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酶标仪科普专栏丨第二期:荧光偏振(FP)介绍及应用

 在 FP 技术中,荧光染料被偏振光激发。当荧光染料被单平面偏振光激发时,它会重新向所有方向发射光(即对激发光去偏振),因为它在激发和发射之间会移动和旋转。分子旋转是由于布朗运动造成的,这种运动在纳秒内发生,光的去极化程度与这种运动成正比。在荧光偏振检测实验中使用小分子的示踪剂标记配体,如果配体处于游离状态,在受激发时期,分子旋转或翻转偏离这一平面,发射光将去偏振化,检测到低毫偏振值(mP);如果荧光标记的配体与生物大分子结合,旋转变慢,发射光保持偏振性,检测到高的毫偏振值(mP)。    FP 常见应用激酶活性检测FP 测定的一个主要应用是鉴定小分子对激酶的活性的调节作用。此类检测可用于测量底物的消耗或反应产物的积累。涉及抗体的检测,称为荧光偏振免疫检测(FPA),早期的激酶 FPA 测定使用荧光标记肽作为底物[1]。未磷酸化肽具有低 mP 值,激酶在 ATP 的作用下对肽进行磷酸化,特异性抗体与磷酸化肽结合,测得高 mP 值,但此种方法操作复杂,灵敏度较低。Molecular Devices 开发的 IMAP 技术能对激酶,磷酸酶和磷酸二酯酶进行快速,均质和非放射性的分析,非常适用于分析开发和高通量筛选,当 IMAP 结合溶液与磷酸化底物结合时,肽的分子运动被改变,引起标记在肽上的荧光分子的荧光偏振效应增加。    此外,也可以用竞争性结合的方式来检测底物磷酸化水平,荧光团标记的磷酸化肽与抗体预结合,从而产生高 mP 值。激酶磷酸化未标记的肽底物,从而置换标记的肽,降低 mP 值[2]。hERG 钾离子通道安全性筛选hERG 通道是一种电压门控钾通道,在心脏的正常电活动中起着至关重要的作用。它可参与心肌细胞动作电位的复极化和终止,hERG 通道的阻断会导致心律失常甚至造成猝死,因此候选药物必须仔细筛选,以确保它们不与 hERG 通道结合[3]。本实验中,如果 hERG 通道蛋白与 Predictor hERG 示踪剂结合,则该示踪剂会产生更高的荧光偏振。如果候选药物分子具有 hERG 阻断作用就会与 hERG 通道蛋白结合取代示踪剂,从而降低荧光偏振光。    蛋白-核酸相互作用利用荧光偏振可以帮助揭开核酸结构和结合蛋白之间的相互作用,荧光标记的寡核苷酸在溶液中可高度自由旋转,受到偏振光的激发后产生的发射光偏振性低,如果和蛋白质发生相互结合,则旋转速度低,发射光偏振性增强,如果复合物解体,则发射光偏振性减弱[4]。因此,这种方法还可以结合动力学研究,通过偏振信号的变化对 DNA 双链形成和解链过程进行实时监测[5],传统的放射性标记法成本高昂,并且由于 32P 半衰期短,探针必须经常重新标记,放射性同位素库存必须重新排序,相比于放射性同位素法,荧光偏振检测方案不破坏样本,操作更为简便,并且使实验员免受电离辐射伤害。布鲁氏菌病诊断布鲁氏菌病是一种由布鲁氏菌属细菌引起的传染性过敏性人畜共患疾病,该病主要通过接触受感染的动物以及摄入受感染的肉类或未经巴氏消毒的乳制品传播给人类[6]。在中国,抗人球蛋白试验(Coomb's 试验)和血清凝集试验(SAT)与 Rose Bengal 平板凝集试验(RBT)一起用于布鲁氏菌病的诊断而,这些检测复杂和耗时,并且结果的解释容易受到主观因素的影响,时常产生假阴性结果。根据目前的情况,显然需要更可靠的测试来诊断布鲁氏菌病。荧光偏振技术作为血清学诊断的一种,具有独特的优势,FPA 作为一种新的免疫测定法被用于相对快速准确地检测抗体或抗原。FPA 的优点是反应时间仅为 5 分钟,既可用于个体检测,也可用于大规模现场筛选。此外,与传统测试不同,数据是通过电子方式获得的。因此,消除了任何主观性,取而代之的是快速分析、永久记录和轻松的数据传播成为可能。  荧光偏振检测本质上是免分离均相检测,因为它们无需分离步骤即可进行定量测量,即无需从溶液中去除任何组分。由于这些特点,荧光偏振技术在多个领域都有广泛应用[7],包括受体/配体研究、蛋白质/多肽相互作用、DNA/ 蛋白质相互作用、激酶检测、竞争性免疫检测等。特别是在生物医学、临床诊断等领域,荧光偏振技术发挥了重要作用。优势适用于高通量筛选无放射性,使实验人员免受辐射伤害均相检测,无需清洗步骤相比于 HTRF、AlphaScreen 等检测手段,FP 是性价比更高的选择局限性标记分子与大分子物质分子量需要有一定差异,一般 10x 差异比较合适荧光染料不宜过大,对温度较为敏感不提供动力学常数  参考文献1.Hendrickson OD, Taranova NA, Zherdev AV,et al. Fluorescence Polarization-Based Bioassays: New Horizons[J]. Sensors (Basel). 2020;20(24):7132. doi:10.3390/s20247132 2.Hall MD, Yasgar A, Peryea T, et al. Fluorescence polarization assays in high-throughput screening and drug discovery: a review[J]. Methods and applications in fluorescence. 2016;4(2):022001. doi:10.1088/2050-6120/4/2/0220013.Furutani K. Facilitation of hERG Activation by Its Blocker: A Mechanism to Reduce Drug-Induced Proarrhythmic Risk[J]. International journal of molecular sciences. 2023;24(22):16261.doi:10.3390/ijms242216261 4.Pagano JM, Clingman CC, Ryder SP. Quantitative approaches to monitor protein-nucleic acid interactions using fluorescent probes[J]. RNA. 2011;17(1):14-20. doi:10.1261/rna.2428111 5.Hemphill WO, Voong CK, Fenske R, et al. Multiple RNA- and DNA-binding proteins exhibit direct transfer of polynucleotides with implications for target-site search[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2023;120(26):e2220537120. doi:10.1073/pnas.2220537120 6.Dong SB, Jiang H, Wang LP. Progress in research and practice of brucellosis surveillance in China. Chinese Journal of Epidemiology. 2019; 40(7):870–874. doi:10.3760/cma.j.issn. 0254-6450.2019.07.0257.Yan Y, Marriott G. Analysis of protein interactions using fluorescence technologies[J].Current opinion in chemical biology. 2003;7(5):635-640. doi:10.1016/j.cbpa.2003.08.017  关于美谷分子仪器        Molecular Devices 始创于上世纪 80 年代美国硅谷,并在全球设有多个代表处和子公司。2005 年,Molecular Devices 在上海设立了中国代表处,2010 年加入全球科学与技术的创新者丹纳赫集团,2011 年正式成立商务公司:美谷分子仪器 (上海) 有限公司。Molecular Devices 以持续创新、快速高效、高性能的产品及完善的售后服务著称业内,我们一直致力于为客户提供在生命科学研究、制药及生物治疗开发等领域蛋白和细胞生物学的创新性生物分析解决方案。关注德泉兴业,了解更多实验室仪器信息!            科        检测病毒分离纯化        研        灵活省时广泛应用    ↓↓

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2024.09.05

从分子到疾病:线粒体动力学研究取得新突破

 作为细胞的“能量工厂”,线粒体在维持能量稳态方面发挥重要作用,可以调控蛋白质、脂质、溶质和代谢物产物的进出,并保护细胞质免受有害线粒体产物的影响。线粒体通过不断的分裂和融合,维持线粒体形态、分布和数量,维持细胞稳态,该过程被称为线粒体动力学。线粒体动力学的病理改变可导致生物能量功能受损和线粒体介导的细胞死亡,并与多种病理机制相关,包括缺血性心肌病、糖尿病、肺动脉高压、阿尔兹海默症等。    线粒体大小和形状取决于它们在细胞内的位置以及不同细胞对能量的需求。当线粒体发生损伤时,它的形态和完整性会发生改变,如线粒体的数量、大小、长度和形状等。高内涵成像分析系统非常适合进行线粒体表型和结构的研究:共聚焦成像和水镜可以提高成像质量并更好地显示线粒体结构。磁悬浮载物台和环境控制帮助完成长时间线粒体动力学追踪。高内涵的图像分析工具可以帮助科研工作者获得不同表型的数字特征。线粒体表型和结构重排的分析模块可用于线粒体动力学为基础的细胞研究。  1线粒体动力学研究线粒体形态、膜电位和氧化还原状态已被用于识别功能化合物或遗传扰动的影响。然而过去的研究仅侧重于提取有限数量的形态特征,导致大量有助于改善目标识别的信息丢失。在刚刚发表于 Nature Computational Science 上的文章中【1】,浙江大学药学院王毅教授团队引入时间维度来评估暴露于不同化合物的线粒体形态和膜电位。研究者通过使用 ImageXpress Micro Confocal 高内涵成像分析系统对线粒体形态和膜电位进行长时间成像,建立了用于监测时间分辨线粒体图像的流程,产生了包含 570,096 个单细胞图像的数据集,以用于后续的大规模药物发现。    单细胞延时图像拍摄的三通道 TMRM, MtEGFP 和 Hoechst 33342。持续时间 60 分钟,时间间隔为 4 分钟。    单细胞经 DMSO、卡维地洛(carvedilol)和顺铂(cisplatin)处理 60 分钟的线粒体延时图像采集。2线粒体完整性和融合度测定用高内涵成像系统的共聚焦模式和 40X 水镜拍摄活细胞的图像后使用 MetaXpress 高内涵分析软件中的“Find Fibers”模块识别细长的线粒体,使用“Granularity”模块识别圆形颗粒,用于计算各种化合物对线粒体完整性的剂量效应和有效浓度。    3经化合物处理的线粒体功能多维度评估高通量自动化获取多维数据并分析是高内涵的典型应用,利用氯喹 Chloroquine(可抑制线粒体再循环),鱼藤酮 Rotenone(氧化磷酸化抑制剂)和缬氨霉素 Valinomycin(钾离子载体,可破坏线粒体膜电位)等药物处理 PC12 细胞后,可使用上述软件对线粒体的功能进行评价,包括完整性、荧光强度、长度等。    对照组 A、缬霉素 B、鱼藤酮 C    Molecular Devices 高内涵成像分析系统适用于各种细胞模型中化合物的药物开发或毒性评估。使用高内涵成像和高级图像分析的线粒体动力学分析方法不仅可以量化线粒体的表型变化,而且这种多参数方法也可用于研究正常和病理结构变化以表征疾病模型或复合效应。  参考文献1.Yu, M., Li, W., Yu, Y. et al. Deep learning large-scale drug discovery and repurposing. Nat Comput Sci 4, 600–614 (2024). https://doi.org/10.1038/s43588-024-00679-4  关于美谷分子仪器        Molecular Devices 始创于上世纪 80 年代美国硅谷,并在全球设有多个代表处和子公司。2005 年,Molecular Devices 在上海设立了中国代表处,2010 年加入全球科学与技术的创新者丹纳赫集团,2011 年正式成立商务公司:美谷分子仪器 (上海) 有限公司。Molecular Devices 以持续创新、快速高效、高性能的产品及完善的售后服务著称业内,我们一直致力于为客户提供在生命科学研究、制药及生物治疗开发等领域蛋白和细胞生物学的创新性生物分析解决方案。关注德泉兴业,了解更多实验室仪器信息!            科        检测病毒分离纯化        研        灵活省时广泛应用    ↓↓

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2024.09.05

【会议预告】第三届 3D 细胞类器官应用与高内涵成像技术研讨会邀您参加

   时间|2024 年 9 月 26 日(星期四)地点|北京海淀永泰福朋喜来登酒店 2 楼宴会厅 A              活动背景类器官模型因其能够再现真实组织的复杂性而在生物研究和筛选中越来越受欢迎,因为它们与单层 2D 培养模型相比更能代表体内环境。类器官结构为疾病建模和化合物影响评估提供了一个非常有用的工具。对于改善类器官表型变化的定量评估以及增加实验和检测中的通量而言,类器官的自动培养、成像和分析是非常重要的。鉴于此,美谷分子仪器(上海)有限公司举办此次 3D 细胞类器官应用与高内涵成像技术研讨会,旨在为科研人员带来最新的 3D 细胞、类器官研究、自动培养、高内涵成像和分析等技术应用,我们期待您的莅临与指导!会议日程13:30-14:00来宾签到14:00-14:10欢迎致辞14:10-14:50复杂类器官构建及应用冷泠  教授 中国医学科学院北京协和医院14:50-15:30体外模型全自动培养及高通量检测解决方案苏园园博士 产品经理美谷分子仪器(上海)有限公司15:30-16:00茶歇及展台参观16:00-16:40基于神经支配的人体仿生类器官和器官芯片的研究郑付印  副教授北京航空航天大学16:40-17:20基于生物 3D 打印的体外仿生组织构建及精准医疗研究庞媛 副研究员清华大学17:20-18:00高内涵筛选系统 3D 细胞成像创新应用宁航  应用科学家主管美谷分子仪器(上海)有限公司                   关于美谷分子仪器        Molecular Devices 始创于上世纪 80 年代美国硅谷,并在全球设有多个代表处和子公司。2005 年,Molecular Devices 在上海设立了中国代表处,2010 年加入全球科学与技术的创新者丹纳赫集团,2011 年正式成立商务公司:美谷分子仪器 (上海) 有限公司。Molecular Devices 以持续创新、快速高效、高性能的产品及完善的售后服务著称业内,我们一直致力于为客户提供在生命科学研究、制药及生物治疗开发等领域蛋白和细胞生物学的创新性生物分析解决方案。关注德泉兴业,了解更多实验室仪器信息!            科        检测病毒分离纯化                研        灵活省时广泛应用    ↓↓

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2024.09.05

开学啦|新学期,“心”守护实验室仪器免费巡检报名名额领取中

“开学季实验室仪器免费巡检”报名活动,为进一步确保实验室设备的正常运行、实验顺利开展,提高大型仪器设备的使用寿命,减少精密仪器设备的维护保养费用和更换成本,旨在确保学生在新学期开始时能够使用到安全、准确且性能良好的实验设备,从而保障实验教学的顺利进行和学生的人身安全。   此次活动由北京德泉兴业提供20个免费名额,并邀请了相关品牌仪器工程师和技术支持人员,主要针对思拓凡、贝克曼库尔特、徕卡、梅特勒-托利多、艾卡、雅马拓、松洋、安拓思、普兰德等品牌仪器进行集中维修维护及操作培训等服务活动。活动内容参与巡检仪器新学期,“心”守护01安全检查首先进行仪器设备的安全性能检查,包括仪器维护、仪器防护、紧急停机装置等,防止故障扩大,保障实验需要,延长设备的使用寿命。02性能校验对精密仪器进行性能校验,确保其测量准确度和稳定性符合标准。03操作指导针对新入职教师或学生,提供仪器的正确操作方法和日常维护知识培训。

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2024.09.03

开学啦|新学期,“心”守护实验室仪器免费巡检报名名额领取中

 “开学季实验室仪器免费巡检”报名活动,为进一步确保实验室设备的正常运行、实验顺利开展,提高大型仪器设备的使用寿命,减少精密仪器设备的维护保养费用和更换成本,旨在确保学生在新学期开始时能够使用到安全、准确且性能良好的实验设备,从而保障实验教学的顺利进行和学生的人身安全。   此次活动由北京德泉兴业提供20个免费名额,并邀请了相关品牌仪器工程师和技术支持人员,主要针对思拓凡、贝克曼库尔特、徕卡、梅特勒-托利多、艾卡、雅马拓、松洋、安拓思、普兰德等品牌仪器进行集中维修维护及操作培训等服务活动。      活动内容              参与巡检仪器              新学期,“心”守护          01        安全检查                    首先进行仪器设备的安全性能检查,包括仪器维护、仪器防护、紧急停机装置等,防止故障扩大,保障实验需要,延长设备的使用寿命。02        性能校验                    对精密仪器进行性能校验,确保其测量准确度和稳定性符合标准。03        操作指导                    针对新入职教师或学生,提供仪器的正确操作方法和日常维护知识培训。      科      检测病毒分离纯化      研      灵活省时广泛应用    

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2024.09.03

纳米流式检测仪可以检测什么:探索EV“指纹”新视界

在现代生物医学研究中,流式细胞术(Flow Cytometry)已经成为常用分析工具。它能够通过分析单细胞的多参数特性,揭示细胞间的复杂异质性。而在这一领域,流式细胞指纹(Flow Cytometry Fingerprint)作为一种前沿技术,正在为我们揭示细胞微观世界的更多奥秘。什么是流式细胞指纹?流式细胞指纹是指通过流式细胞术获得的细胞或颗粒的特定光学特征,这些特征包括散射光和荧光信号。每一种细胞或颗粒都有其自己的指纹图谱,这些图谱反映了它们的物理和生物化学特性。通过对这些指纹图谱的分析,研究人员能够识别并分类不同类型的细胞,甚至可以在同一细胞群体中发现不同的亚群。传统纳米流式在细胞外囊泡(Extracellular Vesicles, EVs)领域的挑战尽管流式细胞术在细胞分析中取得了巨大进展,但在传统纳米流式领域仍面临一些行业的挑战。一个主要问题是缺乏免疫分型的共识,并且同时检测的荧光信号非常有限。目前,细胞外囊泡(Extracellular Vesicles, EVs)亚群的研究还在起步阶段,并没有像免疫学中那样成熟。免疫细胞可以通过多色免疫分析,利用不同的CD分子的表达谱型(指纹)去定义其亚群,但在EV的研究中,类似的标记和分类标准尚未建立,并且相较于免疫细胞,EV有着更丰富的多样性,可供标记的潜在靶点也更多。CytoFLEX nano的突破CytoFLEX nano作为一款先进的纳米流式细胞仪,通过结合散射光和荧光信号的综合分析,显著提高了检测的准确性和灵敏度。6荧光通道检测能力,实现精准指纹描述:CytoFLEX nano能够同时检测6 个荧光通道,提供更加全面和详细的EV荧光指纹信息。5散射光通道检测能力,释放无限潜力:CytoFLEX nano分析仪通过提供5个侧向散射通道扩展了您的研究可能性。通过分析不同散射的比率来研究新群体,而无需依赖染料进行鉴定或分离。这种创新方法不仅提高了实验的灵活性和精度,还为细胞外囊泡研究提供了新的可能性和洞察力。CytoFLEX nano分析仪无疑是未来EV多样性研究的重要工具。高灵敏度,确保捕捉每一个潜在的实验现象与信号在一个细胞外囊泡(EV)上,可能只有10个抗原的拷贝,而目前的流式细胞仪无法测量如此少量的抗原。CytoFLEX nano流式细胞仪的主要优势在于其改进的散射和荧光灵敏度,使得可以测量更小的颗粒并检测低密度的抗原。高阶算法应用:利用Cytobank解析EV“指纹”高阶算法的引入为细胞外囊泡(EV)研究带来了变化。Cytobank平台提供了一系列强大的高阶数据分析工具,如ViSNE、FlowSOM、SPADE和CITRUS,这些工具能够高效解析流式细胞数据,揭示复杂的生物学特征。这些高阶算法在解析EV“指纹”中的应用,使得研究人员能够更精准地解析流式细胞数据,发现传统方法难以识别的细微差异。例如:癌症诊断:利用ViSNE分析癌症患者血液中的EV,发现特定的EV亚群与癌症类型和阶段相关联,为早期诊断和个性化治疗提供了新的生物标志物。心血管疾病研究:通过FlowSOM聚类分析心血管疾病患者的EV数据,识别出与疾病进展相关的特定EV亚群,为疾病机制研究提供了重要线索。免疫监测:利用SPADE分析免疫治疗前后患者的EV变化,揭示免疫反应的动态过程,为评估治疗效果提供了新的视角。差异分析:使用CITRUS对不同病理状态下的EV进行差异分析,发现与疾病相关的特定细胞亚群,帮助识别潜在的生物标志物。von Lersner, Ariana K., et al. "Multiparametric single-vesicle flow cytometry resolves extracellular vesicle heterogeneity and reveals selective regulation of biogenesis and cargo distribution." ACS nano 18.15 (2024):10464-10484.所见即所得,利用CytoFLEX SRT实现分选与分析的相互验证。CytoFLEX nano不仅让研究人员能够在EV分析阶段实现“所见”,更通过CytoFLEX SRT的精确分选功能,将这些识别出的EV亚群进行进一步的分选和深入分析,实现“所得”。这种协同工作流程,确保了数据的准确性和可靠性。CytoFLEX nano与CytoFLEX SRT的结合,为EV研究提供了一个强大的工具组合。前者通过高灵敏度的多通道检测,实现对细胞群体的初步识别;后者则通过精准的分选功能,对这些群体进行进一步的验证和分析。这一协同工作流程,使研究人员能够在分子水平上揭示EV的复杂特征和生物学功能,开拓新的研究领域和应用前景。通过这种多种方法的联动,科学家们能够更全面地理解EV的特性,从而在疾病诊断、治疗和预防中发挥更大的作用。CytoFLEX nano和CytoFLEX SRT的完美结合,真正实现了分选与分析的相互验证,尽可能捕捉到每一个潜在的EV亚群。John Tigges, DirectorFlow Cytometry Core Facility and Center for Extracellular Vesicle Detection, Beth lsrael Deaconess Medical Center“Having all these scatters at hand together with the greater sensitivity gives you the power to ask, what could I do now?lt opens up new research possibilities.“拥有这些散射通道以及更高的灵敏度,让你可以问自己,我现在还能做些什么?这开启了新的研究可能性。”数据示例:通过流式分选验证散射光流式细胞指纹的真实性在细胞外囊泡(EVs)的研究中,准确识别和表征其特性是至关重要的。使用CytoFLEX Nano流式细胞仪,我们能够通过高灵敏度的散射光检测捕捉到EVs的初步指纹信号。然而,为了验证这些散射光指纹的真实性,我们进一步利用CytoFLEX SRT进行精确分选。通过分选前后的对比分析,并使用标准微球验证散射光信号的差异,我们确保了这些指纹的准确性和可靠性。使用CytoFLEX SRT对在CytoFLEX Nano上观察到的不同散射差异信号进行分选,并通过回测确认这些差异的真实存在。同时,CytoFLEX SRT的精确分选功能也得到了验证。结语CytoFLEX家族和Cytobank的结合,为细胞外囊泡(EVs)研究提供了一个强大且全面的分析工具组合。通过纳米流式细胞术,研究人员能够捕捉到EVs的复杂指纹信号,并通过精确分选技术,进一步验证和深入分析这些信号的真实性。这种多方法学联动,不仅提高了数据的准确性和可靠性,还揭示了EVs在不同生理和病理状态下的潜在作用。高灵敏度的散射光和荧光检测能力,加上Cytobank平台的高阶算法,使得研究人员能够更全面地理解EVs的特性,从而在疾病诊断、治疗和预防中发挥更大的作用。通过这些先进技术的应用,EVs研究已经进入了一个新的纪元,开创了更多的研究领域和应用前景。CytoFLEX nano和CytoFLEX SRT的完美结合,为现代生物医学研究带来了前所未有的便利和创新。未来,我们有理由相信,随着技术的不断进步和应用的不断深入,流式细胞术将继续在EVs研究中发挥关键作用,为生命科学的探索开辟更多可能性。

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2024.08.21

已上市及临床试验中以CHO细胞为生产平台的蛋白亚单位疫苗概述

从18世纪天花的接种实践到通过接种牛痘预防天花,疫苗的开发与应用领域有着持续进步的丰富历史。1930年,可用于体外病毒繁殖的动物细胞培养物的引入,为20世纪下半叶针对麻疹、腮腺炎、风疹和脊髓灰质炎等疾病的减毒、灭活疫苗的成功开发奠定了基础。而随后的在酵母、细菌、昆虫和哺乳细胞中引入重组DNA技术的建立,使得新型疫苗的开发成为可能。本文将对当前上市或临床试验中的,以CHO细胞为生产平台的蛋白亚单位疫苗类型进行梳理。一CHO细胞表达系统特征CHO细胞包括从CHO-ori细胞系衍生出CHO-DXB11 (DHFR+/-) 、CHO-DG44 (-/-) 、CHO-GS、CHO-K1SV等多种细胞系,各具特定的特征,可分离稳定的转染物并获得高产量。与其他重组蛋白质生产细胞系相比,CHO细胞具有更高的生产力,流加批次培养可达到1-10 g/L。而相较于293细胞,病毒不易感染CHO细胞并在其中复制。CHO细胞对于蛋白的翻译后加工修饰与人类细胞的高度相似,如糖基化、二硫键形成以及蛋白的水解加工,但是也与人类细胞在翻译后修饰的特定模式与结构上存在微妙差异,没有工程化修饰过的CHO细胞不能合成某些人源聚糖键,比如:α-2,6-唾液酸化、二分N聚糖和α-1,3/4-岩藻糖基化,为了在CHO细胞内实现目的蛋白的糖基化,不同的团队也开发了相应的糖工程方法。CHO细胞可以进行高密度无血清悬浮培养,并将目的蛋白分泌到培养基中,因而是一个经济有效的大规模重组蛋白表达平台。CHO细胞中重组蛋白的表达可受到多种因素影响,包括:表达质粒、启动子的选择、培养条件(培养基成分、温度、溶氧)、CHO细胞系的选择和表达系统的选择等。利用CHO细胞进行重组蛋白表达包括瞬时表达和稳定表达两种方式。瞬时表达系统中含有目的基因的cDNA会随着细胞分裂而被稀释,表达周期较短。尽管瞬时表达的效率低于稳定表达,但优化策略后的蛋白产量也可高达1 g/L。而瞬时表达减少了与细胞系开发相关的时间和成本,被广泛用于临床前研究中蛋白的快速生产。CHO细胞稳转则是大规模生物制造的标准方法。二蛋白亚单位疫苗蛋白亚单位疫苗是基于病原体的一种或几种分离或选定的成分,通常是免疫显性抗原(全蛋白、蛋白结构域或多肽),可在佐剂刺激下使产生体液和/或细胞免疫。蛋白亚单位疫苗因为没有恢复到致病形式的风险,也被认为比灭活疫苗或减毒活疫苗更安全。蛋白亚单位疫苗已被批准用于多种病毒感染性疾病的预防,如:SARS-CoV-2、水痘-带状疱疹病毒、呼吸道合胞病毒和流感,剂量范围从5到180 ug。尽管新冠的蛋白亚单位疫苗应用范围没有其他类型疫苗广,但仍是目前临床前和临床候选疫苗的主要选择。蛋白亚单位疫苗的一个潜在挑战是免疫原性较低,这也凸显了识别抗原以引起强大保护性免疫的重要性。三CHO细胞生产的已批准或处于临床阶段的蛋白亚单位疫苗基于CHO细胞作为治疗性重组蛋白表达系统的优势,CHO细胞已成为蛋白亚单位疫苗生产的主要选择之一。从近40年前开始,各种基于CHO细胞的治疗药物被监管机构批准,与新的细胞系或使用较少的细胞系相比,生物制药公司、CDMO公司以及供应商可以基于CHO细胞生产平台的熟悉度大大减少了疫苗生产的时间和风险。利用CHO细胞生产蛋白亚单位疫苗的上下游工艺与生产其他重组蛋白相似。接下来我们将梳理已获批或正在临床开发的蛋白亚单位疫苗(如图1)。图1:CHO细胞生产平台的应用 (a) 已获批或临床候选药物的蛋白亚单位疫苗;呼吸道合胞病毒呼吸道合胞病毒是全球呼吸道感染的主要原因,在幼儿、老年人和慢性病患者中可引起严重疾病,2019年全球幼儿死亡人数超过100000人,在高收入国家中造成2.2万到4.7万人死亡。早期使用甲醛灭活的RSV疫苗,甲醛导致病毒抗原产生羰基集团,阻碍了抗原在细胞质中的加工,产生了低亲和力的抗体,从而导致了增强型的RSV疾病,表现为:高烧、支气管炎和呼吸困难。目前RSV表面的病毒融合 (F) 蛋白作为疫苗开发的潜在靶点,这种预融合稳定形式的设计已被证明可以产生有效的中和抗体。但也有研究表明,即使采用低剂量预融合F蛋白在动物上也可能产生增强型RSV疾病。相比之下,预融合的F蛋白在成人接种时表现出较好的结果,也导致葛兰素史克开发的RSV疫苗Arexvy疫苗 (RSVPreF3 OA) 的获批上市。该疫苗使用CHO细胞生产,由F蛋白的1-513号残基组成,通过T4纤维蛋白结构单元三聚体化。预融合形式通过将F1的Ser155和Ser290替换为半胱氨酸而实现,在不稳定的N端和结构刚性中心区域之间建立了二硫键,另外引入S190F和V207L突变以填充F1N端空隙,增加疏水相互作用。在早期临床试验展现良好的安全性,并确认其诱导产生中和抗体的能力后,和AS01E佐剂一起进入了III期临床,在17个国家25000名60岁以上成年人中评估有效性。研究结果显示,单剂该疫苗对RSV相关的下呼吸道疾病的有效性为82.6%,对严重表现的有效性为94.1%,对RSV相关急性呼吸道感染的有效性为71.7%。第二个获批的RSV疫苗是辉瑞公司的Abrysvo,是由CHO细胞生产的针对RSV A和B亚群的双价融合前F蛋白。在III期临床中,对RSV相关的下呼吸道疾病有66.7%的有效性,对严重RSV相关疾病有85.7%的有效性,且严重不良事件发生率低,安全性无明显问题。并且也作为孕妇疫苗进行评估,接种孕妇时间为妊娠第24-36周,该疫苗显示在新生儿出生后的前90天内,预防严重RSV相关呼吸道疾病有81.8%的有效性,因此获批做为预防婴儿RSV的母亲疫苗。以上两个疫苗受到了市场的广泛接受,在三个月内达到了12.35亿美元的销售额,也凸显了CHO细胞在疫苗制备中的商业潜力。水痘-带状疱疹病毒 (VZV)VZV可引起水痘,是一种与典型皮疹和轻微症状相关的高度传染性感染。初次感染后,病毒可在神经元中持续存在,多年后重新激活会引起带状疱疹;重新激活后以皮疼痛性水疱性皮疹为特征,在免疫受损的宿主中可能导致出血性病变,最主要的并发症为急性神经炎和带状疱疹后神经痛,影响50岁以上的25%-50%的患者。为了保护年长或免疫缺陷的成年人,重组VZV疫苗Shingrix于2017年由FDA获批,一年后获批EMA。Shringrix是以VZV病毒表面最普遍的gE蛋白为抗原,是中和抗体和T细胞识别的关键靶标。该疫苗由CHO细胞生产,并由于去除了C端和跨膜结构域而可以被分泌到细胞外。在抗原产生过程中,CHO细胞的培养条件优化后,使用20 L的波浪式反应器进行批培养,最终每升产量在2.44 g。在50岁以上人群中,有效性达97.2%以上。人巨细胞病毒 (HCMV)HCMV是一种感染了全球约80%人口的病原体,一旦个体免疫降低就会引发健康风险。并且也与各种癌症进展有关,其先天性感染也是出生缺陷的主要原因。即便如此,目前也没有批准上市的疫苗。但有几款疫苗在临床试验中,其中有几款疫苗基于HCMV表面的gB蛋白由CHO细胞产生,与病毒入侵过程中的膜融合至关重要,并且包含中和抗体的多个识别表位,该蛋白与佐剂MF59正处于临床II期进行测试。赛诺菲的gB基因来源于HCMV Towne毒株,不含跨膜结构域和弗林切割位点。gB/MF59疫苗在移植后患者、产后妇女和健康的青春期女孩等不同受众中均获得了良好的效果,结果显示,gB结合抗体滴度增加,CD4+T细胞反应增强,HCMV病毒血症降低。葛兰素史克的另一款gB蛋白亚单位疫苗处于临床I期试验中,抗原基于AD169毒株,其修饰与赛诺菲相似。另外,来自单纯疱疹病毒1型的gD氨基酸序列融合在AD169 gB序列以促进分泌。最近葛兰素史克开发的针对HCMV的新型佐剂,由gB蛋白和五聚体抗原组成。HCMV五聚体复合物也是疫苗开发中的具有吸引力的抗原,相比于gB蛋白,能诱导更有效的抗体中和进入上皮细胞。因此,葛兰素史克使用CHO-K1和CHO-DXB11衍生的细胞克隆获得400 mg/L的五聚体复合物,并在小鼠中诱导了有效的中和免疫反应。五聚体/gB 蛋白亚单位疫苗候选药物目前正在健康成人受试者中进行评估。人类免疫缺陷病毒 (HIV)即使在发现HIV病毒40年后,HIV功能性疫苗的挑战仍然存在,主要原因包括逆转录酶中缺乏3’核酸外切酶的校对活性,使得病毒gp41和gp120可快速突变。而中和抗体靶向的抗原表位位于HIV包膜蛋白的gp可变区域,在免疫系统的筛选压力下也会导致突变体的产生。HIV env gp重组三聚体是目前作为疫苗开发最有潜力的靶点,可能会引发广泛的中和抗体。始终保持融合前构象的早期可溶性三聚体称为“SOSIP”,其中包括gp120-gp41之间的工程化二硫键 (SOS) 以及有助于维持融合前构象的螺旋断裂突变(I559P,称为IP)。最近的临床试验中的SOSIP三聚体已经进行了改进,包括CHO细胞的改进。其中某些env蛋白,尤其是HIV分支B的env蛋白容易受蛋白水解影响。为了解决这个问题,采用了工程化的C1蛋白酶缺陷的CHO细胞系,从而减少蛋白降解。三聚体4571 (BG505 DS-SOSIP.664) 是基于HIV A分支的高度稳定的与融合闭合可溶性包膜糖蛋白三聚体。该三聚体在gp120中结合了201C-433C二硫键突变以防止CD4诱导的构象变化。最近三聚体4571在I期临床试验中进行了独立评估,并在异源方案中作为加强剂量中做了评估,结果显示三聚体4571是安全的,没有引起不良反应,并能够成功诱导特异性抗体产生,主要是集中在三聚体上的无聚糖基底上的抗体。但是对于天然三聚体,通常由于免疫系统无法接触到无聚糖基底而导致其在临床试验中具有更明显的非中和反应。为了减少这种基底定向免疫,未来CHO细胞生产的蛋白亚基疫苗可以使用聚糖进行工程设计以掩盖三聚体基底结构域,减少非中和抗体的产生。严重急性呼吸系统综合症冠状病毒2 (SARS-CoV-2)为抗击COVID-19大流行研发了多种疫苗,包括:灭活病毒疫苗、基于蛋白质的疫苗、核酸疫苗以及载体疫苗。源自SARS-CoV-2刺突 (S) 蛋白的蛋白亚单位疫苗由CHO细胞产生,不同的候选药物在特定国家/地区获得紧急使用或在临床试验阶段。表1:截止2023.12临床审批的CHO细胞生产的蛋白亚单位疫苗SARS-CoV-2蛋白亚单位疫苗开发最广泛使用的策略之一是使用S蛋白的胞外结构域 (ECD) 作为抗原。Medigen Vaccine Biologics Corporation开发的MVC-COV1901疫苗基于融合前稳定的S ECD三聚体,该三聚体具有K986P和V987P突变,以及在S1/S2连接处具有弗林蛋白酶切割位点682突变 (RRAR>GGAS) ,以提高稳定性并增加了T4纤维蛋白三聚体化结构域。CHO细胞用于生成表达该S抗原的稳定克隆,该抗原被证明类似于人HEK293细胞表达的SARS-CoV-2 S蛋白的结构。该候选疫苗用氢氧化铝(明矾)和CpG 1018佐剂,CpG 1018是一种TLR-9激动剂,通过刺激CD4+/CD8+T淋巴细胞来增强免疫原性。II期临床试验 (NCT04695652) 表明,MVC-COV1901是安全的且耐受性良好,并且在年轻人和老年人中都能诱导高中和抗体滴度。MVC-COV1901还与牛津-阿斯利康的ChAdOx1 nCoV-19病毒载体疫苗进行了比较,其中MVC-COV1901被证明更优越,可诱导更广泛的IgG亚类和更高的抗Omicron (BA.1) 变体的中和抗体滴度。MVC-COV1901已获准在斯威士兰、巴拉圭、索马里兰和台湾使用。SARS-CoV-2 S蛋白内的受体结合域 (RBD) 是中和抗体的主要靶点。因此,它已被用于生产各种蛋白亚单位疫苗。已经探索了不同的策略来进一步增强其抗原性,例如使用单体、二聚体或多聚体形式。ZIFIVAX (ZF2001) 疫苗由安徽智飞龙康生物制药公司开发,由三剂基于RBD的疫苗和明矾佐剂组成。ZF2001是由两个拷贝的RBD (R319-K537) 形成并在CHO细胞中产生串联重复的二聚体。这种RBD二聚体与RBD单体保持相似的亲和力,而且能够有效地与人ACE2受体结合。在I期和II期临床试验中,ZF2001在人体中表现出安全特征和免疫原性。在多个国家/地区进行的III期临床试验显示,在完全接种疫苗后至少六个月内对有症状和重度至危重的COVID-19具有安全性和有效性。ZF2001疫苗已获准在中国、哥伦比亚、印度尼西亚和乌兹别克斯坦使用。CHO细胞的广泛使用和抗原表达的翻译后修饰使得CHO细胞在面临非快速反应环境中生产疫苗更为可取,尤其是CHO细胞的可操作性、安全性和稳定性。CHO细胞作为更具成本效益和高效的疫苗生产平台的潜力会越来越的到业界认可。在CHO细胞培养过程中,HyClone可以提供多种商品化CHO细胞培养基,包括:Actipro、HyCell CHO、PSL A01和PSL A02等多种基础培养基以及包括Cell boost 7a、Cell boost 7b等多种补料。参考文献:CHO cells for virus-like particle and subunit vaccine manufacturing声明:本文为作者原创首发,严禁私自转发或抄袭,如需转载请联系并注明转载来源,否则将追究法律责任

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2024.08.19

玩转ÄKTA | The Next Level-ÄKTA 2.0

实验室工作细致繁琐,设备操作费心费力。您还在手动进样,蹲守收集吗?ÄKTA自动化纯化平台可以解放您的双手,释放您的时间,无需排班,全自动搞定您的实验室纯化工艺,从上样到收集,从筛选到优化,高效搭配,稳健运行,ÄKTA带您走进2.0纯化新时代。18世纪的英国,工厂手工业的生产已经不能满足市场的需要,蒸汽机的发明标志着第一次工业更新的发生,从此社会生产力有了巨幅提升,社会形态也从农业、手工业时代进入了工业时代。劳动者们从繁琐的手工劳动中,将精力转为投入到机器操作和技术研发的工作中去。当今生命科学技术高速发展,智能工艺开发的需求也推进着智能工具的发展。作为层析金标准的ÄKTA层析设备,也在不断发展、升级和改进,为使用者带来更快速、更智能使用体验,加速生物工艺研发的进程。近两年众多ÄKTA智能工具的推出,包括ALIAS高通量自动进样器、多步层析串联解决方案、ÄKTA go parallel平行纯化解决方案、UNICORN Networking、GoSilico机理建模等相继推出,也代表着ÄKTA层析已进入2.0时代。高通量下游纯化方案ALIAS自动进样器可与ÄKTA pure或ÄKTA avant联合使用,用于高通量的小量样品纯化,全自动完成1 uL至10 mL体积的多个样品的连续进样。ALIAS自动进样器拥有独立的流路和样品环,无需配置额外的样品泵等动力系统。内置高效的针头清洗程序,可以帮助清楚管路和样品针中的残留物。ALIAS具有优异的重复性和精准度,让小量样品的筛选工艺数据更加可靠。ALIAS自动进样器可以适配多种进样规格,如96微孔板、96深孔板、384孔板、1.5 mL或10 mL样品瓶,紧凑可堆叠的设计和强大的性能非常适合用于样品的过夜连续纯化或高通量筛选。图1:ALIAS自动进样器与ÄKTA搭配使用自动进样器有两种不同的版本:分析型ALIAS Bio和制备型ALIAS Bio PREP。ALIAS Bio适用于微量样品的分析实验,ALIAS Bio PREP适用于小量样品的制备纯化。两种型号均可选择制冷模块,该模块可在样品室中降温至4°C,保持样品的生物活性。图2:使用ALIAS自动进样器连续进样5针,具有良好的重复性多步串联纯化方案生物分子下游层析步骤通常需要多种层析方法搭配使用,科研领域需要去除干扰研究的杂质分子,而生物制药领域则需要满足法规要求。每个层析步骤之间的操作过程,如移液、收集、换液等需要人为值守,重复性强也费时费力。提高下游纯化效率除了选择更优的纯化工艺外,还可以简化样品的中间处理过程,使用多步串联层析方法,可以省去步骤中间的手动操作,节省时间的同时,也减少了人为操作带来的误差。常用的多步串联分为Loop环模式和Tandem模式的多步串联纯化。图3:Loop环模式 (A) 和Tandem模式 (B)通过对ÄKTA pure或 ÄKTA avant流路的改造,或加装额外的功能阀门,可以实现两步到三步层析步骤的串联,利用一个程序,完成多个层析过程,直接拿到纯化的最终结果。最大程度提高实验的自动化水平,提升ÄKTA设备的效率和纯化工艺的速度。多步纯化方案完全按需定制,根据用户具体实验条件进行调整。Cytiva也已总结了多个高通量多步纯化的自动化案例供您参考。

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2024.08.19

从小体积到大规模:超速离心与外泌体纯化

不同体积的人间充质干细胞扩增策略比较1随着外泌体临床应用的发展,对于外泌体的数量的需求也越来越大。与LNP不同,目前没有特别有效的工业大规模合成外泌体的方法,加之外泌体的产率低,例如MSC只有1012 EVs/L,只能通过大规模的细胞培养的方式来提高外泌体的产量。如何使用外泌体纯化金标准的超速离心来应对不同规模,特别是大规模的外泌体进行纯化了?今天我们一起来看看有哪些解决方案。体积:0-1 L对于实验研究或小试阶段的外泌体离心纯化,可以直接选择合适体积的定角(最大单次离心体积564 ml)或者水平转子(最大单次离心体积231 ml)进行超速离心纯化。即可获得高纯度的外泌体样品进行后续实验。体积:5-20 LPEG沉淀法经行外泌体纯化2对于5-20 L的体系,即使是最大的转子也无法在单次离心(通常为 2 小时)中处理超过600 ml的液体,需要对样品进行有效的减容。由于EVs与病毒具有许多共同的物理特性,可以通过聚乙二醇(PEG)沉淀法有效地从较大的上清液中吸附和沉淀EVs。通过该纯化方法得到的MSC-EV,成功的应用与治疗难治性移植物抗宿主病(GvHD) 患者。方法如下:1将收获的MSC-CM在6800 ×g、4°C下离心45分钟2将上清液(SN)通过0.22 μm孔径过滤器过滤3调节至10% PEG 6000和75 mM NaCl的浓度,并在4°C下孵育 8-16小时4将悬浮液在1500 ×g、4°C下离心 30 分钟5将颗粒重新悬浮并在NaCl溶液中洗涤6通过在100,000 ×g、4°C下超速离心130分钟将EV再沉淀7将获得的EV 沉淀重悬于缓冲液中并储存在-80°C直至使用在该方法中1和4步骤时可以考虑采用大容量的Avanti JXN系列高离进行细胞和杂质的去除以及PEG胶体的沉淀(最大单次离心体积6 L)。在第6步骤使用Optima XPN系列超离经行外泌体的再沉淀。体积:50-500 LUC-MSC-EV潜在制造流程。下游纯化中使用切向流过滤 (TFF) 结合超速离心 (UC) 步骤进行UC-MSC-EV 大规模纯化4对于大体量的细胞培养液,最适合的EV富集纯化方法尚未达成共识。TFF与超速离心相结合,是一种高效、可扩展和快速的方法4。TFF 工艺可用于在不到 2 小时的时间内将 10 L 的初始体积减少到约 200 mL5。然后通过超速离心沉淀EV样品。按照一台超速离心机的处理量600 ml离心2 h计算,每个工作日可以进行三个批次的离心,那么单台超离每日的处理通量可以达到接近100 L。除了MSC-EV,TFF/UC的方法同样适用于其他细胞系,比如NK细胞6和脂肪来源干细胞(ASC-sEVs)7。相比而言,最后一步采用8:•尺寸排阻色谱法 (SEC)适用于去除蛋白质聚集体和脂蛋白颗粒9。然而,由于回收率有限,这一步骤通常会导致总颗粒数大幅下降(减少30-70%),并且以体积增加1.5倍为代价。•阴离子交换色谱法可产生功能活性的EV10。然而,该技术的一个缺点是大多数血清蛋白也与树脂结合,并在 500 mM NaCl 洗脱条件下与囊泡部分共洗脱。•肝素亲和柱似乎更具选择性地与EV的膜组分结合11,但是整个过程非常耗时。通过4种不同的分离方案从MSC CM中分离sEVs相应的对比实验也表明:CFF与超速离心相结合的方法(方法Ⅳ) ,能够产生与差速离心结合超速离心法(后者仍被视为sEVs分离的金标准,方法Ⅰ)相似的sEVs特性。PEG与UC(方法II)和CFF与SEC(方法III)的组合都导致了sEV特性的改变,如不同的表面抗原表达,并且在低纯度的sEV制剂中,颗粒与蛋白质的比例较低。相比而言,方法IV的sEV纯度更高12。外泌体离心纯化常见杂质与等密度梯度离心流程除此之外,如果希望进一步提高TFF/UC纯化的外泌体纯化,也可将获取的外泌体悬液进行进一步的等密度梯度离心,利用密度的差异性去除与EV粒径大小相似的乳糜颗粒和其他杂质13。 ● 文章来源: 1. Biological Considerations in Scaling Up Therapeutic Cell Manufacturing.2. Scaled Isolation of Mesenchymal Stem/Stromal Cell-Derived Extracellular Vesicles.3. MSC-derived exosomes: A novel tool to treat therapy-refractory graft-versus-host disease.4. Manufacturing and characterization of extracellular vesicles from umbilical cord–derived mesenchymal stromal cells for clinical testing.5. Benchtop isolation and characterization of functional exosomes by sequential filtration.6. Large-scale Isolation of Exosomes Derivedfrom NK Cells for Anti-tumor Therapy.7. Skin rejuvenation and photoaging protection using adipose-derived stem cell extracellular vesicles loaded with exogenous cargos.8. Manufacturing of Human Extracellular Vesicle-Based Therapeutics for Clinical Use.9. Size-Exclusion Chromatography-based isolation minimally alters Extracellular Vesicles’ characteristics compared to precipitating agents.10. Chromatographically isolated CD63CD81 extracellular vesicles from mesenchymal stromal cells rescue cognitive impairments after TBI.11. Heparin affinity purification of extracellular vesicles.12. A novel approach for large-scale manufacturing of small extracellular vesicles from bone marrow-derived mesenchymal stromal cells using a hollow fiber bioreactor.13. Mesenchymal Stromal Cell Exosomes Ameliorate Experimental Bronchopulmonary Dysplasia and Restore Lung Function through Macrophage Immunomodulation.

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2024.08.15

天平新品专栏 | 如何应对复杂恶劣环境下的称量?

在称量中您是否遇到这样的困扰?通风柜或层流台中的称量迟迟不能稳定,难以捕获稳定值,称量重复性差!在空间有限或者需要频繁称量的时候,1mg常规带有防风罩的天平无法摆放或操作繁杂!那么,应该采用何种措施来优化称量呢恶劣环境下的出色称量梅特勒托利多新一代高级系列天平MX在0.01mg-10mg的天平上都配置了SmartPan易巧秤盘,区别于传统秤盘,SmartPan利用秤盘的智能化几何设计,大幅减小气流扰动产生的影响,从而提高称量的重复性和稳定时间。上图为气流分别在标准秤盘和SmartPan上气流产生的力的比较,可以直观的看到SmartPan秤盘受到的空气阻力更小。关于SmartPan对稳定时间和重复性的提升,可以参考实际测试结果(1mg天平为例)•对稳定时间的影响(有风罩的标准天平VS没有风罩的SmartPan天平):结果显示在恶劣条件下(安全柜内),天平的稳定时间明显加快了63%• 对重复性的影响(有风罩的标准天平VS有风罩的SmartPan天平):结果显示在恶劣条件下(安全柜内),天平的重复性明显提高了 86%,时长00:22由此可见,SmartPan可以在恶劣环境中提供出色的称量性能,并且我们还提供1mg无风罩天平型号,为用户在特定的环境中如产线配料,通风柜空间有限的称量提供了独一无二的选择。图示:MX1203N - 12kg/0.001mg复杂环境下多称量应用需求针对不同的应用及不同的称量环境,MX系列还配有称量配置文件,可自定义可读性(1d-10d),环境状态(稳定-极不稳定)、发布速度(非常快-非常稳定)、最小称量值等信息,用户可根据自己的称量应用需求,一键调用匹配的称量配置,实现一机多用。MX系列支持3个称量配置文件并可在主页快速一键切换:而MX 0.01mg型号更是提供智能且无压力的称量,背光防风罩的柔和照明不仅可减轻眼睛疲劳,而且有助于更精确加样,避免溢出污染,为微量加样提供了更舒适的体验。

操作维护

2024.08.07

科研界的加速器:挑选合适酶标仪,让实验效率飙升!

在科研领域中,高效率和精确度是实验成功的关键。随着技术的不断进步,酶标仪作为生物学、分子生物学及相关领域中不可或缺的实验设备,其选择与应用日益受到重视。美谷分子的 20 多款酶标仪,无论是单功能还是多功能产品,都能满足科研人员对各类实验需求。本文将深入探讨如何根据实验需求挑选合适的酶标仪,以实现高效且准确的实验结果。

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2024.08.07

EAD Talk | 声音专栏:庖丁解牛,看EAD解析双键异构

Hey,大家好,我是您的质谱应用专家刘婷,20年的一线应用经验,让我深感到质谱应用信息共享的重要性。无论是质谱前沿技术,还是常用技术的深入应用,都希望在我的这个专栏中能和大家分享。“婷视角,看分析“希望拓宽您的视野,进入美妙的的质谱应用世界。请戴上耳机聆听婷声音结构解析利器/EAD 技术表征脂肪链双键位点,SCIEX,4分钟大家好,我们又见面了。上二期内容,我们介绍了甘油三脂酰基位点对于营养学和消化吸收的重要意义,以及EIEIO技术使用酰基特征碎片对脂质酰基异构体的定量应用。EIEIO技术的简便性就在于无需优化色谱分离,且方法无需特殊设定,大大提高了分析效率。本期内容,我们将介绍EIEIO技术在脂质结构解析中的另一个主要应用,双键位点解析。本期内容结构决定功能,不饱和脂肪酸的双键位点不同,其生物学意义与功能都会有较大不同。2024年1月,协和郑昕团队和中国矿业大学(北京)铁偲团队在AC上发表文章1,使用EIEIO技术对磷脂酰胆碱(PCs)分子异构体进行鉴定。文中通过结构驱动保留时间预测算法与EIEIO技术在PCs酰基脂肪链双键位点鉴定能力相结合,在大鼠肺组织样本中共计鉴定出属于35种分子组成的130种PCs异构体,并对这些异构体进行定量,发现了在尘肺造模过程中,含相同酰基脂肪酸PCs分子分布的高度相关性。图1中的左图展示了文章中使用EIEIO酰基脂肪链双键位置中特征“V”型碎片分布的特点进行双键位点鉴定;关注右图可以发现,在大鼠尘肺组织样本中,PCs的sn-2酰基链为20:4的多不饱和脂肪酸含量显著性上调。结合EIEIO技术的脂质精准解析,更方便科学家从分子水平探索疾病生理变化。点击查看大图图1. (左) 使用酰基脂肪链双键位置中特征“V”型碎片分布特点进行双键位点鉴定;(右) 大鼠尘肺样品组和对照组热图,及大部分不饱和脂肪酸显著性上调1.酰基脂肪链的双键位点,或双键氧化位点不光在生物功能上,具有重要意思;同时在食品营养上,也具有重要研究价值。2023年,检科院陈颖研究员团队发表文章2,通过CID(碰撞诱导解离)和EIEIO两种碎裂技术鉴定四种典型TG的非挥发性衍生物在油炸温度下的结构特征,提出了油炸过程中四种TG的可能氧化途径,为解释衍生物的毒性大小与结构相关性奠定了基础。文中指出,EIEIO较于传统CID碎裂模式,可以表征TG更深层次的结构, 如:sn-2位置的酰基脂肪链,及C=C双键位点。图2展示了EAD技术表征TG酰基脂肪链C=C双键位点及其烹饪氧化后的环氧化位点,利用EIEIO技术在C=C双键上特有的“V”型碎片离子分布特征,可以准确快速鉴定双键位点。图2. 文献2中使用EIEIO对TG酰基脂肪链C=C双键位点及其烹饪氧化后的环氧化位点进行表征.听了本期内容,相信您对EIEIO表征酰基脂肪链C=C双键位点的应用,有了一定的理解!到此,EIEIO技术表征脂质精细结构的内容就告一段落了。最后,我们来总结一下本期和前几期的内容:1当EAD的KE>=10eV时,进入EIEIO模式,可提供脂质精细结构表征所需的5方面信息,即头基信息,甘油骨架信息,酰基异构信息,双键位点信息和顺、反异构信息,对脂质结构进行深度表征;2从应用需求出发,EIEIO技术在解决脂质酰基异构体的定性定量、酰基脂肪链C=C双键位点表征上,具有很大应用空间;3从使用性能出发,EIEIO技术无需复杂的前处理过程,或是复杂采集过程,操作简单高效。本系列“庖丁解牛,看EAD解析脂质精细结构”,到这里就结束了。下期内容,我们将介绍EAD技术在生物药结构表征上的应用,欢迎大家的关注。SCIEX应用文集注册获取SCIEX白皮书-电子活化解离 一种全新质谱分析模式EAD (Electron activated dissociation) 电子活化解离应用案例

应用实例

2024.07.30

应用案例 | 如何应用DSC测试聚合物结晶度

应用案例如何应用DSC测试聚合物结晶度聚合物材料信息解读引言      绝大多数聚合物在其部分的大分子的取向发生变化时,容易形成结晶。与低分子量的物质不同的是,聚合物的结晶度通常远远低于100%。在聚合物中不仅存在结晶态,同时也还存在着无定形态。当聚合物达到结晶温度时,结晶的速率和程度是与样品的分子结构密切相关的。结晶度是表征聚合物材料的一个重要参数,它与聚合物许多重要性质如热性能、光学性能、力学性能等有直接关系。应用DSC技术可以十分容易的进行聚合物结晶度的测定,下面我们将详细予以介绍。01结晶度结晶:由另一种形态(通常为溶液或熔化物)形成固态晶体的过程。晶体:是由大量微观物质单位(原子、离子、分子等)按一定规则有序排列的结构。结晶度:用来表示聚合物中结晶区域所占的比例。      结晶度是结晶与非晶组分在质量分数或体积分数,是衡量聚合物有序程度及相关性能的一个重要指标,其大小取决于聚合物的分子结构、结晶条件以及热处理等因素。一般来说,结晶度高的聚合物具有更高的密度、硬度、模量和耐热性等性能,而结晶度低的聚合物则表现出更好的柔性和韧性。因此,聚合物结晶度对于材料的性能和应用具有重要影响。聚合物材料结晶度的测定可以有多种方法,其中最常用的有:(a)X射线衍射:XRD,利用X射线与聚合物晶体的衍射现象,分析晶体结构的分布情况,从而推断结晶度。(b)DSC量热法:DSC,通过测量聚合物在加热过程中的熔融热和结晶热,可以计算出结晶度。(c)核磁共振:NMR,通过观察聚合物分子链在核磁共振下的信号变化,可以了解分子链的有序程度,进而估算结晶度。(d)密度法:通过测试聚合物密度,进而推算聚合物结晶部分的密度与比容,然后计算处结晶度。02DSC法计算结晶度方法      一般来说,在较低的温度下,聚合物的链段活动不自如,易形成较小、不稳定的结晶结构,这种结晶结构具有较低的熔点。在高温下,聚合物分子的活动性增强,易形成较大和完整的结晶结构,同时结晶结构的熔点较高。因此在部分结晶聚合物的升温熔融曲线中也包含了结晶度的信息。样品的结晶部分在DSC升温曲线中对应着熔融热效应。如果我们知道一种物质100%结晶的熔融焓(△Hf100%,其含义为某物质完全结晶时的熔融热焓),我们就可以根据熔融峰的面积计算该物质的结晶度:      在计算样品结晶度的时候,就可以用实测的焓值除以理论百分比结晶焓值,从而计算出样品的结晶度。比如图1测试了PE-LD,PE-LLD和高PE-HD三种聚乙烯材料,他们的结晶度分别是:25.8%,35.3%和63.5%,这个是对于样品在升温过程中只有熔融现象的聚合物结晶度的计算方法。图1 PE由熔融焓计算结晶度03在计算结晶度时要注意以下几个问题:1.ΔHf100%的值必须知晓       ΔHf100%不可能直接从实验中得到,但可以通过X射线实验的结构数据计算得到,或者从文献中查阅获得。一般来说,△Hf100%是温度的函数。表1总结了几种典型聚合物完全结晶时的熔融热焓。表1几种典型聚合物完全结晶时的熔融热焓2.确定熔融峰积分的面积区域以确定熔融的热焓ΔHf       选择合适的基线类型;注意在测量过程中可能的结构变化,比如冷结晶。对于有冷结晶现象的样品:图2 带有冷结晶效应的PET升温曲线      图2中的PET在升温过程中出现了玻璃化转变台阶,冷结晶放热峰和熔融吸热峰。如果计算这种样品的初始结晶度,像蓝色曲线计算方式,我们是不是将熔融峰的积分焓值直接去比上PET的完全结晶焓值呢?答案是不正确的。由于这里有冷结晶现象的产生,所以我们要先将熔融焓值减去冷结晶焓值,得到的差值再除以完全结晶焓值,这样计算得到的结晶度才是该样品在升温之前的结晶度。使用STARe软件可以帮助我们进行结晶度的计算。如红色曲线所示,在计算时可以扩大积分范围,将冷结晶峰和熔融峰一起进行积分,积分得到的焓值便是已经考虑了冷结晶部分的总焓值,该值与百分之百结晶的焓值就是该样品的初始结晶度。作者:Yanru Shao编辑:Wendy审核:Zhen Liu

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2024.07.30

质谱技术,一种理想的蛋白质分析方法

Rachel Rowlinson蛋白质质谱专家,Peak Proteins蛋白质是一类应用领域广泛且非常有价值的大分子。为了获得正确折叠的、有生物活性的目标分子,在蛋白表达和纯化的过程中通常需要大量进行蛋白工程改造,结构和功能分析以及问题排查。Peak Proteins 公司能给客户提供从蛋白生产到结构表征全方位的服务,而质谱做为非常重要的平台为 Peak Proteins 客户提供高质量的蛋白产品进行全面的保障。Peak Proteins 是一家位于英国柴郡(Cheshire, UK)的高新技术公司,这家公司已经在蛋白质科学领域耕耘数十载,基于相关领域深厚的积累广泛服务于蛋白质领域的相关客户。Rachel Rowlinson 是该公司蛋白质质谱分析领域的专家,接下来,她将探讨一下在蛋白质组学和蛋白质的表征方面质谱技术是如何快速获准确、可靠的结果,如何更好地支持公司的业务。Rachel 解释道:“Peak Proteins 公司成立于五年前,公司主要关注点是将蛋白质作为工具用于支持小分子药物和生物药物的发现。我们的业务覆盖了从大规模的蛋白表达到后续的蛋白质晶体学研究和结构确认整个流程,客户在项目的所有阶段都 可以联系我们寻求帮助,从早期的分子结构设计、到蛋白表达和纯化,我们还有一个优势在于可以根据客户的具体要求对蛋白质的序列进行改造。”Rachel 所在的团队的日常工作主要是使用质谱技术进行蛋白质分子量的测定以及深度肽图分析。“我是在大约一年之前加入公司,然后在蛋白质质谱分析业务部门工作,蛋白质质谱分析技术是我们日常工作中不可或缺的。蛋白表达工作难度大而不容易掌控, 并非所有的蛋白都会正确的折叠,而蛋白的错误折叠会影响其活性,我们工作中的大部分时间都是在解决这些问题,在整个流程中质谱技术能帮助我们在关键时刻做出正确的决策。我在蛋白质分析领域已经工作了 25 年,亲眼见证了这个领域发生的翻天覆地的变化,近年来质谱技术取得了长足的进步,现在已经成为了蛋白质分析不可或缺的工具。”现在,Peak Proteins 的科学家使用质谱已经成为每天日常工作的一部分,他们选择了 SCIEX 的质谱平台主要是因为其可靠性及操作简便性。Rachel 谈到:“ 我们购买了一台 SCIEX X500B QTOF 系统用于蛋白质的分析,主要用于蛋白质分子量测定,确认蛋白质的氨基酸序列以及翻译后修饰的鉴定。这台仪器在蛋白质分析方面表现极为出色,也非常适合用于 QC 质控分析,实验人员可以在不同的工作流中(比如完整蛋白分子量测定或者肽图分析)自由切换,这些深入的分析方法能够给客户提供详尽的信息,这些信息能有助于确保我们提供的是正确的蛋白质并且这些蛋白可以满足后续的应用需求。对于外部的客户,我们也使用 X500B 系统这台仪器提供对外服务,我们相信在很多的方面都可以帮助到我们的客户,比如考察蛋白配体相互作用、抗体药物结构表征等方面,任何人有相关的蛋白质分析的需求都可以跟我们取得联系,我们也非常乐于跟客户一起探讨 X500B 系统这台质谱仪是否能满足他们的检测需求。在 X500B 系统的前端我们配置的是 SCIEX ExionLC™ 系统,平常运行的是比较简单的甲酸流动相体系。这台液质联用系统配备了两根色谱柱,C4 色谱柱用于完整蛋白的分析,C18 色谱柱用于肽图分析,对于反相色谱分析,我使用的是同一套流动相体系,因此通过一个简单的阀切换的操作就可以方便的选择分析的方法。对于我们来说购买一台 QTOF 系统是非常必要的,因为它能提供高辨率数据,这是蛋白质分析所必需的。仪器的操作流程也非常简便,当我需要运行仪器分析样品的时候,我只需要走到仪器前,选择我想要运行的方法,点击了运行按钮之后,包括质量轴校正在内的所有的工作都交由仪器自动完成。”Rachel 继续说道:“ 我们的样本分析通量取决于所接到的项目,某些时候每周我们需要运行 10 到 20 次完整蛋白分析,其它时候分析的样品数可能更多。我们通常每周运行 20 到 30 次肽图分析,而且这台仪器的分析通量可以更高。我通常的习惯是把两种分析方法同时编辑到样本队列中,样本可以过夜运行,这意味着第二天上班我就可以开始分析所有的数据,大大提高了工作效率,这套液质联用系统是蛋白质分析非常理想的工具。我之前设置过一个 36 小时的样本队列进行完整蛋白和肽图的分析,我们采集到了原始数据,最终数据结果也给常好。样本分析方法的切换也非常高效,完整蛋白质的分析只需要 5 分钟,肽图分析也可以在 10 分钟之内完成。X500B 系统是理想匹配我们实验室的空间,这台仪器结构非常紧凑,这意味着我们不再需要一间专门的实验室用于放置仪器,我们这台质谱仪就放置在我们蛋白纯化实验室的一端,这也意味着我们公司的科学家都可以使用这台仪器。只需要 20 分钟我就可以教会我的同事使用这台仪器,现在他们不需要任何指导就可以进行完整蛋白的分析。这比传统的凝胶电泳分析方法更快也更简便,能获取的信息量也更为丰富。我之前使用过不同品牌的质谱仪,而 X500B 系统是性能可靠使用简便的仪器,而且它能提供非常准确和可靠的数据,我们可以非常自信的将分析结果提供给我们的客户。”Rachel 总结道:我们使用 SCIEX 的 Bio Tool Kit 软件来进行完整蛋白分析的数据处理,我们可以快速的对原始数据进行去卷积处理进而获得蛋白质的分子量信息, Bio Tool Kit 软件的功能非常强大,是蛋白质分析不可或缺的工具。另外一个使用频率非常高的软件是BioPharmaView 软件,由于我们生产的都是具备独特序列或标签的定制化蛋白,有别于之前文献所报道的公开序列,BioPharmaView 软件在我们的数据分析中至关重要,它可以协助我们用肽图数据与定制化的序列进行比对,立刻就能告知客户样本是否存在问题, 例如,出现了我们没关注到的突变或者部分蛋白质发生降解。可靠性的 X500B 系统与 Biopharmaview 和Bio tool kit 软件的理想搭配为我们的蛋白质分析工作提供了无限可能。”“可靠性的 X500B 系统与 Biopharmaview 和 Bio tool kit 软件的理想搭配为我们的蛋白质分析工作提供了无限可能。”声明:版权为 SCIEX 所有。欢迎个人转发分享。其他任何媒体、网站如需转载或引用本网版权所有内容须获得授权, 转载时须注明「来源:SCIEX」。申请授权转载请在该文章下“写留言"。

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2024.07.29

超纯水在质谱分析中的纯净力量

实验室用水在质谱分析中扮演着重要角色。下面以除草剂西玛津分析为例 ,可以看到空白溶液用水中TOC含量较高时,背景噪声较高,影响西玛津的定性和定量检测。图1 水中西玛津LC-MS分析(空白溶液用水为高TOC含量水)将上述空白溶液用水替换为Milli-Q®超纯水(低TOC含量),并对奶粉样品中的双酚-A进行分析,可以看到背景噪音明显下降,能够清楚看到目标检测物的特征峰,峰形较好且呈现正态分布。管中窥豹,水质对于质谱分析的重要意义可见一斑。图2  奶粉中双酚-A分析(空白溶液用水为Milli-Q®水,TOC<5ppb)除此之外,水中的离子也会影响质谱分析。比如钠离子,钾离子可能会与有机物形成加和物;水中离子污染还可能在ICP-MS中形成多原离子干扰;同时其他污染物比如颗粒,细菌会给质谱等高精密分析设备带来机械性损伤,导致仪器维护成本增高,增加用户不必要的支出。

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2024.07.26

新品 | IKA 低温培养箱,科研人员的得力助手!

普通细菌适应生长温度一般为25~40°C,嗜冷菌更适宜于低温的环境,譬如李斯特菌在0-20°C的条件下生长得更为欢快。相应地,在实验过程中,我们需要提供合适的培养温度。当然,如果有一台培养箱既能覆盖普通细菌或细胞生长的常规温度,又能提供嗜冷菌更爱的低温,那绝对是一个理想的选项。你的理想选择IKA低温培养箱INC 125FC digital,-5~100°C的温控范围,全方位满足细胞、细菌、酵母、霉菌和嗜冷菌等不同培养温度的需求!强制对流的设计,确保腔体内良好的温度稳定性和均一性。压缩机制冷,快速达成设定的低温。自动去污(消毒)模式考虑到培养过程中,或会滋生的细菌,IKA低温培养箱内置了自动去污(消毒)模式,一键启动100°C,2h彻底灭菌,杜绝交叉污染。免却戴手套、擦腔体的体力消耗,这功能,真香!自动除霜另外,长时间低温的培养,是否也会同冰箱一样形成一层结霜呢?不用担心,IKA低温培养箱的自动除霜帮您除却此纷扰。定计时功能或许有小伙伴还在担心计时的问题,譬如污水BOD测试需要培养5天,10天和20天来比对溶氧的变化,怎么准确计时?IKA低温培养箱最大计时可达100天,并提供了3种计时方式,顺/倒计时,还有达到设定的培养温度如20°C才开始计时,确保基准一致,比对结果也更准确,更易重现。安全保障培养这么长时间,咱也不可能时时守在机器边上吧,万一有个错漏怎么办?别担心,IKA 的研发工程师都帮您想好了,要是实际温度超20min偏离设定温度±3°C,警报就会拉响;再来一个双重保险,如果实际温度超出安全温度,警报也会拉响的。防止误操作实验室人多,担心被其他小伙伴误操作了。来,一键锁屏和门锁都给您安排上。主打一个稳妥。培养过程中,您还有啥担忧不?欢迎@IKA 来聊聊吧。

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2024.07.23

打造未来交通!用于氢能产业的温度控制解决方案

在全球能源转型和环境保护的背景下,电动汽车和移动设备市场的快速扩张推动了锂离子电池的发展。然而,在电池的生产过程中,不可避免接触和使用化学品或有害物质,这给实验室环境的安全和环保带来了挑战。相关实验✦✦✦以下是锂离子电池制造的4个关键实验中的风险和依拉勃的防护方案:实验一正极材料磁性异物含量检测——电感耦合等离子体原子发射光谱法(GB/T 41704-2022)实验过程:包括王水清洗磁棒、称取粉末并与一定比例王水混合后进行加热等步骤。安全风险:化学品溢出和泄露风险王水的腐蚀伤害实验二首次库伦效率及首次放电比容量测定(GB/T 30835-2014)实验过程:按比例称量试样、导电剂、NMP等;搅拌成膏状并涂布;烘干......制成测试用电池;测试。安全风险:粉末飞溅的吸入风险NMP具有生殖危害实验三正负极材料粒度检验(GB/T 19077.1)实验过程:试样在水、酒精或其他介质中分散后进行测试安全风险:粉末飞溅乙醇等有机介质的易燃和挥发性实验四电池浆料指标测试(固含度、粘度、细度)实验过程:测量固含量、粘度和细度。安全风险:电池浆料中的NMP危害测试废弃物中的NMP挥发✦✦依拉勃安全防护方案✦依拉勃提供全面的防护配置,满足锂离子电池原材料及电芯生产的各个环节需求,有效应对上述实验中的各种安全风险。研发实验室 & QC 实验操作无管道净气型通风柜无管道净气型仪器防护柜研发实验室 & QC 存储无管道净气型储药柜研发实验室 & QC & 生产车间 实验空气质量监测实验室空气质量传感器

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2024.07.16

高分辨质谱技术丨赋能锂电池电解液成分表征

概述锂电池与我们生活密切相关,比如手机、ipad、电脑、充电宝、玩具、电动汽车、电动轻型车和新型储能等都有锂电池的身影,锂电池综合优势与下游领域对电池大容量、高功率、使用寿命和环境保护日益提升的需求相契合,存在广阔的市场应用前景。锂离子电池四大关键材料包括正极材料、负极材料、隔膜、电解液。锂电池的正极材料中,行业已经认可镍钴锂、磷酸铁锂等材料,不过也有许多企业逐渐转入了新型复合材料的研发中,液相色谱串联高分辨质谱仪在该研发过程中,可以在探究新型材料氧化还原反应机理研究、及活性基团位置不同对电化学性能的影响等方面贡献力量。金属锂的高化学活性使其易于与大多数电解质发生不可逆反应,从而在阳极表面形成固体电解质层(SEI)。液相色谱串联高分辨质谱仪可以对SEI膜成分进行结构解析,帮助研究其形成机制,减少其形成。电解液被誉为电池的“血液”,是实现锂离子在正负极迁移的媒介,对锂电容量、工作温度、循环效率以及安全性都有重要影响。所以对电解液体系中的特有成分的鉴定,杂质鉴定,其在不同电极作用,不同循环次数,不同放置时间,不同添加剂等等条件变化下电解液组成的变化,反应机理的研究,这对电池性能研究都具有重要作用。X500R QTOF 系统在锂电池电解液成分分析的应用研究本实验采用X500R QTOF系统的IDA+DBS采集技术对锂电池电解液成分进行快速准确鉴定,仪器标配的ESI源和APCI源可兼顾不同性质的化合物,IDA+DBS采集技术能够保证在有限的时间内采集到的有效信息,一针进样同时获得高分辨一级和二级质谱图,应用SCIEX OS软件对数据分析,为表征电解液提供解决方案。图 1 数据处理流程图流程一:SCIEX OS软件并结合SCIEX高分辨二级谱库的靶向流程SCIEX OS软件可以设定的条件,快速筛选出一级偏差准确,同位素分布合理,二级质谱图匹配得分高的结果,帮助我们快速鉴定化合物。图2  TOF MS和TOF MS/MS谱图流程二:统计学分析得到差异化合物鉴定流程对于不同品牌来源,不同放置时间,不同循环时间的电解液等样本的差异比较,可以采取组学的思路,使用SCIEX OS软件中MarkerView™统计学分析模块进行PCA,T-test等统计学分析,MarkerView™统计学分析模块和Explorer鉴定化合物模块互相链接,无需不同软件间转移,减少格式转化带来的数据丢失。可以将原始数据导入MarkerView™统计分析后得到样本间具有统计学差异的离子后,可以直接查看一级和二级质谱图,进行鉴定分析。图3  MarkerView™ 统计学界面展示流程三:非靶向流程软件可以设置空白样本,根据设定的峰面积比扣除空白样本中的离子,软件自动将不同加和离子形式和不同电荷数进行分组,增加鉴定准确度并减少重复鉴定的工作量。提取出来的离子会自动给出分子式,链接SCIEX本地数据库或者在线数据库进行检索,根据和二级质谱图匹配的情况,给出得分,同时也可以根据软件自动给出的二级偏差判断碎片归属,二级碎片可以和结构一一对应,有助于我们进行结构解析,分析合理性图4 非靶向流程中部分界面展示小结本实验采用X500R QTOF系统的IDA+DBS采集技术对锂电池电解液成分进行快速准确鉴定,分别使用ESI源和APCI源对样本进行采集,兼顾不同性质的化合物,可以更全面的表征化学成分。IDA+DBS采集技术能够保证在有限的时间内采集到的有效信息,一针进样同时获得高分辨一级和二级质谱图,应用SCIEX OS软件并结合SCIEX高分辨二级谱库的靶向流程简便且准确。对于不同品牌来源,不同放置时间,不同循环时间的电解液等样本的差异比较,可以使用统计学软件找到统计学差异的离子,进行鉴定分析。也可以采用软件自动扣除空白,自动识别离子的不同加和离子形式,电荷形式,结合SCIEX本地数据库或者在线数据库的非靶向流程,是结构鉴定和解析的有力工具,为表征电解液提供了的解决方案。 参考文献 [1]冯东,郝思语,谢于辉,等.锂离子电池电解质研究进展[J].化工新型材料,2023,51(2):35-41.[2]付文婧,汪熙媛,柯伟,等.汽车电动化的重要发展方向——锂电池技术[Z].时代汽车,2023(7):123-125.[3]Ma, Ting, et al. "Functional Polymer Materials for Advanced Lithium Metal Batteries: A Review and Perspective." Polymers 14.17 (2022): 3452.

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2024.07.16

德泉兴业|第十六届IKA代理商会

2024年7月9日,第十六届IKA代理商会如期举行,此次会议举办地位于素有“人间仙境”之称的山东省烟台市蓬莱区,北京德泉兴业商贸有限公司作为IKA在中国区的重要合作伙伴,也如约而至。一百多位经销商伙伴齐聚一堂,深入交流,气氛热烈。接下来就随小编一起来体验一下整个代理商会的盛况吧。出席此次大会的不仅有来自德国总部的副总裁Erhard Ebile先生还有IKA产品设计师Markus Schlegel先生。                             IKA副总裁Erhard Ebile先生IKA产品设计师Markus Schlegel先生德泉兴业商贸有限公司一直秉持着以客户为中心的经营理念,与IKA合作已达22年之久。在此期间,为客户提供包括售前的精心选型,以及售中的商务配合,还有售后的持续维护保养。在此次代理商会上,德泉兴业商贸有限公司也不负众望的获得了IKA中国区2023年度“最佳代理商奖”以及“最佳售后服务奖”。IKA副总裁Erhard Ebile先生为德泉兴业商贸有限公司总经理祁连军颁奖IKA中国区总经理Mr. Stalder先生为德泉兴业商贸有限公司总经理祁连军颁奖IKA本届代理商会让参会的小编以及其他与会小伙伴们充分感受到了IKA 全球及中国的品牌实力、清晰的战略定位和市场资源投入,以及对未来在中国市场共赢的信心。第十六届IKA代理商会与会代表合影IKA总部位于德国一个名叫施陶芬的小镇上,小镇主要以葡萄酒生产为主,浪漫安逸,IKA的工程师们像隐士一样,一直致力于研发生产符合人体工学,符合实验室老师的需求的产品,此次代理商会IKA也组织我们对张裕酒庄进行参观,感受了一下葡萄酒文化。最后的最后,大家和小编一起欣赏一下蓬莱的景色吧,不要忘记北京德泉兴业商贸有限公司代理IKA并且一定会为老师的实验室仪器设备进行保驾护航。关于IKA IKA是工业和科研领域全球领先的实验室仪器设备, 分析仪器设备和加工技术制造商之一。总部位于德国施陶芬, IKA的产品和技术服务于全球超过160个国家的客户。公司拥有超过900多名员工, 致力于为客户提供最好的技术, 帮助客户获得成功。同时,IKA还与全球知名大学和科学家进行着密切的合作, 支持其在科研道路上不断探索。除了位于德国的总公司, IKA现在在美国, 中国, 马来西亚, 日本, 印度, 巴西, 韩国, 越南, 英国和波兰均设有独立运营的全资子公司。

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2024.07.15

美谷分子微生物筛选系统 QPix亮相央视晚间新闻 ,助力创新中国

2024 年 7 月 9 日,中国中央电视台新闻联播 CCTV-13 《新思想引领新时代改革开放丨“创新中国”筑梦新征程》重点报道了我国一系列科技创新及促进科研创新的密集落地举措,助力中国式现代化。高通量微生物克隆筛选系统 QPix XE 作为加速科研创新的工具亮相在新闻联播中。中国式现代化要靠科技现代化做支撑,实现高质量发展要靠科技创新培育新动能。科学技术推动经济发展,科学技术的发展离不开科研团队软硬件的配套支持。国家的全社会研发经费在 2012 年的 1.03 万亿元增涨到 2023 年的 3.3 万亿元。在国家大力投入科研创新的举措之下,传统行业转型发展,新兴产业蓬勃发展,未来产业布局建设。其中,生命科学的蓬勃发展,为科研创新注入新动力。创新是科技发展的核心动力,QPix 系列作为经典的微生物克隆筛选系统,客观的成像筛选、高达 3000 克隆/小时通量的自动化挑选、可定制和整合的扩展性、多种功能集成等特性,使其不论是在生物药开发、工业菌株筛选、基因合成还是合成生物学等领域都能发挥重要的作用,促进创新加速。一睹它的风采⬇️⬇️⬇️美谷分子仪器,赞27QPix 高通量微生物克隆筛选系统在生物制造中的应用:随着基因编辑技术的发展,研究人员可以通过基因操纵,让微生物或者其他底盘细胞高效生产之前靠化学合成的产品,用生物合成代替化学合成,提高效率的同时降低污染和风险,也可以让底盘细胞高效生产自然界难以提取的物质,降低低剂量产品提取成本,还可以通过基因改造令微生物具有将有害物质转化为产品的能力等。以“DBTL”循环(Design-Build-Test-Learn)为指导的合成生物学流程,增加了对底盘细胞高通量筛选的需求。传统的微生物挑选为手工铺板、手工挑菌,在挑选的流程中遵循 5 个动作的循环过程:拿吸头、观察、挑菌落、接种至孔板、扔吸头。这种手工挑选有很多局限性:动作重复且技术含量低,挑选的准确性依赖操作人员的熟练程度;挑选速度受限;挑选的标准为肉眼判断,并且菌挑至哪个孔没有数据追溯等。高通量克隆筛选系统 QPix 可以实现克隆挑取的高效化、标准化,替代手工挑选,助力高效生物制造。QPix 400 系列微生物克隆筛选系统QPix 系统全球装机量已经超过 600 套,广泛用于世界各地的研究机构、测序服务单位、生物科技和制药公司。在人类基因组项目中,QPix 系统的稳定性和准确性获得了测序中心的赞誉。2023 年,QPix 400 系列增添新成员,新品 QPix XE 专为空间紧凑型、中高通量需求的实验室而设计。体积和通量上的更新并不影响 QPix XE 强大的功能和高质量的结果,依旧能够轻松实现高效、精准的克隆识别和挑取!基于菌落形态特征和荧光强度的克隆识别和筛选,尽早发现阳性克隆,减少下游工作量轨道运行实现高位置精度,确保准确挑取克隆多种类型挑针可选,匹配不同形态菌落,实现更高效的挑取复制、重排、抑菌圈/水解圈等多种功能可选,一机实现多种用途自动数据存储和样本跟踪功能确保数据完整性QPix 系列广泛的应用场景仍然适用 QPix XE,例如合成生物学、生物技术、生物燃料、农业、微生物组学、环境科学、食品和饮料等广泛的科研活动。同时,QPix 系列与 Molecular Devices 其他高通量产品结合,可以提供完善的高通量应用解决方案,为您的研究提供更多可能!细胞株开发解决方案合成生物学解决方案抗体药物开发-噬菌体展示解决方案结语QPix 高通量微生物克隆筛选系统以其稳定的性能、多样的功能、广泛的应用领域提高了科研人员的生产力,加速科技创新步伐,助力科技现代化。Molecular Devices 与科研人员一起,不断探索,践行创新使命。

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2024.07.11

如何科学延长超速离心机的使用寿命?

随着机器使用年限的增加,仪器各个系统存在老化的迹象从而仪器故障率会增加,保养趋之重要。何为保养?保养即对离心机的各个系统进行检查及维护,能够及时发现仪器存在的潜在问题(如橡胶件老化等),定期更换易损耗材,缓解恶劣环境(潮湿、灰尘)对离心机造成影响,保养,可以避免因这些问题导致离心事故情况的发生。每年均必须保养一次,仪器运行的准确性、稳定性和使用的安全性均得到保障,从而降低离心机损坏风险和维护成本,保证仪器能处于良好的工作状态。保养可给您带来哪些帮助 ?提高操作人员的操作技巧保证仪器的稳定性和准确度延长真空系统、驱动系统的使用寿命延长马达的使用寿命延长仪器的使用寿命降低扩散泵出故障的风险降低仪器的维护成本仪器保养清洁、除尘检查调整机器水平离心机常见故障检查门锁检查保养,检查更换密封圈重要部件检查保养( 真空管道、转头识别传感器,测速环等)检查更换真空泵油和马达驱动油检查保养离心机各个系统(供电情况、真空系统、制冷系统、马达驱动系统等)离心机运行安全性检查转头保养检查清洁外观和测速环转头螺纹涂抹润滑油检查密封圈、密封圈涂抹真空脂检查转头、运行次数和使用寿命耗材检查检查离心瓶的使用状态检查离心机适配器的使用状态检查离心机附带工具的状态淘汰破损耗材离心机服务产品介绍1.正常使用范围内的零件,不包含耗材  2.保内人为造成零部件的损坏,按原价的50%收费  3.不包括节假日或非工作时间的人工费  4.每年一次保养(含标准保养包)  5.每年一次的转子检查,不含维修(如果维修则另外收费,客户须提供转子进口的报关文件)  6.电脑系统优化整理,不包括操作系统升级  7.服务工程师一次现场操作培训  8.工作日(周一至周五,早9点-晚5点)  9.工作日(周一至周五,早9点-晚5点); 非工作时间: 在线记录,优先处理  10.应用工程师一次现场应用培训  11.合同期内一次免费移机服务(含拆机,安装和调试),不含物流及相关费用* 以上产品仅用于工业及科研,不用于临床诊断,禁忌内容或注意事项详见说明书。* 未经授权,不得对原有的文字图片等内容进行变动、重新编排或者增加新的内容,贝克曼库尔特保留在不告知前提下随时更新版本的权利。* 商标中Life Sciences为整体商标的一部分,意为 “生命科学” 。

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2024.07.08

高效自动化胶囊装填系统:专为临床试验量身定制的优化方案

确定新药物治疗是否安全有效前,必须进行严格的临床试验研究,旨在评估毒理和药理,检验药品是否有进一步开发的价值,评估人体中的安全起始剂量,递送方法和频率。 传统的胶囊填充过程都是手动的常见挑战不外乎以下几点样品通常是强效化合物,且特点未知;手动填充耗费时间长;胶囊直径小,而样品又难加;数据录入出错风险;合规性.梅特勒托利多XPR自动天平是小批量胶囊加样的理想解决方案。它具备将不同纯度API准确加样至胶囊的独特能力。尽管加样量极少,依然能够在无需助剂的前提下可靠添加质量小于1mg的样品粉末。智能加样头识别并了解粉末流动特性,帮助仪器优化加样的参数,实现加样速度和准确性的平衡。自动天平还可最大限度减少人员与加样物质的接触,从而实现对人员的保护。手动拨盘,支持一次性12个胶囊装填对于小批量的加样需求,带手动拨盘的适配支架,提供一次性12个00#-4# 胶囊的装填;若加样数量更大,带30个工位的自动进样器成了理想选择。它通过自动化进样与加样的结合,涵盖从000#-4# 胶囊的自动装填需求。 自动进样器,带30个工位的胶囊装填LabX 可实现称量过程数字化,可为每个胶囊单独定义灌装量。它提供符合 FDA 法规 21 CFR Part 11 关于数据管理与存储要求的所有必需工具,包括电子签名和审计追踪。医疗科研的道路上,梅特勒托利多自动天平不仅是一把精确的测量工具,更是科研人员的贴心助手。它代表着新质生产力,是临床研究向更高标准迈进的桥梁,让安全与精准成为每一颗胶囊不变的承诺。因为精准,所以专业!

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2024.07.04

深层次揭秘生命之谜:合成生物学与肠道微生态

随着生物技术的飞速发展,继“DNA双螺旋结构的发现”和“人类基因组计划”之后的第三次生物技术合成生物学正以工程化手段设计合成基因组,为生命科学领域带来前所未有的变革。人体微生态系统包括口腔、皮肤、泌尿和胃肠道,其中以肠道微生态系统最为主要和复杂。而肠道微生物基因组,被誉为人体的第二基因组,其与合成生物学的交融为我们揭示了生命之谜的更深层次。合成生物学在肠道微生态调控中的应用具有广阔的前景和巨大的潜力,有望为人类健康做出更大的贡献。/////益生菌设计与构建的革新在生物学的前沿,合成生物学与肠道益生菌研究的交叉融合正在迸发出无数的创新火花。合成生物学不仅为益生菌的设计和构建提供了强有力的工具,更实现了一种定制功能工程化的方法。众所周知,合成生物学技术的应用离不开工具的开发。大肠杆菌Nissle 1917(EcN)即是一种益生菌,也是一种有发展潜力的合成生物学应用的底盘细菌,研究人员通过各种方式系统地扩展了益生菌大肠杆菌EcN的基因工程工具箱,充分利用了EcN作为常用的益生菌底盘[1]。优化代谢功能与新治疗方法人体胃肠道内居住着数万亿微生物,包括细菌、真菌、古菌、原生动物和病毒,其中整个集群就是人类肠道微生物群[2]。而肠道微生物在代谢过程中产生的广泛代谢产物对人体健康有着深远的影响,对人类免疫、代谢、发育和行为等方面的功能均有影响[3]。比如越来越多的共生细菌被用作基因工程的载体,已被应用于创造新的治疗方法[4]。肠道微生态失衡调节肠道正常菌群及其所生活的环境共同构成肠道微生态,肠道菌群的稳定性如果失去平衡大概率会发生各种肠内外疾病,因此维持肠道微生态平衡对机体是否能够抵抗由肠道病原菌引起的感染至关重要。益生菌是肠道健康的代名词,乳酸菌作为其中的佼佼者,成为肠道益生菌的代表。乳酸菌是肠道常在菌,可改变肠道内环境、抑制有害菌繁殖以及调整维持胃肠道菌群的平衡,从而保证宿主正常的生理状态。随着对肠道微生物与人体健康关系的深入研究,合成生物学在调节肠道微生态失衡方面的应用展现出对代谢性疾病、消化系统疾病以及神经退行性疾病的治疗潜力[5]。机遇与挑战并存尽管合成生物学在肠道微生态调控中的应用展现出广阔的前景和巨大的潜力,但仍面临着诸多挑战,如:安全性与伦理问题,跨学科合作的需求,以及技术的成熟度等。相信随着技术的进步和研究的深入,合成生物学将在维护人类健康方面发挥出越来越重要的作用,提供更多新的治疗方法和策略。在丹纳赫,我们汇集科学、技术和运营的能力,让未来科技对今日生活的影响得以加速实现。丹纳赫生命科学可提供肠道微生态研究的丰富解决方案,助力研究者加速发现、突破创新,实现人类更健康的生活。THUNDER高分辨率组织荧光成像系统探索微生物肠道免疫机制显微观察在感染生物学中扮演着重要角色,其有助于了解受体结合、基因组释放、复制、组装和病毒出芽的基本原理及免疫应答。丹纳赫生命科学旗下徕卡显微系统的THUNDER高分辨率组织荧光成像系统凭借其高分辨、快速、大视野的特点,可很大限度回收实验中使用mRNA探针进行单分子mRNA荧光原位杂交(smFISH)发出的大量光子,减少光损耗。使用THUNDER不仅可以获得更加清晰和高分辨率的图像,而且实验结果更便于统计分析且重复性高,适合进行组织大视野快速扫描。徕卡显微系统的THUNDER高分辨率组织荧光成像系统QPix系列高通量筛选系统助力具有抗菌作用的益生菌筛选和机制研究单增李斯特菌是一种常见且最致命的食源性病原体之一,被世界卫生组织列为食品中必检病原菌[6]。尽管一些细菌素如乳酸链球菌素可以抑制单增李斯特菌的生长,但存在成本高、产量低、提取困难等问题限制了它的广泛使用。因此,我们需要筛选出具有高抑菌活性、且可在短时间内起到杀菌作用的乳酸菌,并能在肠道聚集发挥益生功能。丹纳赫生命科学旗下美谷分子仪器的QPix 400系列微生物克隆筛选系统可以提供高通量、自动化、平台化方案,用于自然菌株筛选、菌株改造后筛选、基因文库构建、基因编辑/组装、酶进化、噬菌体展示技术、合成生物学等多个应用,帮助研究人员解决关键瓶颈问题。该筛选系统能够涵盖筛选过程中的多个步骤,从成千上万个克隆中高通量、高效率、低成本地挑选出独特、优异的目的菌株[7],可以应用在医疗健康、工业化学品、生物燃料、食品饮料、消费品、农业、工程噬菌体等多个领域。美谷分子仪器的QPix460 微生物克隆筛选系统流式细胞术用于益生菌细胞的计数和分析确保益生菌产品质量的关键方法就是对终产品中所含的益生菌进行计数,使用流式细胞术进行计数耗时只要几小时,而传统平板计数法耗时则需几天。如果想要实现快速对益生菌进行计数,那么流式细胞术无疑是一种更优的选择。使用丹纳赫生命科学旗下贝克曼库尔特生命科学的CytoFLEX S流式细胞分析仪,能够对小至零点几微米的细菌进行计数,还可以提供有关活性与非活性细菌的其他信息,并且节省时间和精力,此外其新增的在线检测功能起到了优化益生菌制备过程的作用。贝克曼库尔特生命科学的CytoFLEX S流式细胞分析仪新型益生菌高通量厌氧发酵技术的应用人体肠道菌群及其健康促进作用的研究对营养产业尤为重要。因此,完全有必要对厌氧或微量需氧菌培养技术进行研究与开发,比如在类似这些微生物的生长条件下培养益生菌。丹纳赫生命科学旗下贝克曼库尔特生命科学的BioLector XT新一代高通量微型生物反应器是一款用于微生物培养高通量筛选的台式设备,可进行好氧、微氧和严格厌氧微生物的培养。在培养的过程中可进行补料和PH控制,还可在线监测常见的培养参数,如生物量、pH值、溶氧(DO)和各种荧光分子或蛋白质的荧光强度。为了实现高通量,BioLector XT在SBS/SLAS标准化微孔板(每板48个孔)上进行培养,这样即可在一台设备中同时处理多达48个样品。贝克曼库尔特生命科学的BioLector XT高通量微型生物反应器参考资料1. Ba F, Zhang Y, Ji X, etal. Expanding the toolbox of probiotic Escherichia coli Nissle 1917 for synthetic biology. Biotechnol J. 2023, 6: e23003272. Han Z, Min Y, Pang K, Wu D. Therapeutic Approach Targeting Gut Microbiome in Gastrointestinal Infectious Diseases. Int J Mol Sci. 2023, 24: 156543. Tan Y, Liang J, Lai M, Wan S, Luo X, Li F. Advances in synthetic biology toolboxes paving the way for mechanistic understanding and strain engineering of gut commensal Bacteroides spp. and Clostridium spp. Biotechnol Adv. 2023, 69: 1082724. Wang L, Cheng X, Bai L, etal. Positive Interventional Effect of Engineered Butyrate-Producing Bacteria on Metabolic Disorders and Intestinal Flora Disruption in Obese Mice. Microbiol Spectr. 2022, 10: e01147215. Guo J, Zhou B, Niu Y, etal. Engineered probiotics introduced to improve intestinal microecology for the treatment of chronic diseases: present state and perspectives. J Diabetes Metab Disord. 2023, 22: 10296. 丁建英, 韩剑众. 食品中单增李斯特菌的存在现状及检测方法研究进展, 食品研究与开发, 2008, 29: 1717. 陈坚院士团队张娟教授课题组在Science of the Total Environment发表拮抗单增李斯特菌的乳酸菌的筛选、益生特性及抑菌机制解析的研究成果,https://biotech.jiangnan.edu.cn/info/1021/12229.htm

应用实例

2024.07.04

培养类器官你还在静态进行吗?【知识分享】

随着医学科技的飞速发展,类器官已经成为医学研究领域的焦点之一。作为一种能够模拟真实器官结构和功能的模型,类器官模型的引入不仅为疾病治疗、药物筛选等提供了全新的研究平台,也在生物学、生物工程学等领域展现出巨大的应用潜力。01/Background类器官背景类器官模型的构建源于对人体器官结构和功能的深入理解以及生物工程学技术的不断进步。类器官模型可以是单一器官的模拟,如心脏、肝脏等,也可以是多种器官的组合,模拟出人体器官系统的复杂互动。通过模拟真实器官的生理和病理状态,类器官模型为医学研究提供了独特的平台,促进了疾病机制的探索和药物研发的加速。02/Challenge类器官培养的挑战传统的静态培养方式存在着尺寸不均一、缺乏动态调节能力以及限制长期培养等问题。静态培养无法确保细胞均匀获得养分和氧气,影响了细胞的代谢和生长。静态培养缺乏动态调节能力,无法模拟真实生理过程,如血液流动,限制了类器官模型在研究中的应用。此外,由于无法提供持续的养分和氧气供应,静态方式难以长期稳定地培养类器官,限制了长期诱导和毒性测试等应用场景。为确保生物学实验尤其是高通量实验的可重复性和准确性,寻找一种能够解决这些问题的新型培养技术势在必行。03/Perfusion CultureHvita 3D活细胞自动灌流培养系统类器官灌流培养技术是一种新兴的培养方法,其核心思想是通过灌流系统将培养液均匀输送到类器官的各个部位,以实现细胞生长环境的均匀性和稳定性。相较于传统的静态培养方式,灌流培养技术在解决尺寸不均一、生长环境不均匀等问题方面具有明显优势。Hvita 3D活细胞自动灌流培养系统,将灌流系统嵌合到培养舱内,实现全封闭3D细胞灌流培养,可用于类器官的培养与扩增,以更加标准化、自动化的模式为类器官建模、类器官建库、类器官药敏、再生医学等领域提供先进的解决方案。3D细胞灌流培养解决方案04/Strength&Application优势与应用显著提高类器官生长活力通过灌流培养,可以确保培养液充分覆盖所有细胞,提高类器官的生长均匀性和稳定性,有效延长类器官生长周期。助力高通量药敏药筛灌流培养使类器官模型更适合用于高通量药敏药筛,为药物研发提供更准确的评估平台,有望加速新药的开发进程。支持类器官生物样本库构建快速扩增类器官,为构建大规模的类器官生物样本库提供了便利条件,有助于更全面地研究疾病的发生机制和药物的作用机制。提供基础研究的支持更准确地模拟人体器官的生理环境,为开展更深入的基础研究和医学科学的发展提供更多可能性。图1. 在 Hvita 芯片内和传统培养板内以相等的密度接种胃癌类器官,Hvita 系统内的类器官生长质量明显高于孔板内生长的类器官。这提高了单次培养所获得的细胞总量,能够为药敏实验提供更多的测试组,可筛选的潜在治疗方案更多,可为患者提供更可靠的治疗方案。图2.在 Hvita 芯片内和传统培养板内以相等的密度接种胃癌类器官样本,Hvita灌流系统培养中的类器官尺寸更大、生长速度更快!Hvita 3D活细胞自动灌流培养系统旨在为研究人员提供一种先进的类器官培养解决方案。借助动态灌流培养技术,研究人员可以更精确地模拟人体器官的生理环境,为医学研究和药物开发提供更可靠的平台!我们相信,Hvita将成为未来类器官研究的重要工具,助力推动医学科学的进步,为人类健康带来新的希望。

应用实例

2024.07.04

高通量毛细管电泳技术,开启蛋白药物分析新纪元

随着新药研发的加速和生物类似药的不断涌现,如何在短时间内准确、高效地完成大量样品的分析,已然成为生物制药行业面临的重大挑战。SCIEX毛细管电泳产品因其优异的仪器性能和成熟完善的应用解决方案,能够全方位助力蛋白药物的快速开发。为了有效提高检测的通量,近年来SCIEX从软、硬件系统和应用方法等方面进行了全面的完善,主要内容如下:BioPhase™ 8800高通量毛细管电泳系统:开启蛋白药物高通量分析的新篇章SCIEX BioPhase 8800系统,作为高通量毛细管电泳的创新者,采用多通道设计,能够同时分析多达8个样本,显著提升分析的通量。硬件上保留了经典PA 800 Plus系统的优点,同时在仪器稳定性和操作便捷性上做了全面提升,软件具备强大的数据处理能力并符合GMP法规。是一台真正适合蛋白药物从早期高通量筛选,到方法学研究再到成品放行检测等各个阶段的高通量毛细管电泳设备。图1. BioPhase™ 8800 系统硬件上,预装的8通道毛细管卡盒长度及规格与经典的PA 800 Plus系统的一致,因此,样品分离结果与经典的PA 800 Plus高度一致。卡盒保留毛细管液冷温控技术,确保大样本长时间连续运行时结果重复性好。8根毛细管之间结果高度一致,可满足在多根毛细管上同时进行高通量筛选和方法学研究,加速药物上市。图2. IgG Standard还原CE-SDS实验在PA 800 Plus6针重复性和在BioPhase 8800 系统单通道6针重复性图谱比较图3. 8根毛细管之间重复性结果。上图,CE-SDS结果;下图,CIEF结果。软件上,BioPhase软件操作简便,采用拖拽式方法编辑,可见即可得,最大化降低操作门槛,数据处理软件功能强大,自动参数优化、批处理数据和批量生成报告,极大地提高数据分析的速度。应用上,BioPhase 8800系统保持与PA 800 Plus一致的多应用检测模式。蛋白纯度分析(CE-SDS)、等电点及电荷异质性分析(cIEF)、糖型分析等应用上与经典的PA 800 Plus方法一致,结果一致,方便方法转移。PA 800 Plus蛋白药物分析系统:高速分离模式和快速冲洗方案助力蛋白药物快速分析SCIEX PA 800 Plus药物分析系统是业界广泛认可的蛋白药物表征仪器,在蛋白药物分析领域具有显著的影响力。自2015年起,以PA 800 Plus药物分析系统为主要参考标准的单克隆抗体纯度、等电点及电荷异构体、糖基分析等方法已被纳入《中国药典》。PA 800 Plus具有优异的软硬件设计,仪器参数设置灵活,可以通过多种方式实现蛋白药物的快速分析,从而有效提高生物制药企业的工作效率,全面助力生物制品的快速研发。图4. PA 800 Plus蛋白药物分析系统高速模式(High Speed,HS)PA 800 PLUS独特的卡盒设计使得用户可以根据样品特点灵活优化毛细管长度。当通过在卡盒近检测器端进样时,可实现快速分析模式(HS)。此时,毛细管有效分离长度由20cm降低到10 cm,样品在毛细管内迁移的距离缩短,从而加快了整个分析的过程。图5. HR模式和HS模式下IgG standard电泳图快速冲洗快速冲洗方法是SCIEX对传统CE-SDS冲洗方法进行的方法优化,通过缩短毛细管冲洗步骤的时间,将传统的针间冲洗时间由15 min大幅缩短至3 min,每针节省12 min,极大地提升了分析效率。传统的冲洗步骤用较长的冲洗时间保证毛细管内部的清洁和性能的一致性,而PA 800 Plus自带的压力系统可以提供高达100 psi的冲洗压力,能保证在短时间内完成同样有效的清洗效果,且减少了针间冲洗的等待时间,使得系统能够在相同的时间处理更多样本,从而提高整体的分析通量。结果证明,优化后的冲洗程序分离结果及重复性与传统冲洗方法无差异,8针重复性结果良好,非还原主峰、还原轻链及重链峰的迁移时间、校准峰面积百分比的RSD值均小于1%(见图6)。图6. CE-SDS快速冲洗方法对IgG还原、非还原样品的分析。A. IgG-R样品分析图谱, B. IgG-NR样品分析图谱, C. IgG-R重复性考察图谱( n=8),D. IgG-NR重复性考察图谱( n=8)总的来说,HS模式叠加快速冲洗方法能将CE-SDS蛋白纯度分析时间缩短至原来的一半以下,仅需15.5min/20.5min即可完成CE-SDS还原(CE-SDS-R)/非还原(CE-SDS-NR)的冲洗加分离,极大提高在PA 800 Plus上的检测通量。图7. IgG standard标准品在不同方式下还原(CE-SDS-R)和非还原(CE-SDS-NR)检测时间对比图结语在当今生物制药行业的快速发展中,蛋白药物的分析和研发面临着前所未有的挑战。SCIEX毛细管电泳技术以其优异的性能和创新的解决方案,为行业的变革和发展带来了巨大的推动力。通过BioPhase 8800高通量系统和PA 800 Plus药物分析系统等多款型号的毛细管电泳系统,SCIEX不仅大幅提升了蛋白药物分析的通量,确保了结果的一致性和重复性,还显著缩短了分析时间,提高了工作效率。这些创新技术的应用,不仅加速了药物的研发进程,也为生物制药企业在激烈的市场竞争中赢得了宝贵的时间和优势。选择SCIEX,就是选择了一个能够提供快速、高效、精准分析解决方案的可靠伙伴,共同开创生物制药行业的新篇章。让我们携手SCIEX,共创高效、精准的蛋白药物分析时代,助力生物制药行业的持续创新与发展。声明:版权为 SCIEX 所有。欢迎个人转发分享。其他任何媒体、网站如需转载或引用本网版权所有内容须获得授权, 转载时须注明「来源:SCIEX」。申请授权转载请在该文章下“写留言”。

参数原理

2024.07.02

默克Milli-Q® SQ 2系列重磅新品正式发布 ——重新定义您的水纯化系统

为什么我新买的产品要苦苦等待专业人员来安装?为什么我不能在任意的地点随时取到超纯水?为什么我要花有限的科研时间看长长的操作手册?为什么我的仪器总有做不完的维护?现在,就让Milli-Q® SQ 2系列来帮助您。这款稳健而坚固的水纯化系统,以自来水为进水,可生产制备RO纯水和超纯水,将赋能您的日常科研工作。Milli-Q® SQ 2系列产品可为您带来:经验证的“自助安装”理念30分钟完成自助安装:附带图解的安装手册和在线教学视频(扫描手册上的二维码)为您提供安装指导。醒目的颜色编码:产品包装、手册、纯化柱和纯水系统上均采用颜色编码,便于用户在每个水纯化步骤直观地进行安装和维护。模块化的产品设计,并支持超纯水系统的无限扩展您可在任何实验室工作台随心所欲地获取新鲜、精制的超纯水——即使是无自来水水源的工作台。全新Milli-Q® SQ 2系列水纯化系统使用方便、设计新颖并支持扩展,让您心无旁骛地投身科研工作。坚固耐久的系统,值得您的信赖从选材、开发到验证和生产,Milli-Q® SQ 2系列的每个零件、组件以及整套系统均已通过全面的测试,确保其优异的生命周期。机器人耐久性测试模拟长达7年的使用情况:Switch 水箱提取、安装手持取水臂重复取水结合摄像头自动指引和AI人工智能技术辅助生产极致简约的使用与维护体验任何用户都能体验操作带来的简单、直观。符合人体工学原理的取水手臂,可顺畅调节取水速率从1.6 L/min至逐滴取水;移动式透明Switch水箱,提水方便安全,液位状态快速呈现;通用界面,基本信息一目了然;支持您的可持续发展目标能源和排放:能耗更少,得益于产品设计,电子元件的简化以及待机模式的优化,用电量大幅降低。水:RO回收回路减少了 60% 的自来水消耗。材料:有限的材料需求,采用模块化的设计,只需复制超纯水分配系统即可配置多个取水点。循环经济:产品易于维护和拆卸,最大限度地延长使用寿命,方便报废管理。包装:采用100%再生纸板,符合森林可持续认证。

新品

2024.06.25

预制菜解决方案,为“舌尖上的安全”保驾护航!

背景2024年3月21日,市场监管总局联合教育部、工业和信息化部、农业农村部、商务部、国家卫生健康委等六部委印发《关于加强预制菜食品安全监管促进产业高质量发展的通知》,首次明确预制菜范围,对预制菜原辅料、预加工工艺等进行界定。磐诺LC-MS/MS 五大预制菜解决方案1 防腐剂 预制菜中的防腐剂添加广受关注,对羟基苯甲酸酯类防腐剂因其抗菌作用好、稳定性强而被广泛应用。《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》(GB 2760-2014)规定了十余种食品中对羟基苯甲酸酯的最大使用量,磐诺与国家食品安全风险评估中心应用合作,建立起食品中4种常见防腐剂的LC-MS/MS检测方案,为预制菜中防腐剂的检测工作提供保障。基质样本中对羟基苯甲酸酯定量限及线性检测结果2 真菌毒素 预制菜中真菌毒素污染问题也备受关注,大多数真菌毒素都具有致癌性,严重威胁人类健康。我国制定了食品中真菌毒素的相关法规,用来监测食品中的真菌毒素的含量以保护消费者的健康。参考现行标准GB 2761-2017《食品安全国家标准 食品中真菌毒素限量》(GB 2761-2017),磐诺与国家食品安全风险评估中心应用合作推出19种真菌毒素的检测方案。真菌毒素提取离子色谱图3 兽药残留 兽药残留是动物性食品安全中最常见的化学性污染物。中国农业大学的吴聪明教授团队作为“四极杆-线形离子阱液相色谱质谱联用仪研制与产业化”项目的参与者,参照国家标准方法 《动物源产品中喹诺酮类残留量的测定-串联质谱法液相色谱》(GB/T 20366-2006)和《动物源食品中磺胺类药物残留量的测定-质谱/质谱法》(GB/T 21316-2007),基于QLIT-6610液质联用系统建立了9种喹诺酮类药物及11种磺胺类药物检测的应用示范方法。喹诺酮类药物离子提取色谱图磺胺类药物离子提取色谱图4 农药残留 农药残留是植物源食品中主要的质量安全问题之一,农残超标现象时有发生。《食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量》(GB 2763-2021)是目前我国统一规定食品中农药最大残留限量的强制性国家标准。磐诺基于QLIT-6610液质联用系统开发了除草剂的检测方案。5种除草剂的离子提取色谱图5 包装材料 预制菜的运输和储备过程中必然使用到包装材料。包装材料中塑化剂、抗氧化剂可能迁移到预制的菜品当中,对身体的健康产生危害。磐诺基于QLIT-6610液质联用系统建立的全氟化合物的检测方案可为预制菜中食品包装材料检测提供保障。食品接触材料中的全氟化合物提取离子色谱图和线性测试结果  磐诺LC-MS/MS 仪器配置  四极杆-线形离子阱串联质谱系统磐诺创新型四极杆-线形离子阱串联质谱系统(QLIT-6610)的技术突破,基于与中国计量科学研究院的紧密合作,既解决了离子阱高准确定量动态范围难题,又实现了复杂基质中痕量物质的准确定量,可为客户提供全方面的预制菜检测方案,为预制菜食品安全提供坚实保障。QLIT-6610采用独有的四极杆串联线形离子阱技术,兼具两种质量分析器的优点,可提供可靠性强、重现性好、分析性能高的定性定量分析结果。配套液相色谱仪采用独特风道系统和微步驱动器控制静止角度的特有技术,同时拥有高精度、高灵敏、低噪声、低漂移的性能表现。QLIT-6610系统可提供食品检测的专业分析解决方案,为“舌尖上的安全”保驾护航!

应用实例

2024.05.09

非接触式超声波破碎仪Bioruptor使用手册

Bioruptor Pico 使用手册一、仪器组成 超声波主机冷却循环器电磁阀电源线适配器(举例

操作维护

2024.04.29

酶标仪维护注意事项

酶标仪维护注意事项电源连接1. 请使用仪器自带的电源线,并与有地线及适合功率的电源相连接,不合适的电源连接会导致短路或火灾。 2. 进行仪器外部清理时请务必关闭电源,以免触电。避免将液体泼溅到仪器上,液体的渗漏会造成仪器短路,如果有液体泼溅请立即清理。 3. 在进行有些具有潜在生物毒性的实验时,请注意个人防护,佩戴护目镜和手套并更换防护服。仪器 1. 卤素灯在工作时会产生热量,在更换卤素灯时请关闭电源,待灯泡冷却后再进行更换。如果仪器中配有卤素灯,检测结束后尽快关闭光源,节省灯泡的使用寿命。2. 请按照说明书提示的安全模式进行仪器操作,以免造成人为损坏。 3. 配有分液装置的仪器,运行时请勿将手指靠近以免夹伤。 4. 自动分液器使用前后,务必使用废液板进行管路清洗和废液承接,请妥善保管废液板。5. 冬季避免在过低室温下运行仪器,室温低于10 ℃,仪器开机会报警,请升高室温后再开机。6. 请勿将仪器置于高温环境,适宜的外部环境温度保持在18-40℃,超过该温度范围,可能会造成测量数据的不准确。 7. 请勿将仪器置于过度潮湿的环境,防止电器元件产生短路。8. 请勿使用易产静电的材料覆盖仪器,防止影响仪器的电路系统正常工作。9. 请勿擅自改动仪器的硬件与软件维护设置,避免仪器无法正常运转,如有相关需求请先联系厂家技术人员。 10. 检测样品如有强腐蚀性,请谨慎操作,防止泄漏损毁仪器电器元件。11. 在使用次氯酸钠稀释液进行仪器清洁时,不要使溶液和仪器接触时间超过20分钟,否则会腐蚀仪器表面,同时清洁后要用清水进行彻底擦拭表面,去除残留的次氯酸钠。12. 按照软件说明书正确操作软件,以免造成数据的无法检测或丢失。 13. 仪器使用人员须经BioTek公司授权,只有公司指定技术人员才能进行相关的问题解答和内部配件的维修更换。 14. 在进行仪器安装时,请按照说明书上的提示,将各部分的固定装置拆除,然后才能进行仪器的调试运行。 15. 对仪器的报废元件,请按照相关规定进行处理。

操作维护

2024.04.29

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紫外、紫外分光光度计、紫外可见分光光度计、UV 纯水器、超纯水器、纯水机、超纯水机 搅拌器、磁力搅拌器、电动搅拌器 天平 移液器、移液枪 粘度计 流变仪 流式细胞仪 pH计、酸度计 干燥箱 超低温冰箱 旋转蒸发仪 真空泵 研磨机、研磨仪、粉碎机、球磨机 制备液相色谱 分子互作分析仪 蛋白质纯化仪 蛋白印迹仪 荧光显微镜 生物显微镜 超高分辨率显微镜 高通量微生物筛选系统 离心机、实验室离心机 微波萃取设备 洗板机 酶标仪/微孔板读板机 细胞计数器/细胞计数仪 高内涵细胞成像分析系统 细胞分离/提取仪 流式/细胞样本前处理 分散机、乳化机 均质器 涡旋振荡器/旋涡混合器 匀浆机 干燥箱 马弗炉、电阻炉、实验炉 喷雾干燥机 水浴、油浴、恒温槽 金属浴/恒温金属浴/干式恒温器 快速干燥仪 水浴锅、恒温水浴锅 研磨机、研磨仪、粉碎机、球磨机 组织研磨仪 反应器 微波合成仪 化学合成仪 冻干机、冷冻干燥机 冷水机、冷却循环水机 制冰机、雪花制冰机 层析冷柜 低温恒温器 防爆冰箱 蠕动泵 PCR 分子杂交仪 电泳仪及配套设备 凝胶成像系统 菌落计数仪 微流控芯片 摇床、振荡器、混匀器 发酵罐 生物安全柜 细胞反应器 细胞破碎仪 温控设备 植物/光照培养箱 恒温恒湿培养箱 厌氧培养箱 低温培养箱 振荡培养箱 电热恒温培养箱 超低温冰箱 冷藏柜/冷藏箱 生物液氮罐 低温冰箱 电穿孔仪 细胞融合仪 多肽合成仪 土壤碳通量测定系统 动物呼吸机 动物麻醉机 动物血压测定仪 其它动物实验仪器 动物监护仪 动物行为学研究仪器 其它称量设备 粘度计 流变仪/粘度计部件及外设 金相显微镜 激光共聚焦显微镜 立体显微镜、体视显微镜 偏光显微镜 光度仪、雾度仪、光泽度仪 糖度仪 紫外成像仪 毛细管电泳(CE) 卡氏水分测定仪/卡氏水份测定仪 自动进样器(多功能) 电化学发光检测仪 pH计、酸度计 电解水分测定仪 电化学工作站、恒电位仪 库仑仪 酸碱浓度计

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