酶联生物中性蛋白酶(NP)检测试剂盒

酶联生物为您介绍中性蛋白酶(NP)检测试剂盒测定意义及测定原理

测定意义：

NP在一定的温度和中性pH条件下，催化水解蛋白质。由于其安全无毒、水解能力强、作用范围广等特点，中性蛋白酶常用于食品、饲料、化妆品和营养保健品生产。

测定原理：

中性条件下，NP催化酪蛋白水解产生酪氨酸；在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝；在680nm有特征吸收峰。

自备仪器和用品：

可见分光光度计、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿、1.5 mL EP管和蒸馏水。

试剂组成和配制：

试剂一：液体90mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加10 mL蒸馏水溶解。

试剂三：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加入20 mL试剂一，沸水浴中磁力搅拌溶解。（可在烧杯上盖一层保鲜膜，注意观察，避免水分全部蒸发，一般加热15-30分钟，该试剂为过饱和试剂，充分混匀后仍出现颗粒物不溶物不影响使用）。

试剂四：粉剂×1瓶， 4℃保存。临用前加50 mL蒸馏水溶解。

试剂五：液体10mL×1瓶，4℃保存。

标准品：液体1mL×1支，0.25 μ mol/mL标准酪氨酸溶液，4℃保存。

粗酶液提取：

1.组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）冰浴匀浆，8000g，4℃离心10min，取上清，即粗酶液。

2.血清或培养液：直接测定。

3.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

注    意： 正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 

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