酶联生物带您详细了解ELISA试剂盒实验中假阳性产生的原因！

酶联生物

2023/08/24 09:05

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1 、抗原因素

融合蛋白对基因工程抗原特异性的影响。以丙肝诊断ELISA试剂盒为例为例，因为包被的基因工程抗原为融合蛋白，包含了来自表达载体的一些序列，因此可以与血清中抗大肠杆菌的因子发生反应而产生了可疑标本。错误排序的影响。合成肽在制备过程中，如果某些肽序列错误，会导致合成肽特异性改变而产生假阳性。另外，在构建基因工程表达载体时引入的HCV 核苷酸发生相位改变或点突变也会对抗原的特异性产生不利的影响，但由于基因工程技术的不断进步，由工艺原因造成的抗原特异性降低会逐渐被克服。抗原纯度对特异性的影响。以HCV 抗原为例，利用大肠杆菌大规模表达后需经破碎细胞、盐析、粒子交换柱等分离纯化步骤才能后的到一定纯度的HCV 抗原。因此抗原中还混有大肠杆菌的其它杂蛋白，受过大肠杆菌感染的人，血清中的抗大肠杆菌抗体可和这些杂蛋白产生反应而引起假阳性。

2 、科研血清中的正常IgG

科研血清中IgG 的浓度对HCV 试剂盒有较大的影响。HCV ELISA试剂盒采用的间接法，酶标抗抗体能与人所有IgG 结合，而IgG 吸附于板孔的能力很强，因此我们采用100 微升样稀加10 微升血清来将其稀释以降低本底。到成人时，据统计学调查，成人的IgG 为12mg/ml，而有些人的IgG 浓度会远远高于此，这部分人的血清经ELISA 反应后往往会显色。人血情中异常的IgG结缔组织病（系统性红斑狼疮、多发性骨髓瘤等）等病症时，血清中的风湿小体和其它异常IgG（IgG 浓度达到50mg/ml）会引起本底升高或假阳性。溶血的影响当溶血时，红细胞中的血红蛋白释放到血清中，血红蛋白具有过氧化物酶的性质，当其通过吸附或“PP 效应"（蛋白质间相互吸附的现象）结合后，可催化A、B 液显色而造成假阳性。