离子交换色谱分离蛋白质是根据在一定pH条件下,蛋白质所带电荷不同而进行的分离方法,由基体、配基(离子官能团)和反离子三部分组成。填料的物理性质有:
具备合适的颗粒大小和较窄的粒度分布范围;
具备一定的机械强度;
多孔结构,有一定的孔径大小和良好的孔径分布;
填料的溶胀或收缩现象不能超出所允许的限制范围;
亲水性,不会对样品有不可逆吸附。
01 基体
基体是填料中的固体支持物部分,赋予填料一定形状,同时让配基固着或键合在上面形成色谱填料。基体一般是多孔的、有一定刚性的固体颗粒。
无机材料比如硅胶和多孔玻璃类基体,耐压高、孔径可控、可制备高效填料,但由于易使蛋白质失活和大孔硅胶价格昂贵而主要用于分析。
有机材料的基体分两类:高分子聚合物和聚多糖类。高分子聚合物主要包括苯乙烯和二乙烯基苯聚合物、聚甲基丙烯酸酯和聚酰胺,耐压较高,但疏水性强,孔径不好控制,一般不用于蛋白质制备。聚多糖类主要包括纤维素、葡聚糖和琼脂糖,这类基体表面电荷呈中性,有大量羟基,亲水性强,生物相容性好,孔径易控制,制得的填料柱容量大,但机械强度差,经过交联后可以使强度提高。
02 配基(离子官能团)
配基是固定在基体骨架上的功能基团,它是带电荷的基团(强离子交换剂)或是在溶液中可以离解成带电荷基团的官能团(弱离子交换剂)。
①强阴离子交换剂(SAX),如带三J胺基乙基的季铵盐型(简称Q型);
②强阳离子交换剂(SCX),如磺酸基丙基(简称SP);
③弱阳离子交换剂(WCX),如羧甲基(简称CM),在一定的pH范围内可离解成羧基阴离子(-CH2COO-);
④弱阴离子交换剂(WAX),如二乙胺基乙基(简称DEAE),在一定pH范围内可结合质子离解成季氨阳离子[(CH3CH2)2N+H(CH2)2-]。
03 反离子
与带电功能基团带相反电荷,可以移动,能与带电样品分子进行交换的离子称为反离子或抗衡离子(也称为平衡离子)。反离子与固定的带电基团的电荷相反,二者之间以静电力相结合。反离子的存在有两种情况:在强离子交换剂中它已存在;在弱离子交换剂中反离子要在一定的pH溶液中才离解形成。
04 月旭离子交换层析介质
Q/SP/DEAE/CM Tanrose FF快流速琼脂糖基架离子交换介质
技术参数
以及:
Q/SP Tanrose HP高分辨率琼脂糖基架离子交换介质;
Q/SP Tanrose XL高载量琼脂糖基架离子交换介质;
Q/SP Tanrose BB大颗粒琼脂糖基架离子交换介质;
Solid Q/S/DEAE高刚性琼脂糖基架离子交换介质;
Solid Q/SP Mustang高分辨率刚性琼脂糖基架离子交换介质;
Solid MMC复合型弱阳离子交换介质;
Solid MIX A复合型强阴离子交换介质;
Solid MMC/MIX A Mustang高分辨率复合型离子交换介质;
DEAE/CM Tandex葡聚糖基架离子交换介质。
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