螺内酯的有关物质和含量测定 参考《中国药典》

按照《中国药典》（2020版），使用CAPCELL PAK C8 DD和C8 UG120色谱柱进行有关物质的分析，使用CAPCELL PAK C18 MGII色谱柱进行含量测定的分析，具体实验结果如下：

1. 有关物质

药典中螺内酯有关物质项下分析方法，要求使用C8色谱柱，以乙腈 / 四氢呋喃 / 水 = 8 / 18 / 74为流动相，流速1.8 mL / min。系统适用性要求：系统适用性溶液色谱图中（254 nm），螺内酯峰与坎利酮峰之间的分离度应大于1.4，对照溶液（2）色谱图中（254 nm）主峰的信噪比应大于6。

螺内酯 (M.W. 416.57)

Spironolactone

坎利酮 (M.W. 340.46)

Canrenone

分别使用两款CP C8色谱柱对系统适用性溶液和对照溶液（2）进行了分析。需要注意的是，由于流速为1.8 mL / min，使用250 mm柱长的色谱柱时压力较高，所以我们选择使用150 mm柱长的色谱柱进行分析。

1.1 CAPCELL PAK C8 DD 色谱柱分析结果

系统适用性溶液和对照溶液（2）的分析结果见图1、2和表1、2。系统适用性溶液分析中，螺内酯峰与坎利酮峰之间的分离度为2.857，能够满足药典中分离度大于1.4的要求；对照溶液（2）分析中，主峰的信噪比为18.90，满足药典中大于6的要求。

图1  系统适用性溶液分析结果（C8 DD）

表1  各峰积分结果表

图2  对照溶液（2）分析结果（C8 DD）

表2  各峰积分结果表

色谱条件：

色谱柱：CAPCELL PAK C8 DD S5; 4.6×150

流动相：乙腈 / 四氢呋喃 / 水 = 8 / 18 / 74

流动速：1.8 mL / min

温动度：35 °C

检动测：PDA 254 nm

浓动度： 

系统适用性溶液：螺内酯和坎利酮均为25 μg / mL

对照溶液（2）：1.25 μg / mL（少量四氢呋喃溶解后，流动相稀释）

进样量：20 µL

1.2 CAPCELL PAK C8 UG120 色谱柱分析结果

系统适用性溶液和对照溶液（2）的分析结果见图3、4和表3、4。系统适用性溶液分析中，螺内酯峰与坎利酮峰之间的分离度为1.681，能够满足药典中分离度大于1.4的要求；对照溶液（2）分析中，主峰的信噪比为20.07，满足药典中大于6的要求。

图3  系统适用性溶液分析结果（C8 UG120）

表3  各峰积分结果表

图4  对照溶液（2）分析结果（C8 UG120）

表4  各峰积分结果表

色谱条件：

色谱柱：CAPCELL PAK C8 UG120 S5; 4.6×150

流动相：乙腈 / 四氢呋喃 / 水 = 8 / 18 / 74

流动速：1.8 mL / min

温动度：35 °C

检动测：PDA 254 nm

浓动度： 

系统适用性溶液：螺内酯和坎利酮均为25 μg / mL

对照溶液（2）：1.25 μg / mL（少量四氢呋喃溶解后，流动相稀释）

进样量：20 µL

2. 含量测定

药典中螺内酯含量测定项下分析方法，要求使用C18色谱柱，以乙腈 / 水 = 50 / 50为流动相。系统适用性要求：理论板数按螺内酯峰计算不低于3000，螺内酯峰与相邻杂质峰之间的分离度应符合要求。

使用CAPCELL PAK C18 MGII色谱柱对对照品溶液进行了分析，结果见图5、6和表5。螺内酯峰理论板数为19743，满足药典中不低于3000的要求；螺内酯峰与其后杂质峰之间的分离度为4.664，满足药典要求。

图5  对照品溶液分析结果（C18 MGII）

图6  图5局部放大图

表5  各峰积分结果表

HPLC Conditions ：

色谱柱： CAPCELL PAK C18 MGII S5; 4.6×250

流动相：乙腈 / 水 = 50 / 50

流动速：1.0 mL / min

温动度：35 °C

检动测：PDA 238 nm

浓动度：对照品溶液：25 μg / mL（溶剂为流动相）

进样量：20 µL

结     论

综上所述，按照《中国药典》（2020版）中螺内酯有关物质项下分析方法，使用CAPCELL PAK C8 DD和C8 UG120色谱柱，均可以得到满足药典要求的分析结果。

按照《中国药典》（2020版）中螺内酯含量测定项下分析方法，使用CAPCELL PAK C18 MGII色谱柱，也可以得到满足药典要求的分析结果。

2020年版《中华人民共和国药典》

螺内酯有关物质分析推荐用柱

F90984 CP C8 DD S5; 4.6×150

F71503 CP C8 UG120 S5; 4.6×150

螺内酯含量测定推荐用柱

F92533 CP C18 MGII S5; 4.6×250