GPC的应用之植物油中9种抗氧化剂的测定分享

在对各类食品、农产品、水产品和中药材中的农残、半挥发性有机物分析时，样品中一般会含有大分子物质（如色素、油脂等），如果不去除这些物质，会影响最终的分析结果及色谱柱的使用寿命。

针对此问题，在农残、半挥发性有机物的样品分析前，必须进行有效的净化前处理。如果实验室中有GPC那就事半功倍了。接下来我们不妨了解一下GPC在液相中的应用。

一种含有不同分子的样品溶液缓慢地流经凝胶色谱柱时，各分子在柱内同时进行着两种不同的运动：垂直向下运动和无定向的扩散运动。

大分子物质由于直径较大，不易进入凝胶颗粒的微孔，而只能分布颗粒之间，所以在洗脱时向下移动的速度较快。

小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外，还可以进入凝胶颗粒的微孔中，即进入凝胶相内，在向下移动的过程中，从一个凝胶内扩散到颗粒间隙后再进入另一凝胶颗粒，如此不断地进入和扩散，小分子物质的下移速度落后于大分子物质，从而使样品中分子大的先流出色谱柱，中等分子的后流出，分子最小的最后流出。

样品洗脱图

● 净化样品，去除样品中的大分子基质或者小分子干扰物质，净化后适合采用GC，HPLC，GCMS等仪器的分析，例如食用油中抗氧化剂、多环芳烃等的测试，须通过凝胶净化前处理方式去除油脂等干扰物，将待分析物和干扰物分离开。

● 保护分析仪器及色谱柱，防止大分子物质堵塞后续分析用色谱柱及仪器。

植物油中9种抗氧化剂的测定（凝胶渗透色谱法）。

食品中PG、THBP、TBHQ、NDGA、BHA、Ionox-100、OG、DG和BHT等九种抗氧化剂的测定。

参考标准：《GB 5009.32-2016 食品安全国家标准 食品中9种抗氧化剂的测定》。

油脂样品经有机溶剂溶解后，使用凝胶渗透色谱（GPC）净化。

分别称取没食子酸丙酯（PG)，叔丁基对苯二酚（TBHQ)，去甲二氢愈木创酸（NDGA)，叔丁基对羧基茴香醚（BHA），2, 6-二叔丁基－4-羧甲ji苯酚（lonox-100)，没食子酸辛酯（OG)，2, 6-二叔丁基对甲ji苯酚（BHT)，没食子酸十二酯（DG)10mg，用乙腈溶解并定容到10mL，得1000μg/mL的单标。

称取2, 4, 5-三羧基苯丁酮（THBP)1mg，用乙腈溶解并定容到10mL,得单标100μg/mL。

流动相配制：1L环己烷和1L乙酸乙酯等比例混匀。

精确称取取1g油样于10mL容量瓶中，以流动相定容至刻度，待净化。

加标过程：精确称取取1g油样于10mL容量瓶中，精确加入0.2mL100μg/mL9种抗氧化剂混标，以流动相定容至刻度，得加标量为20mg/kg，上机浓度为5μg/mL。

仪器型号：月旭科技GPC1600凝胶色谱仪。

色谱柱型号：月旭Bio-Beads S-X3凝胶色谱柱，400mm×25mm；

流动相：乙酸乙酯-环己烷（1:1）；

流速：5.0mL/min；

进样量：5.0mL；

收集时间：14-25min；

波长：254nm。

色谱柱：月旭Ultimate^® XB-C18，5μm，4.6×250mm。

流动相：A：0.5%甲酸水溶液；B：甲醇；

流速：1mL/min；

进样量：5μL；

柱温：35℃；

检测波长：280nm；

梯度洗脱表：见表1。

我们可以看到使用月旭凝胶柱对植物油中9种抗氧化剂净化提取，回收率80-101%，结果满足要求。