酶联生物猪口蹄疫病毒O型抗体检测试剂盒原理

酶联生物猪口蹄疫病毒O型抗体检测试剂盒原理

本试剂盒系由预包被口蹄疫病毒O型VP1抗原的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成，应用酶联免疫法（ELISA）原理检测猪血清、血浆样本中猪口蹄疫病毒O型抗体。实验时在酶标板中加入对照血清和待检样本，经温育后若样品中含有猪口蹄疫病毒O型抗体，则将与酶标板上抗原结合，经洗涤除去未结合的其他成分后；再加入酶标记物，与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶标记物，在孔中加TMB底物液，与酶反应形成蓝色产物，显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有口蹄疫病毒O型抗体。

储存及有效期：于2～8℃避光保存，有效期为12个月。

包被板开封后请于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限为2个月。

猪口蹄疫病毒O型抗体检测试剂盒【适用仪器】 含450nm、630nm波长的酶标仪，37℃恒温设备，可调微量移液器。

样品准备

1.取动物全血按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。样品1周内可于2～8℃保存，长期需置-20℃保存。

2.用样品稀释液将待检血清按40倍稀释（如5μl血清加入195μl样品稀释液中，混匀）。阴、阳性对照不用稀释。

3.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解，然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释。

检验方法

1.使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。

2.取所需用量酶标板条，设空白对照1孔、阴性/阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。

3.空白对照孔加样品稀释液100μl；阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照100μl；样品孔每孔加入稀释后的样品100μl。

4.混匀，置37℃反应30分钟。

5.扣去孔内液体，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，拍干。

6.每孔加酶标记物100μl（空白孔除外）。置37℃反应30分钟。

7.洗涤，同步骤5。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混匀，37℃避光反应10分钟。

9.每孔加终止液50μl，混匀，用空白孔调零，于450nm(可用630nm作参比波长）测定各孔吸光值（A值）。

参考值：实验正常的情况下，阴性对照≤0.10，阳性对照≥0.6。

检验结果的解释

1.样品A值≥0.25为阳性；样品A值在0.15到0.25之间为可疑；样品A值＜0.15为阴性。

2.本实验结果为阴性或可疑时表明猪只抗体水平不足，建议补打相应疫苗。

试验方法的局限性

该试验仅作为定性检测猪血清、血浆中猪口蹄疫病毒O型抗体，根据A值高低可作抗体水平强、中、弱的粗略评估。

猪口蹄疫病毒O型抗体检测试剂盒注意事项

1.实验操作时需戴手套、穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度，各种实验废弃物都应按传染物处理。

2.终止液具有腐蚀性，应避免接触皮肤和衣物，如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。

3.酶标板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋，未用完的酶标板需放入有干燥剂的密封袋中保存。

4.浓缩洗涤液在低温时容易结晶，使用时需恢复至室温以完全溶解。

5.洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗净。

6.用于检测的样品应保持新鲜。

7.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。

8.不同批号试剂组分不得混用。

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