酶联生物6磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-PGDH)测试盒(辅酶Ⅱ)微量法测定原理及测定意义

酶联生物6磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-PGDH)测试盒(辅酶Ⅱ)微量法测定原理及测定意义介绍如下：

测定意义：

磷酸戊糖途径途径中6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)和6PGDH依次催化NADPH合成，与能量的平衡、生长速率和细胞活力等密切相关。此外，6PGDH逆境生理中具有重要作用。

测定原理：

6PGDH催化6-磷酸葡萄糖酸和NADP+生成NADPH，NADPH在340 nm有特征吸收峰，而NADP+没有；通过测定340nm吸光度增加速率，计算6PGDH活性。

自备仪器和用品：

低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、酶标仪、96孔板和蒸馏水。

粗酶液提取：

1、细菌、细胞或组织样品的制备：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量(104个)：提取液体积(mL)为1000~5000：1的比例(建议2000万细菌或细胞加入1mL提取液)，超声波破碎细菌或细胞(冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次)；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为1：5~10的比例(建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液)，进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、血清(浆)样品：直接检测。

测定操作：

1. 酶标仪预热30min，调节波长到340 nm。

2将试剂二和试剂三转移至试剂一中充分溶解；在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴10min以上；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

3. 取96孔板，依次加入10μL样本190μL试剂一，于340nm处测定3min内吸光值变化，第10 s吸光值记为A1，第190s吸光值记为A2。△A=A2-A1

注    意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。      

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