富含油脂的鱼类中发现的，长期食用后可以防止精神分裂症和其他精神病的发病。据研究报道，食用ω- 3脂肪酸七年之后，相比安慰剂组，处于“超高”风险的年轻人不太可能遭受精神衰弱的情况。精神分裂症的特征是错觉和幻觉，包括听声音和看到不存在的东西。它通常突然或逐渐出现在青春期或成年早期。没有治愈病例。目前的治疗着重于管理症状的发展。科学家们早已知道，精神分裂症患者体内多不饱和脂肪酸会减少，尤其是ω- 3脂肪酸和细胞膜内ω-6脂肪酸。近十年前，由墨尔本大学Paul Amminger领导的研究人员的临床试验中显示，摄入脂肪酸会推迟高危对象精神病性障碍的首次发病。在后续研究中，Amminger发表在《 Nature Communications》杂志上的文章报告说，近七年之后，只有10%的ω- 3脂肪酸组发展成精神病，而安慰剂组发展成精神病的为40%。“在整个随访期间内，omega - 3显著降低高危人群发展成为精神障碍的风险。”研究结论称。但研究人员并没有建议所有高危个体食用脂肪酸，但可以作为非处方药物在许多食品中作为补充剂，包括鲑鱼，沙丁鱼和核桃。科学家们目前仍然不了解ω- 3脂肪酸可能预防精神分裂症发病最基本的发生机制，这其中包含了遗传和环境的起源。这种疾病发生在大约1%的人口中，但大约10%的人有轻度精神障碍疾病。鱼油富含ω- 3脂肪酸，没有临床相关的副作用，因此当然是一个良好的治疗选择。Amminger的说。“但患者需要被告知鱼油有益于精神障碍的证据是有限的。

黄曲霉素B1（AFB1）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。1 使用目的：本试剂盒用于检测饲料和谷物中黄曲霉素B1（AFB1）含量。2 实验原理本试剂盒采用直接竞争ELISA 方法，在微孔板包被有黄曲霉素偶联抗原，加入黄曲霉素B1（AFB1）标准品或样品，游离黄曲霉素B1（AFB1）与微孔条上预包被的黄曲霉素B1 偶联抗原互相竞争抗黄曲霉素B1（AFB1）抗体酶标记物，用TMB 底物显色，加入终止液后颜色由蓝色变为黄色，用酶标仪在450nm 波长下进行检测，吸光值与样品中黄曲霉素B1（AFB1）含量成反比，通过标准曲线计算样品中黄曲霉素B1（AFB1）的含量。3 试剂盒组成3.1 预包被的AFB1 偶联抗原的可拆酶标板：1 块（12 孔×8 条）。3.2 AFB1 标准品：6 瓶（1ml/瓶），含量分别是： 0 ng/ml，0.1 ng/ml,0.3 ng/ml,0.9 ng/ml,2.7ng/ml,8.1 ng/ml。3.3 抗AFB1 抗体酶结合物：1 瓶（6ml）。3.4 显色液A：1 瓶（6ml）。3.5 显色液B：1 瓶（6ml）。3.6 终止液：1 瓶（6ml），2M 硫酸。3.7 样本稀释液：1 瓶（10×, 6ml），用于样品稀释用。3.8 浓缩洗涤液：1 瓶（20×，20ml），用于洗板。3.9 说明书一份。4 需要而未提供的材料4.1 设备4.1.1波长450nm酶标仪。4.1.2粉碎机。4.1.3量筒。4.1.4振荡器。4.1.5漏斗。4.1.6Whatman No 1或相当的滤纸。4.1.7微量移液器。4.2 试剂4.2.1去离子水或蒸馏水。4.2.2 甲醇。5 贮存5.1 试剂盒贮存于2~8℃，切勿冷冻5.2 未用完的微孔板应该密封干燥保存6 注意事项6.1 使用试剂盒前请仔细阅读说明书。6.2 不要使用过期试剂盒。26.3 试剂盒使用前，将试剂恢复至室温（25±2℃），建议至少回温2小时。6.4 标准品中含有黄曲霉素，使用时应特别注意，操作时应带手套。6.5 终止液中含有硫酸，使用时防止灼伤皮肤及腐蚀衣物。6.6 不同标准品、样品所用吸头不能混用，否则会影响试验结果。6.7 不同批号试剂盒中的试剂不得混用；不同标准品、样品所用吸头不得混用，否则会影响实验结果。6.8 稀释样本时必须用本试剂盒中的样本稀释液，否则会影响实验结果6.9 混合试剂时应避免起泡。7 工作液准备7.1 AFB1标准品溶液：0ng/ml,0.1ng/ml ,0.3 ng/ml,0.9 ng/ml,2.7 ng/ml,8.1ng/ml7.2 浓缩洗涤液：用蒸馏水按1:20(1+19)稀释备用7.3 样本稀释液：备用7.3 显色剂：已备用，避免光线直照7.4 反应终止液：已备用8 样品处理程序（样品在提取过程中，要严格按说明书操作，提取过程中应准确稀释，否则会出现结果不准确，样品应当保存在阴凉避光之处及冷藏保存）8.1取10g粉碎的样品，加 20ml 70%甲醇溶液8.2强力振荡3分钟8.3用Whatman No 1滤纸过滤8.4取25μl处理后的样品，加入25μl样本稀释液于反应孔中（样本稀释倍数为2）9 酶免分析步骤9.1 实验须知9.1.1 实验开始前请将所有试剂于盒外充分恢复至室温（25±2℃），时间约2小时。回温至室温（25±2℃）后再取出微孔条，多余的微孔条重新密封立即于2~8℃干燥保存注：一定保证回温充分，否则影响检测的精确度和准确度。9.1.2 使用后请立即将试剂放回2~8℃保存9.1.3 请不要改变分析程序9.1.4 请使用精确的微量移液器9.1.5 操作一旦开始，请不要中断任何程序9.1.6 ELISA结果的可重复性极大程度的取决于操作程序，请严格按照要求操作9.1.7 为避免交叉污染，每个标准品和样品均应使用不同的吸头加样9.1.8 加样时请勿让吸头接触微孔中的溶液或内表面9.2 分析步骤9.2.1 预先进行编号，标记B0、标准品和样品的位置，推荐进行双孔检测9.2.2 取所需数量的微孔（微孔条可拆），将多余板条重新密封并立即放回2~8℃保存9.2.3 样品稀释液（10×）、浓缩洗涤液（10×）稀释成工作液(蒸馏水或去离子水稀释)9.2.4 在B0孔中加入50μl0.0 ng/ ml标准品溶液9.2.5 在各标准孔中加入50μl的标准品溶液9.2.6 在各样品孔中加入50μl样品溶液9.2.7 在所有孔中加入50μl的抗黄曲霉素B1抗体酶结合物9.2.8 轻轻晃动反应板几秒钟。9.3 37℃温浴30min （温浴过程中不时轻拍反应板，可以减少双孔误差）9.3.1 甩掉孔中液体，用洗液洗涤微孔板5次，最后一次应在吸水纸上拍打以完全除去孔中液体。39.4 反应9.4.1 洗涤程序完成后，立即用微量移液器在每个微孔中先加入50μl显色液A，再加 50μl显色液B；轻微晃动反应板使之彻底混匀9.4.2 37℃温浴10min9.4.3 每孔中加入50μl终止液，混匀9.4.4 在450nm下检测吸光度，结果在5min内读取。10 结果计算10.1定量分析10.1.1所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值（B）除以第一个标准（0标准）的吸光度值（B0）再乘以100%，即百分吸光度值。B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值B0—0μg/L标准溶液的平均吸光度值10.1.2以黄曲霉素B1浓度的对数值为X轴，百分吸光度值为Y轴，绘制标准曲线图。根据样品百分吸光度值，可从曲线上得到对应点的横坐标，即为AFB1浓度的对数值，求得反对数即为测定液中AFB1浓度C（ng/ml）10.1.3由于样品经过了预先稀释，因此根据标准曲线所得出的样品浓度一定要再乘以其稀释倍数。10.2 半定量测定10.1.1目测半定量测定：首先选择一个适当的标准液与样品同运行，根据样品与标准品吸光度值的高低比较，判断样品浓度值是小于还是大于标准值。10.1.2仪器半定量测定：首先选择一个适当的标准液与样品同运行，根据样品与标准品颜色深浅比较，判断样品浓度值是小于还是大于标准值。11 特异性物质 交叉反应黄曲霉素B1 100%黄曲霉素B2 80%黄曲霉素G1 75%黄曲霉素G2 30%12 试剂盒参数本试剂盒检测下限为0.1ppbB0吸光度最佳值应大于1.0试剂盒吸光度板内误差小于8％，板间误差小于15％。用本说明书提供的组织样本提取方法回收率大于80％。13 标准曲线模式（仅供参考）试剂盒提供的标准曲线范围为0.1ng/ml~8.1ng/ml 。4

中科院科学家在大肠杆菌抗药性研究方面取得新进展2015年8月4日，中国科学院生物物理研究所的张凯和赵永芳等人最近合作在Cell Research发表了题为“Substrate-bound structure of the E. coli multidrug resistance transporter MdfA”的研究成果，报告了他们在大肠杆菌MFS家族的多药物外排蛋白MdfA结构方面的最新研究。众所周知，细菌感染是困扰全人类的健康问题之一。虽然自从青霉素问世以来，人类凭借抗生素的发明有效缓解了这一问题。然而，随之而来的细菌抗药性却让许多努力付之东流。因此，抗药性相关的机制研究及对策已成为世界卫生组织和各国政府共同关注的问题。经过多年研究，国内外科学家发现在细菌众多抗药机制中，最普遍的一种机制是利用细胞膜上的多个药物外排泵，将抗生素外排出细胞。因此，研究抗生素相关转运机制在开发新型抗生素和克服细菌抗药性的课题中有着重要意义。由于大肠杆菌MFS家族的多药物外排蛋白MdfA是抗药机制研究中的经典模型，因此对该蛋白结构的解析有助于深入认识细菌的药物外排机制。张凯课题组成功解析了MdfA-氯霉素以及MdfA与多个底物类似物复合物的高分辨率晶体结构（最高2.0 埃）。这在MSF家族中，药物底物与转运蛋白复合物的晶体结构的报道仍属首次。MdfA形成12次跨膜螺旋的拓扑结构，含有由3次跨膜螺旋重复结构形成的两个结构域，底物结合口袋位于两个结构域的界面处。通过突变实验，该研究组在细胞水平上对氯霉素的结合位点进行了研究，验证了多个对底物结合及质子化位点起关键作用的氨基酸残基。同时赵永芳课题组利用单分子荧光共振等方法验证了晶体结构中的观测。基于对该家族蛋白中多个保守的序列模体进行的结构和功能分析，张凯、赵永芳等人提出了一个基于膜电位的、底物-质子逆向转运的分子机制，为进一步认识广谱性抗药转运蛋白的一般工作原理奠定了实验和理论基础。

Cancer Prev Res：喝绿茶增加还是减少前列腺癌风险？英国格拉斯哥大学研究人员对6000多名男性进行长达37年的研究显示，每天喝7杯茶以上的人患前列腺癌的风险比每天喝3杯茶以下的人增加50%。他们的研究结果与先前研究称喝茶可降低患癌、心脏病、糖尿病以及帕金森病的风险相反。不过，最新一项由Kumar NB发表的随机对照研究则证明绿茶儿茶酚使用一年，并不降低前列腺癌的风险。这项研究采用安慰剂对照，而绿茶儿茶酚混合物包括400mg 儿茶素（EGCG），每天使用，持续1年，但是，与安慰剂相比，并没有降低前列腺癌的风险。还有一些研究则认为绿茶本身对前列腺癌作用可能并不大，但却可以增强化疗药的作用。卡什夫·沙菲克(Kashif Shafique)博士从1970年开始这项研究，参与者当时在21到75岁之间，被要求完成饮茶、咖啡以及酒量的调查问卷，当然也包括吸烟习惯和健康状 况。当时6016人中，只有不到1/4的人每天喝茶7杯以上。这些人在随后37年中，有6.4%患上前列腺癌。研究人员发现，喝大量茶的人通常完全戒酒，而且生活方式更为健康，也可能因为活得时间更长，所以患前列腺癌的几率更大。沙菲克说：“我们还不清楚是茶叶本身含有危险因素，亦或是饮茶者通常更健康和更长寿，因此患前列腺癌更普遍。”据悉，英国几乎80%的人都喝茶，每天消费茶1.65亿杯。英国茶叶每年价值超过7亿英镑(约合人民币70亿元)。而英国每年有4万人患前列腺癌，超过1万名患者死亡.同时，Kashif Shafique博士还发现，饮咖啡可以降低前列腺癌风险，与绿茶作用相反。总之，茶叶对前列腺癌的影响还存在争议，后续可能还需要更大样本，更长期，设计更严谨的研究来证实。

GKP 免疫组化试剂盒该试剂盒以HRP 标记的链霉亲和素复合物（HRP Streptavidin Conjugate，HRP-SA）为基础，可用于检测细胞、组织内的特异性GKPP 抗原。该试剂盒具有灵敏度高、特异性强、定性定位准确、背景清晰。在所用的GKP 一抗与相应靶抗原结合后，用生物化二抗与一抗特异性结合，最后加入HRP-SA，形成抗原—特异一抗—生物素化二抗—HRP-SA 复合物，显微镜下观察成像。注：本产品仅供实验室科学研究。本步骤是根据我们长期实验得出的有效步骤，不一定是最优方法，请客户根据具体科研实验情况进行调整和优化，并欢迎客户和我们探讨。试剂盒所含试剂：试剂A 通透液：0.1% Triton-X 100 10 mL（选用）试剂B 封闭缓冲液（封闭用） 20 mL试剂C （原装进口分装）已稀释的即用型GKP 一抗（2.5ml）试剂D （原装进口分装）生物素化羊抗兔IgG 1 支（浓度1.5 mg/mL，稀释比为1:300~1:500）50 μL+抗体稀释液20ml试剂E HRP-SA 复合物1 支（浓度1 μM，稀释比1:50~1:200）100 μL试剂F DAB 显色液 5ml用户自备试剂：1． 10mM TBS（pH7.2~7.4）三羟基氨基甲烷1.21g氯化钠7.6g加蒸馏水800mL，浓盐酸调pH 值至7.2~7.4，最后定容至1000mLTBS-T：TBS+Tween 20（0.05%体积比）2．抗原修复液（依检测抗原不同而选择不同的修复液）10mM pH6.0 柠檬酸缓冲液柠檬酸0.38g柠檬酸三钠2.45g加蒸馏水900mL，浓盐酸调pH 值至6.0，最后定容至1000mL或：0.5M EDTA 修复液（pH8.0）EDTA·2H2O 186.1g柠檬酸三钠2.45g加蒸馏水700mL，用10mM NaOH 调pH 值至8.0，最后定容至1000Ml3. 缓冲甘油封固剂10 mL4. Tween 20 5 mL石蜡包埋组织切片免疫染色实验步骤（建议方案）：石蜡包埋组织切片3~4μm 厚度1.烤片： 将待做切片置于切片架上，于60℃恒温烤箱中至少烤1 hr；2.脱蜡： 切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡3 次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次10 min；3.水化： 切片经下行酒精水化，无水乙醇5min，95%乙醇2 次（每次2min），85%乙醇2 min；75%乙醇2min，自来水冲洗，ddH2O 洗2×2min；4.抗原修复： 根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复，常采用高压、微波（温度达到98~100℃）或酶消化修复法，室温自然冷却，自来水冲洗，ddH2O 洗2×2min，TBS 洗涤（2×2min）（具体修复方法见附1）* 注：有些抗原勿需修复，直接进入第5 步封闭。5.封闭： 滴加试剂B，37℃湿盒孵育30 min；6.加一抗：滴加用试剂C（即用型一抗），37℃湿盒孵育2 hr 或4℃过夜；7.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min）；8.封闭： 滴加试剂B，37℃湿盒孵育10 min；9.加二抗： 滴加用抗体稀释液稀释的生物素化二抗（试剂D），37℃湿盒中孵育30 min；10.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min）；11.封闭： 滴加试剂Tween 20，37℃湿盒孵育封闭20 min；12.加HRP-SA： 滴加用试剂C 稀释的试剂E（1：50~200，终浓度5~20 nM），37℃湿盒中孵育30 min；13.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min），TBS 洗涤（2×5 min）；14.显色：应用DAB 溶液（试剂F）显色；15.复染：自来水充分冲洗，复染，脱水，透明；16.封片： 待组织标本干后，用试剂缓冲甘油封固剂封片；17.观察成像： 显微镜下观察成像。注意事项：1. 修复后缓冲液须自然冷却，自来水冲洗后方能把切片取出，骤冷有可能导致结晶或抗原封闭。2. 缓冲液的量必须保证所有切片都能浸泡到，用过的柠檬酸缓冲液不能反复使用。3. 若试剂为微量浓缩液，用前应低速离心，将内盖和管壁附着的溶液离到底部。4. 封片前一定要换用TBS 充分洗涤，以便洗去组织上残留的Tween 20，否则会影响结果观察。5. 如须复染细胞核，则在封片前复染或直接采用含有染核试剂的封片剂进行封片。附1：抗原修复方法常用抗原修复液：柠檬酸缓冲液（0.01M pH6.0）、EDTA 抗原修复液（pH8.0 或9.0）等等。一、酶消化修复法切片脱蜡水化处理，TBS 冲洗，在组织上滴加胃蛋白酶或胰蛋白酶，37℃孵育20~30min 后TBS 冲洗即可。二、微波抗原修复法微波盒中加入抗原修复液微波加热至沸腾，将脱蜡水化后的切片置于耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中，中档或高档继续微波10~15min，取出微波盒冷却至室温后，自来水冲洗，取出切片。因不同微波炉微波处理时间存在差异，须自行调整。三、直接高压抗原修复法取修复液于不锈钢高压锅中加热至沸腾，将组织切片置于耐高温切片架上，修复液沸腾后放入切片架，盖上锅盖，待喷气后计时1.5~2.5min 即可脱离热源，自然冷却至室温后自来水冲洗，取出切片。此方法适用于较难检测或核抗原的修复。四、隔水式高压抗原修复法不锈钢高压锅中加自来水加热至沸腾，微波盒中加入修复液于微波炉中加热至沸腾，将切片放入微波盒中，再将微波盒放入高压锅中盖上锅盖，待喷气后计时4~8 min 即可关闭热源，自然冷却至室温后自来水冲洗，取出切片。此方法适用于较难检测或核抗原的修复。

膜蛋白提取试剂盒产品组成：产品组成 3103-1 3103-2规格 50 assays 100 assays试剂 A 10ml 20ml试剂 B 20ml 40ml试剂 C 10ml 20ml蛋白酶抑制剂混合物 250μl 500μl注：● 蛋白提取液： 含多种有效成分，可以充分释放膜蛋白。提取液中已含磷酸酶抑制剂混合物。● 蛋白酶抑制剂混合物：包含7种独立的蛋白酶抑制剂，AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、PepstatinA、Bestatin、E-64、EDTA。注意：1、蛋白酶抑制剂混合物避免反复冻融。2、如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。储存条件：蛋白酶抑制剂-20℃保存；蛋白提取液2-8℃保存。有效期：一年。注意事项：● 本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。产品简介：哺乳动物跨膜蛋白承担各种生物功能，在疾病的发生、发展过程中扮演重要角色。膜蛋白样品的制备需要充分考虑到与下游的胶分析及质谱分析等应用配套，因此膜蛋白样本制备成为一个难以逾越的挑战。传统制备膜蛋白样品的方法是使用去污剂和表面活性剂增溶。去污剂处理会使膜蛋白丧失其天然结构，因而妨碍了膜蛋白的功能研究。贝博膜蛋白提取试剂盒是一种基于化学而非去污剂方法的高产膜蛋白提取试剂盒。本产品说明书本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！试剂盒提供全套试剂，适用于从细胞和动物组织提取膜蛋白。提取过程简单方便，可在1小时内完成。提取的膜蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。提取的蛋白可用于Western Blotting、转录活性分析、Gel shift 凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。应用实例：1 4 4图片说明：用膜蛋白提取试剂盒提取细胞样本的SDA-PAGE的电泳考染照片和Western照片。图1泳道中1、4分别为Marker、膜蛋白样本。图2为以上样品的EGFR的WB结果照片。产品特点：1、使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。2、将蛋白提取的时间缩短至 30 分钟-1 小时。3、含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。4、紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。5、蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含7 种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。试剂盒以外自备试剂和仪器● 移液器、吸头 ● 离心机及离心管● 涡旋振荡器 ● 冰箱，冰盒使用方法：使用注意事项：1. 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。2. 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。3. 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。4. 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。5. Western 实验内参可以选用Tubulin、Na-K ATPase。更多蛋白提取常见问题分析等资料可以联系本公司索取。产品说明书本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！A． 细胞蛋白提取1. 取 5-10×106 个以上细胞①，在4℃，500g 条件下离心2-3 分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。2. 用冷 PBS 洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。3. 细胞样品中加入 200μl 冷的试剂 A，2ul 蛋白酶抑制剂混合物，高速涡旋振荡15 秒，置冰上10-15 分钟。4. 再次高速涡旋振荡 5 秒，然后在4℃，13000×g 条件下离心5 分钟。5. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，37℃水浴10 分钟，37℃下②2000g离心5 分钟，此时溶液分为两层（对着光线看），上层是水相，下层是有机相约为20μl。6. 收集水相留作备用分析③。7. 用 200μl 冰冷的试剂B 溶解有机相沉淀，冰浴2min 后加温，在按步骤5 再次离心。8. 按步骤 7 再次抽提有机相(此步骤可以选做)。9. 用 80-200μl 冰冷的试剂C 稀释有机相，即得膜蛋白。10. 将上述蛋白提取物定量④后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验⑤。注：① 细胞数量根据实验情况调整，每次的裂解液用量并不是一定的，请根据实际情况调整。由于膜蛋白含量较少，需要较多的细胞才能保证得率。② 必需保证在37℃左右下离心，至少确保30℃以上。③ 进行下游实验时，可用试剂C 分别稀释水相与有机相，取一个水相样品同时进行实验分析。④ 用BCA 法进行蛋白定量。⑤ 蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。B．组织蛋白提取1. 取适量组织样本剪碎，加冷PBS，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体（或用液氮研磨），冰上静置5 分钟，小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。2. 在 4℃，500g 条件下离心2-3 分钟，弃上清。3. 按照细胞蛋白的提取方法的第 3 步骤往下操作即可。上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用。注：① 用液氮研磨的方法更佳，具体方法可以联系本公司bestbio@yahoo.cn 索取详细资料。使用本产品发表的部分新文献：● 李素芬, 杨鹰. 不同浓度瘦素对人胚胎绒毛滋养细胞膜胰岛素受体磷酸化的抑制作用第三军医大学学报, 2010,32(23): 2530-2532.相关产品：产品 产品号 产品 产品号总蛋白提取试剂盒 3101 核蛋白提取试剂盒 3102产品说明书本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！

JBC：热激蛋白90或可诱发癌细胞的代谢最近，一项发表在国际杂志Journal of Biological Chemistry上的研究论文中，来自美国中佛罗里达大学(University of Central Florida)的研究人员通过对人类机体中发现的一种特殊蛋白进行研究，或可帮助开发出治疗癌症及神经变性疾病的新型疗法。此前研究中研究者发现，名为热激蛋白90（Hsp90）的修饰形式或可诱导神经变性障碍患者机体的神经系统中的细胞死亡；而如今研究者Maria C. Franco却发现，Hsp90并不会对所有的细胞进行一样的处理，实际上，杀灭某些细胞的相同的蛋白质或许会帮助癌细胞。Franco说道，我们仅在病理学条件下发现一种特殊蛋白可以被修饰，在神经系统中这种蛋白对于受神经变性疾病影响的细胞具有毒性，然而在肿瘤细胞中，这种蛋白实际上可以作为一种促生存的制剂；因此在这两种情况下靶向作用氧化后的蛋白质或许可以帮助开发一种新型可替代的治疗手段。Hsp90目前作为潜在的抗癌药物研究地较多，但实际上对其研究的进展相当慢，而本文研究中研究者就阐明了Hsp90的复杂特性对细胞的影响；该蛋白的硝化作用可以有效限制细胞中线粒体的氧气供应，从而降低细胞的能量产生，这听起来就好像敲响了细胞的丧钟一样，但氧气消耗的降低或许会通过增加癌细胞对缺氧的耐受来帮助癌细胞增殖。目前研究者正在研究Hsp90及其它氧化蛋白在调节细胞代谢上所扮演的角色，目的在于鉴别出新型抵御肿瘤的靶点，研究者非常渴望寻找到新型疗法在不损伤健康细胞的前提下还可以有效抵御肿瘤细胞的增殖，当然后期研究者还需要进行更多深入的研究或许才可以以Hsp90为靶点开发出新型的癌症个体化疗法。

小鼠胰淀粉酶α2(AMY2)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 96T12U/L - 400U/L使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中胰淀粉酶α2(AMY2)活性。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠胰淀粉酶α2(AMY2)水平。用纯化的小鼠胰淀粉酶α2(AMY2)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入胰淀粉酶α2(AMY2)，再与HRP 标记的胰淀粉酶α2(AMY2)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的胰淀粉酶α2(AMY2)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中小鼠胰淀粉酶α2(AMY2)活性浓度。试剂盒组成1 30 倍浓缩洗涤液20ml×1 瓶7 终止液6ml×1 瓶2 酶标试剂6ml×1 瓶8 标准品（800U/L） 0.5ml×1 瓶3 酶标包被板12 孔×8 条9 标准品稀释液1.5ml×1 瓶4 样品稀释液6ml×1 瓶10 说明书1 份5 显色剂A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 张6 显色剂B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 个标本要求1. 血清：室温血液自然凝固10-20 分钟后，离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20 分钟后，离心20分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。尿液：用无菌管收集。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。5.培养细胞:检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100 万/ml 左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。6.组织标本:切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。7.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融8.不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。400U/L 5 号标准品150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液200U/L 4 号标准品150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液100U/L 3 号标准品150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液50U/L 2 号标准品150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液25U/L 1 号标准品150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复5 次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。7. 温育：操作同3。8. 洗涤：操作同5。9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟.10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止液后15 分钟以内进行。操作程序总结：计算以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值大于标准品孔第一孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6 个月

Nature：终于找到你！肝脏干细胞来源揭秘Nature杂志最新在线的一篇研究中，Howard Hughes医学研究所（HHMI）的科学家确定了能够分化为功能性肝细胞的干细胞。这项研究解开了关于肝脏不断新生的细胞到底从何而来的老谜团。研究的通讯作者，斯坦福大学HHMI研究员Roel Nusse博士说:“我们解决了一个很老的问题.我们发现，就如同其他需要补充丢失细胞的组织，肝脏干细胞也会增殖和产生成熟细胞，甚至在没有肝损伤或疾病的情况下。”肝脏主要由高度分化的肝细胞组成并完成许多任务，包括储存维生素和矿物质、去除毒素、调节血液中脂肪和糖。这些细胞的死亡后，由健康的新肝细胞取代。但这些新细胞的来源从来没有被确定。干细胞，能在补充保持自己数量的同时发展成高度分化的细胞，为皮肤，血液等组织在随着时间丢失细胞的时候提供新的细胞。但是，在肝脏中还没有发现过干细胞的存在。一些科学家推测，成熟的肝细胞可能通过分裂保持其数量。但Nusse博士说，肝脏成熟的细胞已经高度分化，它们可能已经失去了分裂能力。“分化过的肝细胞染色体已经放大，”他解释说，“这表明这些细胞的每一条染色体有超过两个副本。这保证细胞能产生更多的蛋白质，不过确实会损害了它们的分裂能力。”Nusse实验室专注于一个称为Wnts的蛋白质家庭，他们是干细胞命运的关键调节子。通过寻找和跟踪各种组织的干细胞，他们已经开发出细胞响应Wnt信号后会发出荧光信号的小鼠。几年前，他们决定用这种工程改造的小鼠来搜索肝脏中的干细胞。研究人员通过搜索肝脏中的荧光标记，他们最终发现位于肝脏的中央静脉周围的干细胞。在锁定这些细胞后，研究人员继续跟踪了荧光标记的细胞的行为。这些细胞随着时间的推移迅速分裂，不断稳定地补充自己的数量。这个推测正确的可能性在于，不像成熟肝细胞，标记的细胞每个染色体只有两个拷贝。在随后一年中，科研人员发现这些标记的细胞发生改变，出现分化的细胞功能和成熟肝细胞扩增的基因组。这使得它们彻底符合了干细胞的定义。正如所料，肝干细胞需要Wnt信号以保持它们干细胞的身份。Nusse小组发现，正是中央静脉内的血管内皮细胞释放的Wnt分子进入组织。如果干细胞迁移后跑出了Wnt信号的覆盖范围，它们便迅速失去了分裂新干细胞的能力，开始发展成成熟的肝细胞。Nusse博士表示，这是已知的其他组织内干细胞行为是一致的。该实验室目前正在研究新发现的干细胞如何在肝损伤后帮助肝组织再生。肝癌是否倾向起源于这些细胞，还是比较成熟肝细胞？找到这个问题的解答也十分有意义。

Nature：肿瘤关键蛋白结构被成功解析发表在国际杂志Nature上的一项研究报告中，来自阿贡国家实验室等处的研究者利用高特异性的X射线晶体学技术解析了低氧诱导性因子（HIFs）的蛋白结构，低氧诱导性因子是肿瘤对低氧反应的重要调节子，该研究或为寻找新型药物切断癌细胞的氧气和营养供给最终治疗癌症提供新的思路。研究者Fraydoon Rastinejad博士指出，这项研究中我们首次揭开了携带ARNT亚蛋白的HIF1-α和HIF2-α复合体的结构，ARNT亚蛋白是维持HIF功能所需的结构；而对这些多领域结构的可视化或可帮助研究者理解药物结合的能力，也为后期开发新型药物抑制HIFs的促肿瘤效应提供帮助。HIF蛋白可以调节对一系列肿瘤发展非常重要的基因的表达，调节这些基因的活性被认为是癌症治疗中有前途的方法，目前很多制药部分都在努力寻找可以抑制HIF途径的药物，研究者仅发现了可以结合名为PHDs的候选药物，PHD可以调节HIF蛋白的活性，在当前治疗贫血症、慢性肾疾病、中风以及癌症等一系列临床试验中有许多PHD的抑制剂。Rastinejad表示，本文研究为我们寻找结合HIF的药物，而不是结合PHDs的药物提供了一定帮助，目前我们在HIF复合体的结构中鉴别出了5个不同的槽状结构，所有这些槽状结构都可以被用来开发靶向作用的小分子抑制剂，而这些药物或可通过降低HIF的稳定性来抑制其功能的发挥。抑制HIFs的药物或许可以被用来治疗实体瘤，因为实体瘤的生长可以超过给其的血液供给，从而就会使得癌细胞变得缺氧，进而刺激HIFs开启调节癌细胞生存途径的基因的表达，包括血管发生、红细胞生成、无氧代谢基因表达的增加以及癌症转移；所有这些过程的协同作用都可以帮助促进肿瘤的生长以及其对药物的耐受性，最终降低患者的生存率。下一步研究者将将对一系列HIF蛋白突变的病人样本进行分析，研究者想去鉴别出HIF蛋白发生突变的位点，并且去揭示细胞促进HIF表现出功能异常的分子机制，而特殊的突变往往会给HIFs蛋白带来结构功能活性，来帮助其开启或关闭基因的表达。随着研究者对HIFs结构、功能及调节机理的理解，研究者或将开发出除癌症的新型疗法以外的其它一系列疾病的疗法，比如心脏病、脂肪肝、糖尿病及炎性疾病等。

小鼠谷氨酸半胱氨酸连接酶(GCLM)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 96T3.0ng/L -100 ng/L使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中谷氨酸半胱氨酸连接酶(GCLM)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠谷氨酸半胱氨酸连接酶(GCLM)水平。用纯化的小鼠谷氨酸半胱氨酸连接酶(GCLM)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入谷氨酸半胱氨酸连接酶(GCLM)，再与HRP 标记的谷氨酸半胱氨酸连接酶(GCLM)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的谷氨酸半胱氨酸连接酶(GCLM)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中小鼠谷氨酸半胱氨酸连接酶(GCLM)浓度。试剂盒组成1 30 倍浓缩洗涤液20ml×1 瓶7 终止液6ml×1 瓶2 酶标试剂6ml×1 瓶8 标准品（200ng/L） 0.5ml×1 瓶3 酶标包被板12 孔×8 条9 标准品稀释液1.5ml×1 瓶4 样品稀释液6ml×1 瓶10 说明书1 份5 显色剂A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 张6 显色剂B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 个标本要求1. 血清：室温血液自然凝固10-20 分钟后，离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20 分钟后，离心20分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。尿液：用无菌管收集。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。5.培养细胞:检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100 万/ml 左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。6.组织标本:切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。7.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融8.不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。100 ng/L 5 号标准品150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液50 ng/L 4 号标准品150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液25 ng/L 3 号标准品150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液12.5 ng/L 2 号标准品150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液6.25 ng/L 1 号标准品150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复5 次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。7. 温育：操作同3。8. 洗涤：操作同5。9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10 分钟.10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止液后15 分钟以内进行。操作程序总结：计算以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值大于标准品孔第一孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6 个月

Nature：史上最早！看5.65亿年前的植物如何性繁殖近日Nature杂志上，剑桥大学研究人员在线发表了他们发现的复杂有机体性繁殖的最早证据。一些生活在5.65亿年前，被称为叶状形态类生命（rangeomorphs）通过采取联合的方式繁殖传代：他们首先派出一个“先遣队”定居在一个新的领域，随后在新领域的周围里快速繁殖后代。这个发现或可能有助于揭示现代海洋环境的起源。叶状形态类生命是地球上最早的一类复杂生物。他们蓬勃发展在的埃迪卡拉纪晚期的海洋（580至541万年前），长度最高可达两米，大多数仅约十厘米。看上去它们就像树木或蕨类植物，它们并没有口，器官或移动方式，而且很可能从周围的水中吸收营养物质。像许多埃迪卡拉纪的生命形式，叶状形态类生命神秘地消失在大约540万年前开始的寒武纪，所以一直难以将叶状形态类生命链接到任何现代生物，或者弄清楚他们如何生活、他们吃什么，以及它们如何繁殖。剑桥大学地球科学系的Emily Mitchell博士解释说：“叶状形态类生命并不像化石中的其他生命，这也是他们为何如此神秘的原因。但是我们已经开发出研究它们的一种全新的方式，将有助于我们的对它们理解。而我们最感兴趣的是，它们如何进行繁殖行为。”Mitchell博士和她的同事们使用高分辨率GPS，空间统计和建模，研究一种名为Fractofusus的物种的化石，以确定它们是如何繁殖。该化石是来自加拿大东南部纽芬兰，世界上埃迪卡拉时期化石最丰富的地区之一。由于叶状形态类生命是不能移动的，所以有可能通过空间技术研究找到整个生态系统中它们留下的确切位置。通过统计学方法研究Fractofusus的物种分布，研究人员发现，较大的“祖父”都是随机分布在环境中，而较小的“父母”、“子孙”则围绕在周围。这些模式强烈类似于在现代植物中观察到的生物聚类，并提示一种繁殖的双重模式：“祖父母'是水性繁殖体的产物，而“父母”和“子孙”由上一代伸展长出，就像草莓植株。在化石中观察到的这种以“代”聚集的模式（ generational clustering patterns），与现在植物中常见的筑巢双托马斯群集模型（nested double Thomas cluster model）紧密贴合。这些模式表明它们是通过使用匍匐茎进行快速无性繁殖。同时，随机分布的更大的“祖父母”Fractofusus化石标本表明，它们是水性繁殖体，这表示“祖父母”可能是有性或无性繁殖的产物。Mitchell博士说：“叶状形态类生命这种繁殖方式非常高明，因为它们既能殖民新领域，并迅速蔓延。这些生物切换两种不同的繁殖模式显示其潜在的生物机制是多么复杂。相比于同时期大部分其他相当简单的生命形式，这一点足以表示它的了不起。”研究人员使用的这种空间分析重建埃迪卡拉纪生物的研究方法仅处于起步阶段，而研究人员打算再扩大他们的方法，以进一步了解这些奇怪的生物是如何影响它们的环境以及相互影响。

溜溜球瘦身和患癌没关系近日，一项刊登于国际杂志the American Journal of Epidemiology上的研究论文中，来自美国癌症协会的研究人员通过研究指出，溜溜球瘦身或许和个体总体的癌症风险增加并无关联，溜溜球瘦身是指减肥者采用过度节食的方法而导致身体出现迅速减重又迅速反弹的情况。研究者表示，在考虑了体重指数和其它因素的情况下，体重循环和男性或女性总体的癌症风险并无关联，同时体重循环也与任何个体的癌症调查也并无关联；想要尽力减肥的个体应当被鼓励减肥，尽管他们身上的“肉”会再回归到他们身上。几乎一半的美国成年人都会竭尽全力去减肥，但大多数的体重减轻并不会维持住，而体重循环却表现得非常常见。此前对动物和人类机体进行研究就表明，体重循环或许会影响引发癌症的生物学过程，比如增加T细胞的积累，增强脂肪组织的炎性反应，以及减少自然杀伤T细胞的毒性，然而很多研究都不能被复制，至少有两项研究都发现体重循环和癌症并无关联。在这项最新研究中，Victoria Stevens博士表示，我们对癌症预防研究II期队列人群中超过13.2万的男性和女性进行研究，检查了体重循环和癌症发病之间的关系，癌症预防队列研究开始于1992年/1993年，营养队列研究人群中收集了来自50岁至74岁所有参与者的详细饮食信息，这对于研究饮食效应及癌症发生率和死亡率将会是巨大的财富。研究者观察了体重循环和所有癌症及15种单一癌症发生率之间的关系，在研究的17年间，有超过2.5万参与者都患上了癌症。对于那些正在同减肥作斗争的数百万美国人而言，他们需要担心的是是否减下去的肉回再回来，他们或许会担心这会增加患癌的风险，但本文研究表明，溜溜球式的瘦身方式并不会增加个体的患癌风险。

小鼠信号传导转录激活因子3(STAT3)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 96T7IU/L- 260IU/L使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，血浆及相关液体样本中STAT3 的活性。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠STAT3 水平。用纯化的小鼠STAT3 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入STAT3，再与HRP 标记的STAT3抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的STAT3 呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中小鼠STAT3 活性浓度。试剂盒组成1 30 倍浓缩洗涤液20ml×1 瓶7 终止液6ml×1 瓶2 酶标试剂6ml×1 瓶8 标准品（480IU/L） 0.5ml×1 瓶3 酶标包被板12 孔×8 条9 标准品稀释液1.5ml×1 瓶4 样品稀释液6ml×1 瓶10 说明书1 份5 显色剂A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 张6 显色剂B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 个标本要求1. 血清：室温血液自然凝固10-20 分钟后，离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20 分钟后，离心20分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。尿液：用无菌管收集。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。5.培养细胞:检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100 万/ml 左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。6.组织标本:切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。7.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融8.不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。240IU/L 5 号标准品150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液120IU/L 4 号标准品150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液60IU/L 3 号标准品150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液30IU/L 2 号标准品150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液15IU/L 1 号标准品150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复5 次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。7. 温育：操作同3。8. 洗涤：操作同5。9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10 分钟.10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止液后15 分钟以内进行。操作程序总结：计算以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值大于标准品孔第一孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6 个月

俗解肿瘤免疫组合疗法【新闻事件】：今天《Nat. Rev. Drug Discov.》有一篇讨论肿瘤免疫组合疗法的综述，讲述了以哨卡抑制剂为核心的各种复方可能。经过我外行的鉴定现在的复方可能虽然很多，但多数处于理论和探索阶段。早期的成功例子也相当粗糙（比如CTLA4+PD-1组合毒性很大）。另外现在的组合主要关注的是应答率，并没有优化免疫疗法最大的优势，即应答持久性。由于我对免疫学了解甚少，所以看的头昏脑胀。我估计很多非免疫学的读者会有同样经历，所以我今天就把这篇文章俗解一下。  【药源解析】：肿瘤细胞在发展过程中不断积累变异，所以不可避免地表达一些抗原，所以理论上应该被免疫系统清除。但肿瘤细胞在艰苦的生存环境下学会如何避免被免疫系统清除，除了激活免疫哨卡（check point）还有降低抗原表达、改变肿瘤免疫微环境、躲避细胞凋亡识别等几个主要途径。免疫系统对肿瘤的识别通俗地讲就如同男女婚嫁。一男一女只是个基本条件（多数情况下），两个人是否能走到一起还得看很多其它因素。比如是否有房有车，这些相当于PD-1、CTLA4这样的哨卡。性格是否匹配、志趣是否一致相当于4-1BB、OX40这些免疫活化受体。改变这些因素的任何一个都能改变匹配程度，但很多时候需要同时改变两个以上的因素才能显著改变匹配程度。这也是这篇文章的核心，即如何开发I-O复方组合。有兴趣的读者可以看看文章的表1，列举了20多个影响免疫系统识别肿瘤和活化的受体。有人问了为什么不把所有哨卡都抑制、所有激活受体都激活？问题是免疫系统威力巨大，过分激活后果不堪设想。2006年曾有一个CD28超级激动剂在一期临床把6个健康志愿者送进ICU，公司因此倒闭。连Yervoy和Opdivo的组合也毒性很大，很多人因无法耐受退出临床实验虽然应答也有显著提高。借用上面择偶的比喻，你如果把对方变得长相如周润发、财富如巴菲特、身材如史泰龙，这虽然满足您的条件了但这种高富帅吸引的人太多，容易产生严重副作用。现在已经开始临床研究的组合包括和化疗、靶向疗法、以及不同I-O疗法的相互组合，机理包括降低肿瘤负担、增加肿瘤特异抗原、清除Treg和免疫抑制细胞（本身抑制杀伤T细胞）等。有些肿瘤通过表达PD-L1对靶向疗法耐受，所以加入PD-1抑制剂可以产生协同效应。有些生长因子如VEGF本身有免疫抑制功能，所以VEGF抗体和PD-1抗体组合可能效果更好。文章还提到其它一些具体例子。另一个大方向是改变免疫微环境，比如前一段火热的IDO、TGFbeta属于这一类。延续上面的比喻，如果你没房没车但如果能把社会环境改回到70年代也可以，因为那时候的择偶标准不包括这些。还有一个方向是干扰细胞凋亡（apoptosis）。正常细胞凋亡是严格控制的，所以没有免疫原性，但如果干扰这个过程则可能令免疫系统认为有异常活动，产生免疫原性。有趣的是两个功能相反的细胞表面标记抗体（一个要求被清除，一个要求被保留）都能诱发免疫反应。文章最后指出淋巴细胞在肿瘤组织的渗透（即渗透率越过越可能对I-O应答）和淋巴结构是免疫疗法成功与否的重要因素，应该成为以后诊断和治疗选择的标准。总之，免疫疗法非常复杂，还有许多需要搞清的东西，但似乎前景非常诱人。用James Allison的话来说我们终于找到了一个和肿瘤复杂程度匹配的治疗办法，那就是免疫疗法。但如何优化应答持久性这个关键问题文章没有讨论，希望以后会发现一些早期标记物以便开发应答持久的I-O药物。

胰高血糖素受体的全长构象变化与功能关系研究取得突破性进展于2015年7月31日在线发表了中国科学院上海药物研究所蒋华良课题组和王明伟课题组与美国南加州大学Raymond C. Stevens、Scripps研究所Patrick Griffin和Bridget Carraghe、荷兰阿姆斯特丹自由大学Chris de Graaf和上海科技大学iHuman研究所宋高杰等实验室的合作研究成果。这项研究基于全长胰高血糖素受体的分子动力学模拟，提出了该受体胞外段与跨膜区的动态变化模式，通过配体结合和功能性实验验证了这种动态过程，并结合电子显微镜、氢氘交换、二硫键交联和质谱技术发现了该受体存在“开放”和“关闭”两种分子构象，从而为其本身以及其他B型G蛋白偶联受体的全长结构解析、功能研究和药物发现奠定了基础。 G蛋白偶联受体（GPCR）与多种疾病相关，约有40%的现代药物是以这类受体为靶点的。胰高血糖素受体是B型G蛋白偶联受体家族的成员之一，在肥胖、糖耐量受损和2型糖尿病的发病机制中扮演重要角色。两年前，由王明伟研究员和Raymond Stevens教授率领的研究团队携手解析的胰高血糖素受体跨膜区三维结构被誉为是G蛋白偶联受体研究领域的标志性成果。然而胰高血糖素受体等B类GPCR的全长结构尚未被解析，这就限制了对这类受体构象变化与功能关系的认识。因此，蒋华良研究员和王明伟研究员带领上海药物研究所的多名科学家对全长胰高血糖素受体进行了分子动力学模拟研究和功能性实验验证，发现该受体存在开放态和关闭态两种构象：当有配体结合时，其胞外区与跨膜区相对独立，处于开放态；在无配体存在时，空载受体的胞外区则倒向跨膜区，与后者的胞外环相互作用，受体处于关闭态，说明胰高血糖素是以一种构象选择性的方式与其受体结合的。在此基础上，他们开展国际合作，通过电子显微镜、氢氘交换和质谱等技术确认了上述发现。 该项研究由中国、美国、荷兰和丹麦等四国的十个实验室参与完成，中方的工作得到了“重大新药创制”国家科技重大专项、国家自然科学基金、中国科学院、上海市科学技术委员会以及丹麦诺和诺德公司等的资助。

人血清铁酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 96T5pg/ml-120pg/ml使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中血清铁含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人血清铁水平。用纯化的人血清铁抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入血清铁，再与HRP 标记的血清铁抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的血清铁呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人血清铁浓度。试剂盒组成1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 标准品（240pg/ml） 0.5ml×1 瓶3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份5 显色剂A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张6 显色剂B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。120pg/ml 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液60pg/ml 4 号标准品 150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液30pg/ml 3 号标准品 150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液15pg/ml 2 号标准品 150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液7.5pg/ml 1 号标准品 150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复5 次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。7. 温育：操作同3。8. 洗涤：操作同5。9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟.10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液后15 分钟以内进行。操作程序总结：计算以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值大于标准品孔第一孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6 个月

谁将成为吉利德的收购对象近日，吉利德公布了第二季度市场销售额，两种丙肝药物Harvoni 和 Sovaldi再次取得巨大成功，一共带来50亿美元的利润。那么吉利德赚了这么多钱会用来做什么呢？Evercore/ISI分析师Mark Schoenebaum表示：“现在大家都在思考一个重要问题，吉利德会收购哪些公司？”前段时间 Schoenebaum才催促百健艾迪CEO George Scangos在生物技术领域接受收购。吉利德总裁 John Milligan表示：“我们现在既可以考虑小额交易，又可以考虑大笔交易，甚至是些具有变革意义的项目。我们现在有能力也有时间选择自己喜欢的、能够做好的事情，把新的产品带到市场，保持销售额领先的地位。”第一季度销售额发布后，吉利德CEO John Martin就已表示出可能会进行收购，不过之后便不了了之。Vertex囊性纤维化刚刚获批，有可能成为吉利德的猎物。野村证券的分析师M. Ian Somaiya则认为Incyte可能性更大，因为巨头新基已经收购Receptos，吉利德不可能坐以待毙。此外，罕见病研究企业BioMarin也一直是热门候选。分析师认为，吉利德手上现金很多，购买新生产线的资本成本很低。上周百健艾迪利润略有减少，阿尔兹海默研究结果并不让人满意，如果吉利德真有所动作，百健艾迪将对其产生很大影响。Allergan已经准备好405亿美元收购资金，Brent Saunders已经明确表示出收购意向。辉瑞CEO Ian Read也在公司会议上向分析师们强调自己不会放弃任何好的收购机会。甚至百健艾迪CEO Bob Hugin都表示出不一定会拒绝大笔交易。不过大多数分析师认为距离下一笔大型交易还有一段时间。然而并非所有大公司都热衷收购，罗氏CEO Severin Schwan ，礼来CEO John Lechleiter纷纷表示近期不会收购生物技术公司。未来，生物医药收购价一再上涨，风险将变得更大，规模也将更大。

脂肪有没有“第六味”？疑问：“脂肪味”是什么样的味道？它是否应该被定义为人类的第六种基本味觉？这项研究对人类应对肥胖问题有何意义？释疑：“脂肪味”？即便对吃货而言，这也是一个少有耳闻的“新”概念。但事实上，早在2005年，就已有科学家在啮齿类动物的舌头上发现了长链脂肪酸的感觉器官，后来一系列研究更表明，人类对脂肪的味觉感受可能与一种叫作CD36的蛋白质受体有关。然而，尽管围绕“脂肪味”涌现出越来越多的研究成果，这种“第六味觉”的存在却尚未得到学界和大众的普遍认可。珀杜大学的研究成果就是在为“脂肪味”的存在寻找进一步的证据。在实验中，志愿者被要求戴上鼻夹，品尝藏在不透明容器中质地相同的样品。根据受试者的反馈，短链脂肪酸有酸味，中链脂肪酸有一定刺激性，而长链脂肪酸则具有一种独特的、不大讨人喜欢的味道。曾有机制研究表明，脂肪味觉受体如果存在，主要是与长链脂肪酸相互作用，而这恰恰与上述结论互相吻合。但中科院遗传与发育生物学研究所研究员约翰·斯皮克曼则认为，要认定“脂肪味”是人类的第六种基本味觉，还有很长一段路要走。“这项研究的主要问题在于，它的结论仅仅是建立在受试者反应的报告之上。”斯皮克曼说，“诚然，受试者表现出不仅能够鉴别游离脂肪酸的倾向，而且它们对短链和长链脂肪酸有明显不同的反应，但在分子和生理水平上，有待验证的东西仍然很多。”斯皮克曼指出，证实一种基本味觉的最重要证据就是特异性的味觉受体，这种受体必须能够、而且只能被特定物质激活。“就目前的研究结果来看，不能排除脂肪酸的独特味道是因为连续激活了多种其他味觉的受体。”斯皮克曼说。事实上，这篇论文也的确提到，短链脂肪酸会刺激酸味受体，而长链脂肪酸则可能激活了苦味受体。与人们的经验相悖，受试者反映的“脂肪味”并不美好。中科院生物物理研究所研究员刘平生认为，这可能与样品物质的浓度和分子结构有关。“不同味觉受体对配体物质的亲和力不同，有些受体只能接受高浓度信号，有些则只接受低浓度信号。因此物质浓度不同，反映在味觉上也有所不同。此外，物质分子结构的极细微变化就可能造成‘香’与‘臭’的巨大分别。”如果脂肪真的有味道，这对人类应对肥胖等健康问题又有什么借鉴意义呢？对此，刘平生指出，研究“脂肪味”最直接的贡献就在于开发脂肪替代品。基于对脂肪味道的深入了解，人们就能更加逼真地模拟天然脂肪的味觉感受，制造出能满足食欲、却不会使人发胖的产品。但他坦言，这种思路并不稀奇，人们在这方面早已作过很多探索。除此之外还有更大的启发。斯皮克曼认为，有必要进一步研究人们对脂肪味觉的不同体验是否会导致个体对高脂食物喜爱或厌恶的不同态度。“如果答案是肯定的，这项成果就很有意义。”他说，“因为那样的话，我们就可能通过阻断相应的味觉受体，使高脂食物不再那么让人着迷。”对这一前景，刘平生却并不期待。“我不赞成以牺牲人们的饮食享受为代价来减肥。”他说，“对现代人而言，进食早已不仅是能量摄入的手段，而更是一种娱乐、一种文化、一种精神层面的享受。通过剥夺愉悦感来遏制人们对食物的渴望，这种做法很可能引起大众的反感，从而无法推广。”他认为，解决肥胖问题的根本途径，还是在吸收和代谢层面做文章。“生物学家的任务不是减少人类的享受，而是让人们在活得更健康的同时，也更加愉快。”刘平生说。

乳酸（Lactate）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 96T0.7μg/L - 20μg/L使用目的：本试剂盒用于测定发酵液样本中乳酸（Lactate）含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中乳酸（Lactate）水平。用纯化的乳酸（Lactate）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入乳酸（Lactate），再与HRP标记的乳酸（Lactate）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的乳酸（Lactate）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中乳酸（Lactate）浓度。试剂盒组成1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 标准品（40 μg/L） 0.5ml×1 瓶3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份5 显色剂A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张6 显色剂B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。20μg/L 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液10μg/L 4 号标准品 150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液5μg/L 3 号标准品 150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液2.5μg/L 2 号标准品 150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液1.25μg/L 1 号标准品 150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复5 次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。7. 温育：操作同3。8. 洗涤：操作同5。9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟.10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液后15 分钟以内进行。操作程序总结：计算以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值大于标准品孔第一孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6 个月

PNAS：免疫细胞基因编辑给癌症和艾滋病带来希望人类中的很多突变都与基因突变相关。例如，白化病是因为酪氨酸酶基因上的点突变导致酪氨酸酶功能异常，从而导致了黑色素合成障碍。还有一些病症涉及到多种基因突变导致的功能障碍。如果能够使用某种精确的基因编辑方法，修补这些基因突变，从理论上讲，就可以一定程度缓解病情。而人类T细胞的基因突变导致其功能异常，会导致很多病症的出现或者加重。针对T细胞的基因改造，对于癌症的免疫治疗、艾滋病、免疫缺陷病、自身免疫病，都可能会带来新的希望。美国加州旧金山的科学家们使用CRISPR/Cas9系统成功精确改造了人类T细胞基因组，相关进展发表在《美国科学院院刊》。他们利用Cas9对初级淋巴细胞的成功精确改造，是基因工程治疗真正用于疾病治疗的开端，具有里程碑式的意义。针对T淋巴细胞的基因改造的设想早已提出，并且从理论上，科学家们认为改造T淋巴细胞可能可以用于癌症等多种疾病的治疗。然而，改造T淋巴细胞的基因组并非易事，只有很少的细胞能够完成基因组编辑。基因改造系统需要敲除T淋巴细胞内的一些基因，加入一些基因进入基因组，还需要修复一些突变的基因位点。最新的这个研究，使用Cas9系统，引起CXCR4蛋白的编码基因被随机插入碱基或者碱基丢失突变，而表达降低。这种CXCR4蛋白是HIV病毒识别T淋巴细胞的关键因子。而且，他们还使用Cas9系统精确引入碱基突变，可以在初级淋巴细胞中改造CXCR4和PD-1的基因。可以导致这两种蛋白质表达下降。PD-1蛋白的表达下降可以导致T淋巴细胞更好地识别恶性癌细胞，增加免疫系统的抗癌能力。实验使用的Cas9系统的核酸酶（RNPs）是在细胞外组装完成的，然后使用电击穿孔的方法，导致细胞膜增加通透性，核酸酶进入细胞后完成基因改造。通过Cas9改造后，有大约40%的细胞CXCR4蛋白表达下调。使用深度测序的方法分析这些细胞的基因组发现，他们的Cas9改造实现了20%的基因编辑效率。即使用50pmol和100pmol的同源定向修复模板（HDR），分别可以到达22%和18%的细胞被成功改造并蛋白表达下降。这表明了这个系统可以很高效完成针对T淋巴细胞的基因组改造（基因敲除和基因嵌入）。针对改造成功和未成功改造的T淋巴细胞，使用针对低CXCR4表达量的特性选出那些基因编辑过的细胞。富集之后的细胞，通过某些处理，再重新导入人体，可能可以作为抗肿瘤或者艾滋病的新的免疫治疗方法。使用Cas9系统针对T淋巴细胞基因组的精确改造，比起针对胚胎的基因改造的伦理问题更小。因为，改造的这些细胞一般不会传递到下一代，因此审核不会太严格。此外，还有很多医药公司等着这样的基因改造，而针对T淋巴细胞改造后设法输入人体的研究已经有了很多的技术积累。这个研究的作者们认为，在更加严谨地完成基因改造和充分考虑安全性之后，就可以很快用于临床的实验，因此在治疗癌症、艾滋病和自身免疫病等领域将会有着非常光明的前景。

微滴式数字PCR在HBV cccDNA检测中的应用微滴式数字PCR由于其绝对定量的特点在病毒的核酸检测中也有很好的应用前景，尤其是对于低拷贝或极低拷贝的病毒进行核酸检测。从目前的文献发表情况来看，欧美科学家主要将ddPCR技术应用于HIV相关的核酸检测，而作为一个乙肝高发国家，中国科学家则努力尝试将ddPCR应用于HBV相关的核酸检测。下面这篇文章由重庆医科大学第二附属医院肝病研究所廖勇实验室完成，主要探讨ddPCR在cccDNA检测中的结果及临床应用的可行性。HBVcccDNA研究的重要性HBV共价闭合环状DNA(covalentlyclosedcircularDNA，cccDNA)是HBV复制的初始模板。在HBV感染的肝细胞细胞核内持续、稳定地存在，被认为是HBV感染慢性化及抗HBV治疗停止后复发的最主要原因。cccDNA是嗜肝DNA病毒在肝内进行复制的原始模板，虽然其含量较少，但对病毒在宿主细胞内感染状态的建立以及维持病毒在细胞内的复制过程具有十分重要的意义。与rcDNA不同，cccDNA位于宿主肝细胞的细胞核而非细胞浆中。嗜肝DNA的病毒基因组是一种松弛环状的双链DNA(relaxedcircularDNA，rcDNA)分子，其两条链均不闭合，其中负链较长。在病毒的复制过程中，病毒DNA进入宿主细胞核，两条链的缺口均被补齐，形成超螺旋cccDNA分子，在电镜下证实为大小约3.2kb的超螺旋DNA分子。当前慢性乙型肝炎抗病毒治疗难以彻底清除病毒，皆因cccDNA不能被彻底清除。只有清除肝细胞核内HBVcccDNA，才有实现治愈慢性乙型肝炎的目的。近年来，随着以实时荧光定量PCR技术为代表的各类cccDNA检测技术日渐成熟，以及临床医生对cccDNA检测临床意义的认识不断提高，cccDNA检测已从基础研究逐渐进入到临床应用。HBVcccDNA检测的难点1．大量与cccDNA序列同源性较高的其他形式的HBVDNA。包括：成熟病毒颗粒中的松弛、环状、双链DNA(relaxedcircularDNA，rcDNA)分子；部分病毒颗粒中存在的双链线性DNA分子(double-strandlinearDNA，dsDNA；由前基因组RNA(pregenomicRNA，pgRNA)逆转录形成的单链DNA(single-strandedDNA，ssDNA)；2．含量少，仅存在于肝细胞的细胞核内，约为30~50copies/cell。在接受抗病毒治疗的情况下含量更低；3．检测样品有限，目前最可靠的cccDNA检测标本是肝脏组织。文章目的：采用基于绝对定量的ddPCR对HBVcccDNA进行检测，验证该技术将来在临床应用的可行性。测试对象：ATCC的HepG2.215细胞系和pcDNA3.1-HBV1.3质粒。经过核酸纯化后，前者建立梯度如下：200，100，50，10，and1ng/ul；后者梯度稀释如下：10-5~100pg/ul(anequivalentof100~105copies/ul)。测试方法与平台：Bio-RadQX100dropletdigitalPCRSystem和Bio-RadCFX96TouchReal-timePCRsystem。2组不同的TaqManAssay设计思路，一种是专门针对cccDNA序列设计；一种是针对HBVDNA保守区域设计。前者只能特定检测cccDNA；后者能检测所有的HBV序列。测试的不同条件1．PSAD(Plasmid-safeATP-dependentdeoxynuclease，能降解除去非环状结构的HBVDNA)处理与不处理情况下的ddPCR结果；2．cccDNA特异性assay与HBV通用型assay。结果分析之ddPCR的灵敏度：以10-5~100pg/ul的pcDNA3.1-HBV1.3质粒为对象，ddPCR的检测灵敏度可达单拷贝。且在上述浓度范围内，实际检测得到的拷贝数与理论值一致。结果分析之PSAD处理对结果的影响：PSAD处理能有效去除其他非环状结构的HBVDNA分子，显着降低ddPCR检测得到的绝对拷贝数。结果分析之cccDNA特异性assay与HBV通用型assay的ddPCR结果：cccDNA的ddPCR检测含量说明，cccDNA特异性assay较之HBV通用型assay能更针对于cccDNA的检测，并且经过PSAD处理后能进一步提高检测的特异性。结果分析之ddPCR与QPCR结果比较：以cccDNA特异性assay对200，100，50，10，and1ng/ul梯度稀释的HepG2.215细胞系DNA进行分析，QPCR实现有效检出的最低含量为50ng的HepG2.215细胞系DNA，而ddPCR仅为1ng。上述不同测试条件下经过计算得到的拷贝数见下表汇总。可见基于ddPCR的核酸检测能够对HBVcccDNA实现灵敏并精确的定量，有望在临床上实现对慢性肝炎病人的组织样品进行检测及抗病毒的疗效评估。

人6-酮-前列素F1a(6-Keto-PGF1a)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 96T3ng/L – 120ng/L使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中6-酮-前列素F1a(6-Keto-PGF1a)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人6-酮-前列素F1a(6-Keto-PGF1a)水平。用纯化的人6-酮-前列素F1a(6-Keto-PGF1a)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入6-酮-前列素F1a(6-Keto-PGF1a)，再与HRP 标记的6-酮-前列素F1a(6-Keto-PGF1a)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的6-酮-前列素F1a(6-Keto-PGF1a)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人6-酮-前列素F1a(6-Keto-PGF1a)浓度。试剂盒组成1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 标准品（240 ng/L） 0.5ml×1 瓶3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份5 显色剂A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张6 显色剂B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。120 ng/L 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液60ng/L 4 号标准品 150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液30ng/L 3 号标准品 150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液15ng/L 2 号标准品 150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液7.5ng/L 1 号标准品 150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复5 次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。7. 温育：操作同3。8. 洗涤：操作同5。9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟.10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液后15 分钟以内进行。操作程序总结：计算以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值大于标准品孔第一孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6 个月

《柳叶刀感染性疾病杂志》发布Lonafarnib治疗丁型肝炎病毒结果Incorporated 今天宣布发布用 lonafarnib 治疗慢性丁型肝炎病毒(HDV)感染患者的首个2a阶段研究结果。这项研究在马里兰州贝塞斯达的美国国立卫生研究院(NIH)临床中心进行。这项双盲、随机、安慰剂对照、剂量递增研究评估了两种剂量的 lonafarnib：每天两次 100mg 和每天两次 200mg ，使用28天。Eiger BioPharmaceuticals, Incorporated 今天宣布发布用 lonafarnib 治疗慢性丁型肝炎病毒(HDV)感染患者的首个2a阶段研究结果。美国国立卫生研究院下属机构糖尿病、消化系统和肾脏疾病研究所(National Institute of Diabetes and Digestive and Kidney Diseases)首席调查员、医学博士 Theo Heller 表示：“美国国立卫生研究院临床中心已经完成了一项研究，对治疗通常会导致肝硬化和其它危及生命疾病的慢性丁型肝炎具有重要含义。我们很荣幸在《柳叶刀感染性疾病杂志》上发布此次研究的结果。”使用 lonafarnib 治疗28天之后，结果发现与安慰剂相比，慢性丁型肝炎病毒核糖核酸病毒水平有所下降，包括与安慰剂(p分别=0.03和Eiger 总裁兼首席执行官 David Cory 表示：“这是评估口服疗法 lonafarnib 在慢性丁型肝炎病毒感染患者中效果的首项研究，我们对结果感到非常满意。慢性丁型肝炎病毒是最严重的一种人类病毒性肝炎形式。我们的目标是治愈。”Lonafarnib简介Lonafarnib 是一种特性明显的以法尼基转移酶为靶向的晚期口服活性剂，法尼基转移酶是通过异戊二烯化过程调节蛋白质的酶。丁型肝炎病毒利用肝细胞内的这种宿主细胞过程完成其生命周期内的一个重要步骤。Lonafarnib 抑制了肝细胞内丁型肝炎病毒复制中的异戊二烯化步骤，并阻止病毒繁殖。由于异戊二烯化要通过一种宿主酶来实现，因此理论上 lonafarnib 疗法对于病毒耐药性突变的阻碍也更高。Lonafarnib 已被美国食品及药物管理局(FDA)和欧洲药品管理局(EMA)指定为孤儿药，并被美国食品及药物管理局授予快速通道地位。Lonafarnib 尚未确定任何疗效指征。该药获得默沙东公司(Merck Sharp & Dohme Corp.)（在美国与加拿大以外地区称为默沙东(MSD)）许可。丁型肝炎病毒简介丁型肝炎是由感染丁型肝炎病毒引起，是最严重的一种人类病毒性肝炎形式。丁型肝炎只有在乙型肝炎患者协同感染情况时发生，引发比乙型肝炎更严重的肝脏疾病，并且会加快肝纤维化、肝癌和肝功能衰竭。丁型肝炎是一种严重影响全球人类健康的疾病，全世界该病的感染人数达1500万左右。丁型肝炎的患病情况在全球不同地区各不相同。全球丁型肝炎病毒感染者约占慢性乙型肝炎病毒携带者的5%-6%。在全球部分地区，包括中国、蒙古、俄罗斯、中亚、土耳其、非洲和南美等部分地区，乙型肝炎感染患者中高达70%患有丁型肝炎。

高福院士：冠状病毒的跨种传播近日，Trends in Microbiology杂志在线发表了一篇题为"Bat-to-human： spike features determining 'host jump' of coronaviruses SARS-CoV， MERS-CoV， and beyond"的特邀综述。文章作者高福院士（中国科学院微生物研究所，中国疾病预防控制中心），逯光文博士（四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室）和王奇慧博士（中国科学院微生物研究所）在文中系统地阐述了冠状病毒表面刺突蛋白的分子特征及其与冠状病毒跨种传播的关系。高福院士现为中国科学院微生物研究所研究员，同时担任中国疾病预防控制中心副主任，中国科学院北京生命科学研究院副院长，中国科学院病原微生物与免疫学重点实验室主任，2013年当选为中国科学院和发展中国家科学院院士，主要从事病原微生物跨宿主传播、感染机制与宿主细胞免疫研究，在Nature、Science、Lancet、NEJM、NSMB、PNAS、PLoS Pathogens、Immunity等杂志发表论文330余篇。逯光文博士现为四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室研究员。王奇慧博士现为中国科学院微生物研究所助理研究员。近年来他们对中东呼吸综合征冠状病毒（MERS-CoV）和蝙蝠源冠状病毒HKU4等开展了多项创新性的研究工作，相关研究成果发表在Nature和Cell Host & Microbe等杂志上。延伸阅读（Nature， 2013， 500： 227-231； Cell Host & Microbe， 2014， 16： 328-337）。冠状病毒是一类具囊膜的RNA病毒，可感染动物和人；依据其血清型和基因型特征，又可进一步分为Alpha-、Beta-、Gamma-和Delta-冠状病毒属。目前能感染人的冠状病毒主要集中在Alpha-和Beta-冠状病毒属，包括人冠状病毒NL63、229E、OC43、HKU1以及严重急性呼吸综合征冠状病毒（SARS-CoV）和中东呼吸综合征冠状病毒（MERS-CoV）。后两者均可导致急性呼吸窘迫综合征，疾病进程快，病死率高。2002-2003年，SARS-CoV在世界范围内引起了前所未见的"非典"疫情，共造成8000余例感染病例和800余例死亡病例；2012年，MERS-CoV在中东首次发现，并迅速扩散到欧、亚、美、非的多个国家和地区，已累计造成1368例感染病例和490例死亡病例，波及26个国家（依据世界卫生组织2015年7月21日统计数据）。尤其是过去两个月在我国邻国韩国发生的MERS-CoV局部暴发，曾一度造成严重的社会恐慌。需要特别关注的是，现有证据表明SARS-CoV和MERS-CoV均为动物源性，通过跨种传播而感染人。因此，揭示以SARS-CoV和MERS-CoV为代表的冠状病毒跨种传播过程不仅是基础研究领域的热点，也对传染病防控的公共卫生实践至关重要。病毒侵入宿主的第一步是病毒表面蛋白与宿主细胞表面特异性受体之间的相互作用，因此受体的种类和分布在很大程度上决定了病毒的宿主范围和组织嗜性。冠状病毒表面的刺突（spike，S）蛋白负责识别宿主受体并介导膜融合，进而完成病毒的侵入过程，是冠状病毒能否以及如何实现跨种传播的决定性因素之一。通常S蛋白会被宿主的蛋白酶进一步切割为S1和S2两个亚基，前者含有识别受体的关键区域，即受体结合区（receptor-binding domain），而后者含有膜融合所需的关键元件（如融合肽、七肽重复区等）。因此，S蛋白的结构功能特点和受体识别特征，以及与S蛋白的切割激活（cleavage priming）密切相关的宿主蛋白酶的时空分布特征是病毒实现跨种感染的关键因素。在这篇最新的综述文章中，高福院士、逯光文和王奇慧博士首先就SARS-CoV S蛋白的结构特点、受体识别特征、以及S蛋白如何被宿主蛋白酶有效切割激活等方面进行了细致的总结；随后系统地归纳了MERS-CoV S蛋白的相关研究进展；并进一步深入分析了基于S蛋白特征的病毒跨种传播过程。作者们还对蝙蝠源冠状病毒HKU4识别人源受体的最新工作进行了点评，概述了这一工作对于MERS-CoV蝙蝠起源的重要提示。这篇文章已发表在最新一期的Trends in Microbiology杂志上，并被选为当月的精选综述（feature review）。高福院士研究团队多年来研究新发、突发传染病病原的跨种传播机制，在流感病毒、冠状病毒等致病原的研究上先后在Nature、Science、Lancet等杂志发表多篇文章，去年底还应邀为Nature Reviews Microbiology撰写综述。延伸阅读（Nature Reviews Microbiology， 2014， 12： 822-831）。

人总蛋白(TP)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 96T20 ng/ml -1000 ng/ml使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中总蛋白(TP)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人总蛋白(TP)水平。用纯化的人总蛋白(TP)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入总蛋白(TP)，再与HRP 标记的总蛋白(TP)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的总蛋白(TP)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人总蛋白(TP)浓度。人总蛋白(TP)酶联免疫分析试剂盒使用说明书试剂盒组成1 30 倍浓缩洗涤液20ml×1 瓶7 终止液6ml×1 瓶2 酶标试剂6ml×1 瓶8 标准品（1600ng/ml） 0.5ml×1 瓶3 酶标包被板12 孔×8 条9 标准品稀释液1.5ml×1 瓶4 样品稀释液6ml×1 瓶10 说明书1 份5 显色剂A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 张6 显色剂B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 个标本要求1. 血清：室温血液自然凝固10-20 分钟后，离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20 分钟后，离心20分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。尿液：用无菌管收集。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。5.培养细胞:检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100 万/ml 左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。6.组织标本:人总蛋白(TP)酶联免疫分析试剂盒使用说明书切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。7.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融8.不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。800 ng/ml 5 号标准品150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液400 ng/ml 4 号标准品150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液200 ng/ml 3 号标准品150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液100 ng/ml 2 号标准品150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液50 ng/ml 1 号标准品150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复5 次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。7. 温育：操作同3。8. 洗涤：操作同5。9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10 分钟.10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止液后15 分钟以内进行。操作程序总结：人总蛋白(TP)酶联免疫分析试剂盒使用说明书计算以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值大于标准品孔第一孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6 个月

基因突变促使正常体重病人肝病的发生基因突变被发现在正常体重范围内促进非酒精性脂肪肝病(NAFLD)的发生，这种形式的肝脏疾病与肥胖密切相关。与非携带着相比，携带PNPLA3突变体基因的病人被发现处于非酒精性脂肪肝高风险期，即便携带者不胖。这种在突变基因、非酒精性脂肪肝与体重之间的交互作用被熊本大学的研究人员阐明。两种类型的研究在熊本红十字医院健康检查程序中进行，740例横断面研究和393例回顾性纵向研究受试者进行了五年的医疗记录。那些有习惯性饮酒和有阳性乙肝和丙肝的检查从分析关于非酒精性脂肪肝的风险中被排除。在超重(体重指数25 kg / m2)或正常体重(体重指数Oniki博士小组提供了初步结果，与没有携带这些基因的人相比，正常体重者携带突变基因型(大约20%的日本人)患非酒精性脂肪肝和肾功能障碍的几率会更高。这表明无论体重是否变化，突变可以用于早期非酒精性脂肪肝和肾功能衰退高危个体的分类。“我们希望阐明正常体重者之间非酒精性脂肪肝的风险因素，这将对易感人群，特别是亚洲人种患非酒精性脂肪肝及其并发症的早期预防和治疗有一定帮助。”Oniki博士说。

基因突变促使正常体重病人肝病的发生基因突变被发现在正常体重范围内促进非酒精性脂肪肝病(NAFLD)的发生，这种形式的肝脏疾病与肥胖密切相关。与非携带着相比，携带PNPLA3突变体基因的病人被发现处于非酒精性脂肪肝高风险期，即便携带者不胖。这种在突变基因、非酒精性脂肪肝与体重之间的交互作用被熊本大学的研究人员阐明。两种类型的研究在熊本红十字医院健康检查程序中进行，740例横断面研究和393例回顾性纵向研究受试者进行了五年的医疗记录。那些有习惯性饮酒和有阳性乙肝和丙肝的检查从分析关于非酒精性脂肪肝的风险中被排除。在超重(体重指数25 kg / m2)或正常体重(体重指数Oniki博士小组提供了初步结果，与没有携带这些基因的人相比，正常体重者携带突变基因型(大约20%的日本人)患非酒精性脂肪肝和肾功能障碍的几率会更高。这表明无论体重是否变化，突变可以用于早期非酒精性脂肪肝和肾功能衰退高危个体的分类。“我们希望阐明正常体重者之间非酒精性脂肪肝的风险因素，这将对易感人群，特别是亚洲人种患非酒精性脂肪肝及其并发症的早期预防和治疗有一定帮助。”Oniki博士说。

基于血液的新型癌症检测技术进展当检测实体瘤仍是癌症诊断中的常规步骤时，现代技术，比如新一代测序技术就已经可以帮助科学家们深入追踪癌症的发展变化了，许多肿瘤都会有一些脱落的细胞，而这些脱落的小囊泡名为外核体，而其DNA的轨迹会进入血液和其它体液组织中；近来有研究发现，这些外核体碎片可以作为标志物来帮助监测疾病的进展，甚至可以帮助科学家们在患者疾病症状出现之前诊断癌症的发生。利用常规的血液样本就可以对肿瘤DNA进行检测，比如刊登在国际杂志JAMA Oncology上的一篇研究论文中，研究者们就对4000多名孕妇机体的血液样本进行了检测，用来鉴别胎儿染色体的异常情况，随后研究者发现了三例母源性的癌症，即卵巢癌、滤泡型淋巴瘤以及霍杰金淋巴瘤，在大多数肿瘤中，尽管其恶性程度较低，但研究者仍然可以利用个体的血液来作为研究肿瘤生物学的替代品。而诸如“液体活组织检查”对于血液和血浆样本而言并不是特殊的，在其它研究中，研究者将膀胱癌复发的风险同尿液中DNA甲基化的水平联系了起来，研究者也在粪便样本中检测到了肠癌的DNA，同时还在头颈癌患者的唾液中鉴别出了癌症相关的基因突变；此前研究者常利用分子检测的手段监测恶性疾病和癌症转移，而如今随着精确工具使用的增加，研究者可以在血液中，甚至是疾病发展早期阶段就可以鉴别出少量的癌细胞和DNA。来自约翰霍普金斯医学院的教授Bert Vogelstein表示，粪便和尿液可以帮助检测结直肠癌和膀胱癌，但血液检测至少从概念上来讲可以检测所有癌症，目前我们面临的挑战是检测微量的癌细胞DNA。普通的证据去年刊登在国际杂志Science Translational Medicine上的一篇研究论文中，研究者对640名病人进行了研究，发现对血浆中循环的肿瘤DNA进行检测可以帮助确定大约40%至70%的各类癌症，包括脑癌、前列腺癌和卵巢癌等。比如在恶性的结直肠癌中，循环的肿瘤DNA常被用于确定87%的患者机体KRAS基因的特殊突变。完整的癌细胞通常会溜入血流中，“诱捕”这些循环肿瘤细胞（CTCs）的早期尝试依赖于表面抗原和其它标志物的识别，但CTCs会依赖于肿瘤的类型、疾病阶段及其它因子来穿上不同的分子外衣；今年年初，哈佛医学院的研究者Mehmet Toner在国际杂志Nature Methods刊文表示，微流体设备可以利用物理学的方法来诱捕CTCs，而该方法并不依赖于肿瘤特异性的标志物，Toner告诉The Scientist说道，完整无损的细胞具有巨大的研究价值，你可以仔细观察DNA、RNA、信号分子、磷酸化模式以及表观遗传学，这些相比单一的生物标志物要更为丰富，从长期角度而言，我们应当培养细胞来检测药物的敏感性，从而转移到进行个体化医学的开发。除了DNA和整个细胞而言，近来又有研究指出，肿瘤细胞脱落的外核体或许可以充当癌症的生物标志物，就在上个月，刊登在国际杂志Nature上的一项研究报告中，来自得克萨斯大学MD癌症研究中心的科学家就对外核体进行了一项血清学测试，由于外核体携带有DNA、RNA和蛋白质，因此其可以被用于区分早期胰腺癌和晚期胰腺癌的患者。但循环肿瘤细胞的痕迹依然是目前临床应用的一大难题，改善分子检测的敏感性和特异性对于建立临床应用程序非常关键，研究者Vogelstein表示，目前我们并不知道局限性是否是技术上或生物学上的，我们发现大约40%至70%的肿瘤都可以被检测到，但如果剩余的早期阶段的癌症并没有分泌循环肿瘤DNA中的单一分子的话，那我们的技术再怎么好也是无关紧要的。目前很多基础生物学都是不清楚的，研究者Tim Forshew教授说道，我们仍然并不能完全知道循环肿瘤DNA进入到血液中的机制，以及为何其会因不同的癌症而异，我们也并不能完全理解使得循环的肿瘤DNA可以在血液中被快速消除。尽管如此，利用简单血液检测来诊断癌症并且指导疗法的可能性依然会让很多制药公司大发灵感来寻找新型的肿瘤血液检测技术。早期应用研究者Forshew就职于一家提供循环肿瘤DNA诊断检测技术的公司，他表示，从商业利益角度而言公司都比较关注循环肿瘤的标志物，在他看来，类似这样技术的重要应用就是研究并不容易进行活组织检查的癌症的遗传特性。许多其它公司，包括Epic科学、强生诊断、SRI国际等都能够提供循环肿瘤DNA和细胞的检测技术，然而这些检测手段的临床应用目前仍然受限于肿瘤转移的监测。科学家们进行的临床研究通常是将血液中的肿瘤DNA同特殊的疾病参数相联系起来，比如预测患者移除肿瘤术后疾病复发的风险，Vogelstein教授说道，这并不同于预后评估。近日，来自伊丽莎-霍尔医学研究所的科学家们正在利用循环肿瘤DNA来评估结肠癌患者在术后因化疗获益的可能性，标准上而言，大部分患者在术后会接受辅助化学疗法，但仅有4%至5%的患者会因此获益，对于其余患者而言，要么手术比较充分，要么就是化疗后癌症依然复发的。在去年美国临床肿瘤学会会议上研究者公布了他们的初期研究结果，他们发现癌症复发风险和循环肿瘤DNA的水平密切相关，而如今科学家们又计划进行一项大型的随机试验来评估利用循环肿瘤DNA来进行化疗规范的实用性，通过血液检测来知道化疗，不仅可以改善癌症患者的生存，而且还可以降低接受化疗患者的数量。相比此前使用的前列腺特异抗原而言，肿瘤DNA、CTCs以及肿瘤衍生的外核体都可以作为较高价值的标志物，这些新型标志物可以为研究者提供一种绝佳的机会来管理癌症，最后研究者表示，此前我们总是晚疾病一步，而且我们试图赶上疾病发生的节奏，而如今利用更多特异性且敏感性的工具我们就可以领先疾病一步诊断并且发现疾病，对于后期制定可用的治疗手段或将带来巨大的帮助。