甜味剂之王“三氯蔗糖”的测定（GB 22255-2014）

新的甜味剂之王“三氯蔗糖”已被广泛应用于可乐、糕点、酱油、发酵酒、酸奶等常见大众喜爱的食品，是近年来的检测热点。

三氯蔗糖是唯一以蔗糖为原料的功能性甜味剂，甜度可达蔗糖600倍。这种甜味剂具有无能量，甜度高，甜味纯正，高度安全等特点。是目前最优秀的功能性甜味剂之一。因此，它将取代阿斯巴甜，成为新的甜味剂之王，是肥胖症、心血管病和糖尿病患者理想的食品添加剂，在食品和医药中的应用不断扩大。

下面看看月旭产品参照国标方法检测三氯蔗糖的表现：

1、 适用范围

食品中（含蛋白脂肪试样，酱及酱制品、醋、酱油，含酒精的试样，饮料，风味发酵乳、奶茶）三氯蔗糖的测定方法。（本实验选用酱油、可乐和酸奶）

2、提取步骤

（1）酱油

称取2g均匀试样，置于50mL离心管中，加入1.0g中性氧化铝，加入3mL水，振荡3min振荡3min后加入15mL甲醇，振荡30s，超声20min，离心（3000r/min）10min，转移上清液至50mL离心管中，沉淀物中加入5.0mL甲醇水75%，振荡30s，离心（3000r/min）10min，取上清液，重复提取沉淀物2次，上清液合并于150mL分液漏斗中。

在分液漏斗中加入30mL正己烷，振摇2min，静置20min，下层水相移置50mL蒸发皿。蒸发皿沸水浴上蒸发，蒸干至1mL左右，用9mL水分三次冲洗蒸发皿，将冲洗液合并至15mL离心管中，超声5min，离心（3000r/min）10min。待净化。

（2）可乐

称取均匀试样5g，置于15mL离心管中，加入5mL水，振荡30s，离心（3000r/min）10min，待净化。

（3）酸奶

称取均匀试样5g置于50mL离心管中，加入5mL水，涡旋3min，加入15mL甲醇、0.50mL乙酸锌溶液、0.50mL亚铁氰化钾溶液，振荡30s，超声20min，离心（3000r/min）10min，转移上清液至50mL离心管中，沉淀物中加入5.0mL甲醇水75%，振荡30s，离心（3000r/min）10min，取上清液，重复提取沉淀物2次，上清液合并于150ml分液漏斗中。

在分液漏斗中加入30mL正己烷，振摇2min，静置20min，下层水相移置50mL蒸发皿。蒸发皿沸水浴上蒸发，蒸干至1mL左右，用9mL水分三次冲洗蒸发皿，将冲洗液合并至15mL离心管中，超声5min，离心（3000r/min）10min。待净化。

3、SPE净化步骤

SPE柱：BRP 200mg/6mL

活化：4mL甲醇，4mL 水

上样：待净化液

淋洗：1mL水（上样液在柱上液面还剩2mm时加入，弃去），抽干

洗脱：3mL甲醇（收集），抽干

浓缩：将洗脱液置于50mL蒸发皿内，沸水浴上蒸干，用乙腈水溶液（11+89）溶解，并定容到1mL，过0.22μm滤膜，滤液待上机检测。

4、注意事项

加标过程：精确移取0.5mL 2mg/mL标样，加入到5g可乐样品中，加标浓度即为200mg/kg。

精确移取0.5mL 2mg/mL标样，加入到2g酱油样品中，加标浓度即为500mg/kg。

精确移取1mL 2mg/mL标样，加入到5g酸奶样品中，加标浓度即为400mg/kg。

5、仪器参考条件

色谱柱：月旭Ultimate® XB-C18  4.6×150mm, 5μm

流动相：水+乙腈=89+11

流速：1.0mL/min

柱温：35℃

进样量：20.0μL

示差检测器条件：温度35℃

6、色谱图及加标回收结果

图1、三氯蔗糖对照品1mg/mL

图2、酸奶样品加标400mg/kg

图3、可乐样品加标200mg/kg

图4、酱油样品加标500mg/kg

表1、加标回收率表