月旭层析填料选择指南（一）

对于疫苗，相比大家都不陌生，历史上许多疑难杂症最终彻底解决都是凭借着接种疫苗，大家所熟知的天花也是如此。面对全球范围愈演愈烈的新冠疫情，几乎地球上的七十亿人都在翘首期盼着疫苗的到来。

要生产疫苗，必不可少的一步就是疫苗的纯化。纯化前首先需要测定生物分子的各物理和化学特性，然后通过实验选择出zui有效的纯化流程。

月旭科技作为分析科学技术解决方案供应商，能够提供各种蛋白纯化填料，满足疫苗、重组蛋白、单抗、抗体及抗原、肽类、病毒、生化分子等分离纯化。

各位小伙伴也许对如何选择合适的蛋白纯化填料总是一头雾水，在这里就根据小伙伴们的样品，来给各位做一个介绍。

1 《疫苗纯化――病毒类疫苗纯化》

凝胶过滤介质Tanrose 4Fast Flow 或Tanrose 6Fast Flow是经典的病毒类疫苗纯化方法，可以去除培养基中的杂蛋白、处理量大、快速的特点。柱高一般40-70cm，上样量一般为10-15%。目前使用此方法生产的疫苗品种有：乙肝、狂犬、出血热、流感等。

2 《纯化――单抗、抗原》

单抗多为IgG。来源主要是腹水和融合瘤培养上清液。腹水有大量白蛋白、转铁蛋白和宿主抗体等。Protein G和Protein A对IgG的Fc区有专一性亲和作用，能一步纯化各种不同来源的IgG。重组Protein A对IgG有较高的载量和专一性，基团脱落更少。脱落的rProtein A 用离子交换Q Tanrose HP凝胶即可很容易去除。

血清互补剂如小牛血清可先用Protein G预处理，在培养前除去IgG。

疏水层析苯基-琼脂糖凝胶HP亦很适合纯化IgG。可有效去除抗体中的聚集体。

纯化IgG 抗原zui有效的方法是用活化偶联介质如CNBr、NHS activated 琼脂糖凝胶偶联IgG,再进一步获取IgG 抗原。

3《纯化――重组蛋白》

重组蛋白在设计和构建的时候应该已经考虑到了纯化的问题。在此，我们提供二个快速表达、一步纯化的融合系统。

一、HiS标签重组蛋白可以很方便用镍IDA琼脂糖凝胶FF（Ni Tanrose 6FF IDA）或镍NTA琼脂糖凝胶FF（Ni Tanrose 6FF NTA）分离，填料已经螯合好了镍离子，使用非常方便，有更高的吸附载量，特异性更强，可以选择多种洗脱方式，是纯化这类融合蛋白的zui佳工具，也可以选择HP级别高分辨率的填料。

二、GST融合蛋白在表达时同时表达了谷胱甘肽s转酶，很方便用GST琼脂糖凝胶FF（GST Tanrose 4FF）分离，然后再用肠激酶或凝血酶等酶解就得到表达的产物。凝血酶可以用肝素琼脂糖凝胶FF（Heparin Tanrose 6FF）或苯甲脒琼脂糖凝胶FF（Benzamidine Tanrose 4FF）分离。

4《纯化――血浆蛋白》

阴离子交换在血浆蛋白的纯化中应用非常广泛，结合低温乙醇法在丙种球蛋白纯化后期用DEAE-琼脂糖凝胶FF（DEAE Tanrose  6FF）吸附二聚体等杂质从而达到提高产品纯度的目的，同样也可以在白蛋白纯化过程中使用阴离子交换吸附PKA、微量的IgG以及聚体，在凝血VIII因子纯化过程中使用大孔径的Q琼脂糖凝胶（Solid Q）可以增加载量和回收率。