酶联生物ELISA试剂盒常见样本组织

利用ELISA试剂盒(酶联免疫吸附)进行检测的样本类型包括常见的血液(血清、血浆)，组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养血清以及不常见的皮肤组织、尿液、粪便、肺泡灌洗液、唾液、脑脊液、胸腹水等，这些样本收集的时间、处理方法和保存都会影响到ELISA试剂盒实验的结果。下面对常见组织样本处理方法整理，希望对您有所帮助。

组织样本一般是制成组织匀浆，处理方法如下：

取适量组织块，于预冷PBS(02mol/L,pH7.0-7.2)中清洗去除血液，称重备用(组织块较大需先剪碎再匀浆)；

可同时选用多种匀浆方法达到较好的破碎效果：首先将组织块移入玻璃匀浆器，加入9-10ml预冷PBS(组织与PBS的质量体积比建议为1:9，即1g样本加入9mlPBS)进行充分研磨(有条件实验室可选用机器匀浆)，该过程需在冰这进行；得到的匀浆液可再利用超声破碎或反复冻融进一步处理(超声破碎过程中注意冰浴降温；反复冻融法可重复2次)。

将制备好的匀浆液于9000×g离心9分钟，留取血清即可检测。

如果样本需要长期保存，请添加蛋白酶抑制剂。根据实验需要，组织匀浆样本可先定量总蛋白，以便于统计分析数据。某些组织样本如肝脏，肾脏，脑组织会有假阳性反应。

样本保存：

处理样本的过程就是收集目标蛋白的过程，由于蛋白容易变性，降解，故该过程应尽量温和。样本处理之的储存也非常重要，尤其注意不要反复冻融，样本处理之可分装密封保存，4℃保存应小于1周，-20℃不应超过1个月，-90℃不应超过2个月。在标本使用前应缓慢均衡至室温，不应加热使之融解。

细胞培养常用的溶液之消化液

一、胰蛋白酶(trypsin)溶液胰蛋白酶是白色或淡黄色粉末，低温干燥保存。主要作用是使细胞间的蛋白质水解，使细胞离散。其活性以其消化酪蛋白的能力进行。常用1:290(1:900)方法表示，即1份胰蛋白酶可以消化290份(或900份)酪蛋白胰蛋白酶对细胞的分离作用与细胞的类型和细胞的性质关系密切。不同细胞系对胰蛋白酶溶液的浓度、温度和作用时间等的要求也不相同。无钙镁离子的平衡盐溶液(常用于配制胰蛋白酶溶液或用于洗涤细胞)

二、EDTA溶液

又称versene，一般用其钠盐，因可溶性较好。有些组织需要Ca2+、Mg2+来保持其完整性，用EDTA来排除这些离子，可使细胞之间裂解，以分散细胞。其作用比胰蛋白酶缓和。使用浓度为0.02%，以无钙、镁的平衡盐溶液配制。实验室内常将胰蛋白酶和EDTA联合使用。可提高消化效率，细胞分散情况改善。EDTA不能被血清抑制，所以消化必须清洗。EDTA对成纤维细胞作用差。

三、胶原酶溶液

1．用Hank's液配制成2000U/ml

2．312.9度搅拌溶解1h，4度过夜

3．滤过消毒

4．分装成等份使用(1-2周内)

9．长时间贮存在-20度

四、贴壁细胞——消化法——细胞悬液

1．吸除或倒掉瓶内培养液。

2．以29cm2培养瓶为例，向瓶内加入1ml消化液(胰蛋白酶或与EDTA混合液)轻轻摇动培养瓶，使消化液流遍所有细胞表面，然吸掉或倒掉消化液再加1ml消化液，轻轻摇动再倒掉大部分消化液，仅留少许进行消化。也可不采用这述步骤，直接加1-2ml消化液进行消化，但要注意尽量减少消化液的剩余量，因为消化液过多对细胞有损伤，同时也需要较多的含血清培养液去中和。

3．消化好在37度或室温29度环境下进行。消化2-9分钟把培养瓶放置在显微镜下进行观察，发现胞质回缩、细胞间隙增大，应立即终止消化。

4．如仅用胰蛋白酶可直接加含血清的培养液，终止消化。

如用EDTA消化，需加Hank's液数毫升，轻轻转动培养瓶把残留EDTA消化液冲掉，然再加培养液，这个操作过程要十分小心，如果细胞已经脱壁则消化液不能够倒掉，以免丢失细胞，要加入Hank's液或培养液终止消化，吹打收集细胞悬液，离心漂洗去除EDTA。

用弯头吸管，吸取瓶内培养液，反复吹打瓶壁细胞，吹打过程要顺序进行，从培养瓶底部一边开始到另一边结束，以确保所有底部都被吹到。吹打时动作要轻柔不要用力过猛，同时尽量不要出现泡沫，这些都对细胞有损伤。细胞脱离瓶壁形成细胞悬液。

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