酶联生物NADPH-细胞色素C还原酶(NCR)测试盒(P450)

酶联生物NADPH-细胞色素C还原酶(NCR)测试盒(P450)组成介绍如下：

测定意义：

细胞色素P450酶是一组主要存在于肝脏的同工酶，在外源物质代谢中具有重要作用，尤其是药物和毒物的代谢。NCR作为P450酶系的重要一员，催化氧化型P450还原再生。

测定原理：

NCR催化NADPH还原氧化型细胞色素C，还原型细胞色素C在550nm处有特征吸收峰；通过测定550nm吸光度的增加速率，来计算NCR活性。

自备仪器和用品：

普通离心机，超速离心机、可调式移液枪、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。

粗酶液提取：

1. 除去细胞核和线粒体等：称约0.5g组织，加入4℃预冷的1 mL试剂一，冰上充分研磨，10 000g 4℃离心30min，取上清液，转移到超速离心管中。

2. 粗制微粒体：4℃，100 000g，离心60min，弃上清液。

3. 除血红蛋白等杂质：向步骤2的沉淀中加1 mL试剂一，盖紧后充分震荡溶解，100 000g离心30min，弃上清液。

4. 最终微粒体：向步骤3的沉淀中加试剂二0.5 mL，盖紧后充分震荡溶解，4℃保存待测。

NADPH-细胞色素C还原酶测定操作：

1. 分光光度计/酶标仪预热30 min，调节波长到550 nm，蒸馏水调零。

2. 试剂二在37℃水浴中预热30min。

3. 空白管：取微量石英比色皿/96孔板，依次加入10μL蒸馏水、180μL试剂二、10μL试剂三和10μL试剂四，迅速混匀后于550nm处测定2min内吸光值变化，第10s和第130s吸光值。△A空白管=A2-A1。

4. 测定管：取微量石英比色皿/96孔板，依次加入10μL提取液、180μL试剂二、10μL试剂三和10μL试剂四，迅速混匀后于550nm处测定2min内吸光值变化，第10s和第130s吸光值。△A测定管=A4-A3。

注意：空白管只需做一次。

注    意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

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