辣椒酱中苏丹红检测的前处理优化方案（改进GB/T19681-2005方法）

鲜香红辣的辣椒油、辣椒酱，可是非法食品添加剂“苏丹红”的重灾区哦！“苏丹红”是一种化学染色剂，它的成份中含有一种叫萘的化合物，该物质具有偶氮结构，由于这种化学结构的性质决定了它具有致癌性。

“辣椒油、辣椒酱等调料中苏丹红的检测”国标中，样品前处理采用中性氧化铝小柱，该小柱容易吸潮影响活度，从而导致净化效果不理想，重现性不好等问题。

月旭科技以客户的痛点为出发点，专门开发了适合检测苏丹红的前处理小柱----SDH苏丹红专用柱，该专用小柱快速、高效、重现性好、净化步骤简便。

下面看看实验过程及效果：

1、适用范围
适用于辣椒油、辣椒酱等调料中苏丹红的检测。

2、苏丹红标准溶液的配置

分别称取苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ和苏丹红Ⅳ各1.0 mg，用3 mL乙醚溶解后用丙酮定容至10 mL，所得苏丹红标准品母液的浓度为100 μg/mL。然后将母液用丙酮稀释至10 μg/mL。（此处如果采用国标方法用正己烷定容，进色谱分析会导致苏丹红色谱峰型不够理想，因为后续的液相方法是反相色谱法，流动相含有水，因而与正己烷不互容造成色谱峰型不理想）。

3、提取步骤

3.1辣椒酱

将0.500 g样品置于15 mL 离心管，加入4 mL正己烷，涡旋混合1 min，充分混匀，待净化。

3.2 辣椒粉

将0.500 g样品置于50 mL 离心管，加入5 mL正己烷，涡旋混合1 min，超声5 min，3000 r/min离心5 min，取上清液。重复上述提取步骤四次，将得到的上清液氮吹浓缩至约4 mL，待上样净化。

4、SPE净化步骤
SPE柱：月旭Welchrom^® SDH苏丹红专用柱，规格：500 mg/6mL。

a)活化：加入5 mL正己烷活化Welchrom^® SDH苏丹红专用柱，流出液弃去，注意不要让小柱溶剂流干。

b)上样：将提取液加入Welchrom^® SDH苏丹红专用柱中，并用1mL正己烷润洗离心管一并加入小柱，流出液弃去，注意不要让小柱溶剂流干。

c)淋洗：用3 mL正己烷淋洗小柱，弃去淋洗液，并抽干小柱。

d)洗脱：用5 mL乙酸乙酯洗脱小柱，收集洗脱液，并将小柱抽干，合并收集洗脱液。

e)浓缩：将收集的洗脱液在40度加热条件下氮吹至近干，大概剩下半滴液体左右，然后用乙腈复溶并定容到1 mL，此时溶液呈均一相，没有油脂出现。并过0.22 μm PTFE滤膜，上高效液相色谱仪检测。 

5、注意事项

（1）如果采用国标方法用正己烷定容，进色谱分析会导致苏丹红色谱峰型不够理想，因为检测四种苏丹红的液相方法是反相色谱法，流动相含有水，因而与正己烷不互容。

（2）加标过程：取5 μL、10μL和50 μL的10 μg/mL标样，25 μL 100 μg/mL的标样加入到0.5 g样品中，加标浓度即为0.1 mg/kg 、0.2 mg/kg、1.0 mg/kg和5.0 mg/kg。

（3）在过SPE小柱的过程中，“活化”和“上样”这两个步骤要注意不要使得小柱干涸，这样会影响小柱的回收率。而在“淋洗”和“洗脱”这两个步骤要注意抽干小柱，以便尽可能多的去除杂质和得到目标物。

（4）洗脱液在氮吹浓缩的过程中，注意不要将洗脱液完全吹干。因为这样有可能会影响回收率。

6、色谱条件

色谱柱：月旭Ultimate^®XB-C18（4.6 x 150 mm, 5 μm）
流动相：乙腈/水 = 95/5（混成一相）

流速：1.0 mL/min
进样量：20 μL
柱温：30 oC
检测波长：500 nm

7、色谱图或者加标回收率结果

图1：乙腈溶剂色谱图

图2：实际辣椒酱样品色谱图

图3：苏丹红Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ标准品色谱图（苏丹红Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ标样浓度均为: 0.1 μg/mL）

图4：实际辣椒酱样品加标色谱图（苏丹红Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ加标浓度为: 0.2 mg/kg）

图5：苏丹红Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ标准品色谱图（苏丹红Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ标样浓度为: 0.5 μg/mL）

图6：实际辣椒酱样品加标色谱图苏丹红Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ标准品色谱图（苏丹红Ⅰ,Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ加标浓度为: 1.0 mg/kg）

图7：苏丹红Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ标准品色谱图（苏丹红Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ标样浓度为: 2.5 μg/mL）

图8：实际辣椒酱样品加标色谱图苏丹红Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ标准品色谱图（苏丹红Ⅰ,Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ加标浓度为: 5.0 mg/kg）

表1：加标回收率测定结果 

8、结论

使用月旭Welchrom^® SDH苏丹红专用柱可以快速、高效检测辣椒油、辣椒酱、辣椒粉等调味品中的四种苏丹红，方法的灵敏度高，重现性好，克服了GB/T19681-2005方法存在的前处理方法繁琐，不稳定、重现性不理想等众多问题。

9、相关产品信息